Бак гидроаккумулятор Wester WAV-80
Система отопления на основе воды имеет определенную емкость. Внутреннее гидравлическое давление в замкнутой системе, наполненной жидкостью, при увеличении температуры воды стремится к расширению. Завышенное давление в системе отопления может привести к выходу из стоя отдельных частей такой системы отопления. Для предотвращения этой ситуации в системах водяного отопления используется расширительный бак. Крайне редко его называют демпфер.
Функции расширительных баков в водяных системах отопления:
- Прием лишнего (увеличенного) объема воды в системе отопления. Лишняя “вода” образуется за счет расширения при нагревании. Таким образом, для сохранения в системе нужного давления используется расширительный бак.
- Когда происходит обратный процесс – понижение температуры в системе отопления, мембранный расширительный бак возмещает системе необходимое количество воды. Если же в системе отопления образуются незначительные утечки, мембранный расширительный бак поможет системе восполнять необходимое количество жидкости.
- Вывод лишней воды из переполненной системы отопления. Эта функция доступна для мембранных расширительных баков открытого типа.
- Сбор воздуха, образующегося при нагревании воды, в котле отопления.
Типы мембранных баков для систем отопления
Мембранный бак открытого типа – бак, дно которого соединено с трубой системы отопления. Уровень воды в нем зависит от объема жидкости в системе. Чем вода горячее, тем больше ее объем. Открытые мембранные расширительные баки размещают над верхней точкой системы отопления, как правило, в чердачном помещении дома, при этом мембранные баки для отопления, уменьшая потери тепла через стенки, теплоизолируют.
Мембранный бак закрытого типа – металлический герметичный бак, выполненный в виде овала и шара. Внутри таких мембранных расширительных баков расположена мембрана, выполненная из термостойкой резины, которая в свою очередь разделяет данный бак на две равные части (камеры), одна из них выполняет роль воздушной камеры, вторая – роль водяной. Мембранные расширительные баки закрытого типа имеют ряд значительных отличий от баков отрытого типа. В мембранном баке закрытого типа нет контакта воды с воздухом, за счет чего не происходит испарения и окисления. Это очень важно для обеспечения долговечной работы всех элементов системы отопления. Очевидным плюсом мембранных расширительных баков закрытого типа является их герметичность. Если используются такие мембранные баки для отопления, то вода из бака никогда не выльется наружу и не принесет вреда интерьеру помещения.
Оставить отзыв
WESTER WAV 80 Гидроаккумулятор (мембранный расширительный бак) 80 литров, вертикальный
Торговая марка WESTER принадлежит группе компаний «Импульс».
2007 г. – начато строительство завода по производству гидроаккумуляторов
В 2007 году в пос. Балакирево (Александровский район Владимирской обл.) был приобретен заводской комплекс, и начата реконструкция помещений общей площадью более 14 000 м2. За 1,5 года была проведена полная реконструкция производственных площадей, смонтировано новейшее уникальное производственное оборудование ведущих европейских производителей. На 1 августа 2009 года штат завода составлял 80 человек; с 1 июня 2009 года завод перешел на круглосуточный выпуск продукции. Производственная мощность завода увеличивалась с 5000 шт./мес. на 1 января 2009 года до 10000 шт./мес. к марту, 15000 шт./мес. к июню и до 25000 шт. ежемесячно начиная с августа месяца 2009 года.
ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ
2008 г. начало продаж мембранных баков «Wester» сделанных в России
2007 г. выход новой линейки циркуляционных насосов Wester в классе «Эконом»; годовой объем продаж составил более 27 000 шт.
2006 г. Wester Heating Russia добилась значительного расширения географии поставок и ассортиментного ряда; наладила прочные деловые отношения с концернами Великобритании, США, Германии, Австрии, Швейцарии, Италии
2004 г. начало продаж циркуляционных насосов «Wester», производства компании «Vortex» (Германия)
2002 г. начало продаж котлов «Wester Gross», производства чешской компании «Sime»
2001 г. начало продаж котлов «Wester Eco» («Leiber», Словения)
2000 г. начало продаж металлопластиковой трубы «Wester line» (Германия, «Frankishe»)
1998 г. начало продаж мембранных баков «Wester», производства итальянской компании «Aqua-system»
1996 г. продажа горелок под маркой «Wester Line» превысила 1 200 шт.
1995 г. начало продаж накопительных водонагревателей «Wester Line» производства итальянской компании «Lametal»
1995 г. начало продаж горелочных устройств «Wester Line», производства итальянской компании «Baltur»
Мембранные баки
Серия WDV
Баки применяют в магистралях горячего водоснабжения для компенсации температурного расширения воды и в гелиосистемах для компенсации температурного расширения воды. Материал корпуса- сталь; материал мембраны — EPDM; максимальное рабочее давление – 12 бар, диапазон рабочих температур +1…+ 110°С.
| Модель | Объем, л | Макс. давление, бар | Давление воздушной полости, бар | Диаметр, мм | Высота, мм | Масса, кг | Диаметр штуцера |
WDV 8 | 8 | 12 | 1,5 | 200 | 311 | 1,65 | 3/4″ | |
WDV 12 | 12 | 12 | 1,5 | 280 | 307 | 2,20 | 3/4″ | |
WDV 18 | 18 | 12 | 1,5 | 280 | 402 | 2,95 | 3/4″ | |
WDV 24 | 24 | 12 | 1,5 | 280 | 504 | 4,45 | 3/4″ | |
WDV 35 | 35 | 12 | 1,5 | 365 | 453 | 6,25 | 3/4″ |
Серия WRV
Баки предназначены для компенсации температурных расширений теплоносителя в замкнутых системах отопления. Материал корпуса- сталь; материал мембраны — EPDM; максимальное рабочее давление – 10 бар, диапазон рабочих температур -10…+ 100°С.
РазвернутьМодель | Объем, л | Давление воздушной полости, бар | Диаметр, мм | Высота, мм | Масса, кг | Диаметр штуцера | |||
WRV 8 | 8 | 5 | 1,5 | 200 | 311 | 1,55 | 3/4″ | ||
WRV 12 | 12 | 5 | 1,5 | 280 | 307 | 2,10 | 3/4″ | ||
WRV 18 | 18 | 5 | 1,5 | 280 | 402 | 2,80 | 3/4″ | ||
WRV 24 | 24 | 5 | 1,5 | 280 | 504 | 4,25 | 3/4″ | ||
WRV 35 | 35 | 5 | 1,5 | 365 | 453 | 5,95 | 3/4″ | ||
WRV 50 | 50 | 5 | 1,5 | 365 | 555 | 7,75 | 3/4″ | ||
WRV 80 | 80 | 5 | 1,5 | 410 | 690 | 11,15 | 3/4″ | ||
WRV 100 | 100 | 5 | 1,5 | 495 | 680 | 13,25 | 1″ | ||
WRV 150 | 150 | 5 | 1,5 | 495 | 960 | 17,20 | 1″ | ||
WRV 200 (top) | 200 | 10 | 1,5 | 585 | 1037 | 32,4 | 11/4« | ||
WRV 300 (top) | 300 | 10 | 1,5 | 660 | 1179 | 40,3 | 11/4« | ||
WRV 500 (top) | 500 | 10 | 1,5 | 780 | 1399 | 55,5 | 11/4« | ||
WRV 750 | 750 | 10 | 4 | 780 | 1880 | 86,0 | 1 1/4″ | ||
WRV 1000 | 1000 | 10 | 4 | 780 | 2280 | 104,0 | 1 1/4″ | ||
WRV 1500 | 1500 | 10 | 4 | 960 | 2380 | 240,0 | 2″ | ||
WRV 2000 | 2000 | 10 | 4 | 1100 | 2520 | 375,0 | 21/4« | ||
WRV 3000 | 3000 | 10 | 4 | 1200 | 2800 | 550,0 | 3″ | ||
WRV 4000 | 4000 | 10 | 4 | 1450 | 3100 | 655,0 | 3″ | ||
WRV 5000 | 5000 | 10 | 4 | 1450 | 3720 | 830,0 | 3″ | ||
WRV 10000 | 10000 | 10 | 4 | 1600 | 5750 | 1920,0 | DN 100 |
Серия WAV
Гидроаккумуляторы предназначены для поддержания рабочего давления в системе водоснабжения, предотвращения разрушения системы от гидравлического удара, уменьшения количества включений- выключений насоса и компенсации температурного расширения воды в системе ГВС.
Модель | Объем, л | Макс. давление, бар | Давление воздушной полости, бар | Диаметр, мм | Высота, мм | Масса, кг | Диаметр штуцера | |
WAV 8 | 8 | 10 | 1,5 | 200 | 311 | 1,55 | 3/4″ | |
WAV 12 | 12 | 10 | 1,5 | 280 | 307 | 2,10 | 3/4″ | |
WAV 18 | 18 | 10 | 280 | 402 | 2,80 | 3/4″ | ||
WAV 24 | 24 | 10 | 1,5 | 280 | 504 | 4,25 | 3/4″ | |
WAV 35 | 35 | 10 | 1,5 | 365 | 453 | 5,95 | 3/4″ | |
WAV 50 | 50 | 10 | 1,5 | 365 | 691 | 9.20 | 3/4″ | |
WAV 80 | 80 | 10 | 1,5 | 410 | 807 | 11.60 | 3/4″ | |
WAV 100 | 100 | 10 | 1,5 | 495 | 787 | 15.10 | 1″ | |
WAV 150 | 150 | 10 | 1,5 | 495 | 1059 | 18.40 | 1″ | |
WAV 200 (top) | 200 | 10 | 1,5 | 580 | 1120 | 32,4 | 11/4« | |
WAV 300 (top) | 300 | 10 | 1,5 | 660 | 1170 | 40,3 | 11/4« | |
WAV 500 (top) | 500 | 10 | 1,5 | 780 | 1390 | 55,5 | 11/4« | |
WAV 750 | 750 | 10 | 4 | 780 | 1880 | 86,0 | 1 1/4″ | |
WAV 1000 | 1000 | 10 | 4 | 780 | 2280 | 104,0 | 1 1/4″ | |
WAV 1500 | 1500 | 10 | 4 | 960 | 2350 | 240,0 | 2″ | |
WAV 2000 | 2000 | 10 | 4 | 1100 | 2450 | 375,0 | 21/4« | |
WAV 3000 | 3000 | 10 | 4 | 1250 | 2700 | 550,0 | 3″ | |
WAV 4000 | 4000 | 10 | 4 | 1450 | 3100 | 655,0 | 3″ | |
WAV 5000 | 5000 | 10 | 4 | 1450 | 3720 | 830,0 | 3″ | |
WAV 10000 | 10000 | 10 | 4 | 1600 | 5750 | 1920,0 | DN 100 |
Серия WAO
Гидроаккумуляторы предназначены для поддержания рабочего давления в системе водоснабжения, предотвращения разрушения системы от гидравлического удара, уменьшения количества включений- выключений насоса и компенсации температурного расширения воды в системе ГВС.
Материал корпуса- сталь; материал мембраны- EPDM; максимальное рабочее давление – 10 бар, диапазон рабочих температур +1…+ 100°С.
Модель | Объем, л | Макс. давление, бар | Давление воздушной полости, бар | Диаметр, мм | Высота, мм | Длина, мм | Масса, кг | Диаметр штуцера | |
WAO 24 | 24 | 10 | 1,5 | 280 | 300 | 507 | 5,60 | 1″ | |
WAO 50 | 50 | 10 | 1,5 | 365 | 374 | 572 | 9,40 | 1″ | |
WAO 80 | 80 | 10 | 1,5 | 410 | 427 | 704 | 13,20 | 1″ | |
WAO 100 | 100 | 10 | 1,5 | 495 | 517 | 730 | 16,30 | 1″ | |
WAO 150 | 150 | 10 | 1,5 | 945 | 517 | 1000 | 21,5 | 1″ | |
САУН-24
Система автоматического управления насосом САУН-24л предназначена для автоматического управления жидкостными электронасосами, контроля и поддержания заданного давления в системе водоснабжения. Автоматическое включение электронасосов для водоснабжения при открытии и закрытии крана. Снабжена 24 литровым мембранным баком.
Развернуть1. Мембранный расширительный бак для водоснабжения 24 л. |
2. Реле давления |
3. Манометр |
4. Присоединение к насосу |
Модель | САУН — 24л |
Присоединение к насосу | 3/8″ наружная цилиндрическая резьба |
Рабочий диапазон регулирования давления, бар | 1,0-5,6 |
Ток, А | 10 |
Напряжение, В/Гц | 220/50 |
Рабочая среда | Вода |
Максимальная температура жидкости, °С | 40 |
Заводская настройка | |
Нижний предел включения, бар | 1,4 |
Верхний предел включения, бар | 2,8 |
Класс защиты | IP54 |
Минимальный перепад давления, бар | 1 |
Объем бака, л | 24 |
Максимальное рабочее давление, бар | 6 |
Предварительное давление в воздушной полости, атм | 1,5 |
Группа подключения мембранного бака
Универсальная настенная консоль для надежного крепления мембранного расширительного бака объемом до 50 литров предназначенная для защиты отопительной системы с теплопроизводительностью котла до 50 кВт от превышения максимально допустимого рабочего давления
РазвернутьВ состав группы подключения мембранного бака входят:
1. консоль
2. быстроразхемного соединение (для автоматического запирания при отсоединении мембранного бака)
3. манометр
4. отсекающий клапан
5 предохранительный клапан на 3 бара
6. переходник
7. автоматический воздухоудалитель
8. отсекающий клапан
Комплект крепления для мембранных баков 8-35
Комплект крепления для мембранных баков предназначен для настенного крепления баков Wester объемом до 35 л.
РазвернутьМаксимально допустимый вес бака — 40 кг.
Максимально допустимый диаметр бака — 365 мм.
В состав комплекта входят:
— кронштейн;
— стальная лента со стягивающим механизмом;
— дюбель — 2 шт.;
— саморез — 2 шт.
Мембранные расширительные баки Wester WAV
Основные характеристики оборудования Мембранные расширительные баки Wester WAV
Вид оборудования:
мембранные расширительные баки
Назначение:
для водоснабжения
Давление:
10 бар
Гарантия:
1 год
Происхождение бренда:
РоссияОценка покупателей:
Стоимость:
от 1950 до 215940
Напечатать
Добавить в закладки
Добавить в сравнения
Нужен совет? Позвоните нам!
+7 (812) 401-66-31 (многоканальный) или
+7 (800) 333-56-06 (бесплатный по России)
Цены на оборудование Мембранные расширительные баки Wester WAV
Информация об оборудовании Мембранные расширительные баки Wester WAV
Мембранные расширительные баки Wester WAV – это вертикальные гидроаккумуляторы для систем водоснабжения, предназначенные для поддержания рабочего давления в системе водоснабжения, предотвращения разрушения системы от гидравлического удара, уменьшения количества включений и выключений насоса. Объем баков от 8 л до 1000 л.
Технические особенности:
- Модели WAV 50-500 выполнены на стойках, модели WAV 100-500 имеют штуцер для подсоединения дополнительных устройств
- Баки свыше 750 литров комплектуются манометрами
- Корпус бака из прочной высококачественной стали
- Внешнее покрытие эпоксилолиэфирной краской
- Мембрана из каучука EPDM
Габаритный чертеж временно отсутствует
{{/if}} {{if IsHit}}ХИТ
{{/if}} {{if IsNova}}NEW
{{/if}} {{/if}}${Name}
Товаров ${CountArticul}
Мембранный бак для водоснабжения WESTER WAV 80 л
Напишите WhatsAPP
+7 (863) 226-10-76
Ростов-на-Дону, пр.Стачки, 63+7 (861) 290-91-00
Краснодар, ул.Новороссийская, 250/1+7 (862) 291-03-33
Сочи (доставка)+7 (989) 624-33-16
Крым (доставка)
Страница не найдена – Уютно и Тепло
ВсеАнтифриз (8)Баки, ёмкости и септики (58) Аксессуары для баков (14) Пластиковые баки для воды (5) Пластиковые баки для топлива (5) Расширительные баки для ГВС (5) Расширительные баки для отопления (12) Расширительные баки для холодной воды (17)Водонагреватели (141) Бойлеры косвенного нагрева (22) ACV (5) Hajdu (12) Nibe (4) Protherm (1) Буферные ёмкости (1) Комплектующие (9) Накопительные газовые водонагреватели (6) Накопительные электрические водонагреватели (78) Ariston (57) Superlux (1) Thermex (15) Проточные газовые водонагреватели (8) Ariston (5) Bosch (2) Vaillant (1) Проточные электрические водонагреватели (17) Stiebel Eltron (15)Водоподготовка и фильтры (209) Установки очищающие (99) Комплектующие (60) Системы обратного осмоса (20) Установки умягчения (4) Фильтры под раковину (15) Фильтры для водоснабжения (110) Картриджи (89) Atoll (37) Комплектующие (3) Корпуса (18)Дымоходы (7) Protherm (3) Viessmann (4)Запорно-терморегулирующая арматура (209) Вентили (16) Retro (8) Группы безопасности (1) Группы быстрого монтажа (19) Клапаны и воздухоотводчики (2) Клапаны регулирующееся (17) Коллекторные группы (23) Te-sa (22) Комплектующие (1) Коллекторы для водоснабжения (3) Манометры и термометры (1) Приборы учёта (1) Редуктора давления (12) Сетчатые фильтры (36) Сетчатые фильтры комплектующие (13) Смесительные узлы (2) Узлы нижней подводки (5) Шаровые краны (41) Краны с американкой Bugatti (11) Краны с американкой Valtec (2) Краны шаровые Bugatti (26) Краны шаровые Valtec (2) Шкафы коллекторные (14)Защита от протечек воды “Нептун” (30) Беспроводные системы контроля протечек (3) Комплектующие защиты от протечек (20) Проводные системы контроля протечек (7)Конвекторы водяные и газовые (32) Водяные встраиваемые (18) Водяные напольные (6) Газовые (8)Котлы (130) Аксессуары для котлов (12) Газовые котлы (27) Напольные котлы (13) Protherm (13) Настенные котлы (14) Protherm (5) Vaillant (2) Viessmann (7) Твердотопливные котлы (2) Protherm (2) Электрические котлы (89) Protherm (6) ThermoTrust (23) Руснит (20) Рэко (5) Эван (35)Насосы (150) Автоматика и принадлежности (19) Дренажные и фекальые насосы (21) Grundfos (15) Джилекс (6) Канализационные установки (5) Grundfos (5) Колодезные насосы (9) Grundfos (6) Джилекс (3) Оголовки скважинные (6) Поверхностные насосные станции (15) Grundfos (3) Поверхностные насосы (12) Grundfos (4) Джилекс (8) Повысительные насосы (2) Grundfos (1) Wester (1) Рециркуляционные насосы (4) Grundfos (4) Скважинные насосы (27) Aquario (3) Grundfos (15) Джилекс (9) Циркуляционные насосы (30) Aquario (4) Grundfos (20) Wester (6)Обогреватели (11) Конвекторы (11) AEG (4) Stiebel Eltron (7)Полотенцесушители (8) Электрические (8) Devi (8)Радиаторы отопления (376) Алюминиевые радиаторы (15) Rifar Alum (11) Rifar Alum Ventil (4) Биметаллические радиаторы (126) Rifar Alp (6) Rifar Alp Ventil (12) Rifar Base (5) Rifar Base Ventil (24) Rifar Monolit (36) Rifar Monolit Ventil (30) Sira rs (13) Комплектующие для радиаторов (60) Стальные панельные радиаторы (62) Axis Classic 11 тип (10) Axis Classic 22 тип (21) Axis Ventil 11 тип (10) Axis Ventil 22 тип (21) Трубчатые радиаторы (85) Tesi боковое подкл. (59) Tesi нижнее подкл. (25) Чугунные радиаторы (28) Retro Style (28)Стабилизаторы (21)Теплоизоляция и гофра (33)Тёплый пол электрический (49) Кабели (14) Крепежные элементы и комплектующие (2) Маты (22) Терморегуляторы (10)Трубы и фитинги (338) Rehau канализация (46) Rehau сшитый полиэтилен трубы (14) Rehau фитинги (127) Гильзы Rehau (5) Инструмент Rehau (11) Иные фитинги (18) Маты и крепления Rehau (4) Муфты Rehau (5) Муфты комбинированные Rehau (15) Муфты переходные Rehau (5) Муфты переходные с накидной гайкой Rehau (6) Резьбозажимные фитинги Rehau (7) Тройники Rehau (4) Тройники переходные Rehau (24) Трубы для радиаторов (подводка) Rehau (3) Угольники 90 Rehau (4) Угольники комбинированные Rehau (16) Tebo полипропилен трубы (16) Tebo полипропилен фитинги (94) Инструмент (6) Краны и вентиля (5) Крепления, опоры, клипсы (3) Муфты (4) Муфты комбирированные (25) Муфты переходные (7) Муфты с накидной гайкой (4) Обводные колена (6) Тройники (3) Тройники комбинированные (8) Тройники переходные (9) Угольники 45 (3) Угольники 90 (4) Угольники комбинированные (7) Valtec металл фитинги (38) Американки сгоны (3) Заглушки (1) Муфты (3) Муфты переходные (3) Ниппели (4) Ниппели переходные (3) Тройники (4) Тройники переходные (3) Угольники 90 (9) Футорки (5) Джилекс ПНД (3) Труба (3)
Мембранный бак Wester Wav 80
Чтобы получить самые низкие цены на расширительные баки Wester скидывайте заявки на [email protected] либо звоните по бесплатному номеру 8 (800) 200-61-57
Цена указанная на мембранные баки Wester не конечная. Она может двигаться в меньшую сторону в зависимости от вашей заявке. Главные факторы это количество позиций в заявке, место и сроки доставки. Так как склады наших партнеров расположены по всей России, это значительно снижает стоимость доставке, так как мы отсылаем груз со склада, который расположен ближе всего к вашему местонахождению.
Мембранный бак Wester WAV 80
Мембранный бак Wester WAV 80 предназначены для поддержания рабочего давления в системе водоснабжения, предотвращения разрушения системы от гидравлического удара, уменьшения количества включений- выключений насоса и компенсации температурного расширения воды в системе ГВС. Основными элементами мембранного бака является металлический корпус из высококачественной стали глубокой вытяжки и эластичная мембрана из ЕPDМ, разделяющая бак на две камеры — воздушную (полость между металлическим корпусом и мембраной) и водяную (внутренняя полость самой мембраны). Воздушная камера постоянно находится под предварительно установленным давлением воздуха Срок службы баков мембранных – не менее 10 лет непрерывной работы. Стойкость мембраны – не менее 100 000 циклов. В качестве краски используются материалы фирмы Dupont (Франция). Контрфланец выполнен из нержавеющей стали.
Расширительные баки Wester WAV 80 применяются для:
- Поддержания постоянного давления в системе;
- Уменьшения количества включений-выключений насоса;
- Защиты системы от гидравлического удара;
- Для компенсации температурного расширения теплоносителя;
Преимущества гидроаккумулятора wester wav 80:
- Все баки оснащены сменной мембраной;
- Срок службы – до 100 000 циклов;
- Давление в воздушной полости баков от 8 до 150л – 1,5 бара, от 750 до 10 000л –4бара;
- Баки от 200 до 10 000 литров могут изготавливаться в специальном исполнении 16 бар, 25 бар.
Как купить мембранный бак wester wav 80 ?
1) Вы отправляете заявку нам в ООО “ТОРГСВ” на E-mail или оставляете заявку по телефону, через официальный сайт компании.
2) Мы направляем Вам коммерческое предложение с указанием цены, срока доставки на запрашиваемое оборудование.
3) После согласование цены и условий доставки – мы выставляем Вам счет.
4) После оплаты счета, мы доставляем Вам оборудование в оговоренные сроки.
Модель | WAV 80 |
Объем, л. | 80 |
Макс. давление, бар | 10 |
Давление воздушной полости, бар | 1,5 |
Диаметр, мм | 410 |
Высота, мм | 807 |
Масса, кг | 11,60 |
Диаметр штуцера | 3/4″ |
Методы переноса вестерн-блоттинга | Thermo Fisher Scientific
Перенос белка является жизненно важным этапом вестерн-блоттинга, который включает перенос белков, разделенных в геле с помощью электрофореза, на твердую опорную матрицу. Иммобилизация белка на твердой опорной матрице облегчает обнаружение специфических белков с использованием антител, направленных против представляющего интерес белка (белков). Типичными твердыми матрицами являются мембранные листы из нитроцеллюлозы, ПВДФ или нейлона. В этой статье рассматриваются и сравниваются методы переноса, рассматриваются свойства мембран и причины выбора одного из них, а также приводятся рецепты различных буферов для переноса, используемых при переносе вестерн-блоттинга.
Ознакомьтесь с системами переноса Загрузить техническое руководство по вестерн-блоттингу
Введение
Вестерн-блоттинг белков был введен Towbin et al. в 1979 году и в настоящее время является рутинным и основным методом анализа белков. Вестерн-блоттинг, также называемый белковым блоттингом или иммуноблоттингом, использует антитела для идентификации специфических белковых мишеней, связанных с мембраной; специфичность взаимодействия антитело-антиген позволяет идентифицировать белок-мишень среди сложной белковой смеси, такой как лизат клеток или тканей.Вестерн-блоттинг можно использовать для получения качественных и полуколичественных данных об интересующем белке.
Основные этапы западного рабочего процесса: разделение, передача и обнаружение.
Первым этапом процедуры вестерн-блоттинга является разделение белков в образце по размеру с помощью электрофореза в денатурирующем геле (например, электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия или SDS-PAGE) или нативного PAGE. После электрофореза разделенные белки переносятся или «промакиваются» на твердую опорную матрицу, обычно мембрану из нитроцеллюлозы или поливинилидендифторида (ПВДФ).В процедурах, где разделение белков не требуется, образец можно наносить непосредственно на мембрану путем нанесения пятен с использованием подхода, называемого дот-блоттингом.
Перенос белка из геля на мембрану необходим по двум причинам:
- Лучшая управляемость мембраны по сравнению с хрупким гелем
- Лучшая доступность целевого белка на мембране для макромолекул, таких как антитела
После переноса мембрана должны быть заблокированы для предотвращения неспецифического связывания антитела с поверхностью мембраны.Затем перенесенный белок последовательно исследуют с помощью антител и детектирующего зонда (например, фермента, флуорофора, изотопа). Затем используется соответствующий метод для обнаружения локализованного зонда для документирования местоположения и относительной численности целевого белка.
В дополнение к проблемам иммунодетекции в рабочем процессе блоттинга белков потенциальным препятствием является перенос белков из гелевой матрицы на мембрану. На эффективность переноса белка могут влиять химический состав, толщина геля, молекулярная масса переносимых белков, тип используемых мембран и буферов для переноса, а также метод переноса.
Способы передачи
Существует множество методов переноса, включая диффузионный перенос, капиллярный перенос, конвекционный перенос с ускорением нагрева, вакуумный блоттинг и электроблотинг (электроперенос). Среди этих методов электроблоттинг стал самым популярным и широко используемым для вестерн-блоттинга, потому что он быстрее и эффективнее других методов. Существует три способа электропереноса белков из SDS-PAGE или нативных гелей на мембраны:
Электроблоттинг
Методы электроблотинга или электропереноса основаны на электрофоретической подвижности белков для их перемещения из геля.Эти методы включают помещение содержащего белок полиакриламидного геля в непосредственный контакт с куском нитроцеллюлозной мембраны, мембраны PVDF или другой подходящей подложкой, связывающей белок. Затем пара гель-мембрана «зажата» между двумя электродами, которые обычно погружаются в проводящий раствор (буфер для переноса). При приложении электрического поля белки выходят из геля на поверхность мембраны, где они прочно прикрепляются. Полученная мембрана является копией белкового рисунка, который был в полиакриламидном геле.
Схема вестерн-блоттинга переноса белков из полиакриламидного геля на мембрану.
Влажный перенос или перенос в резервуаре
При выполнении влажного переноса гель сначала уравновешивается в буфере для переноса. Затем гель помещают в «переносной сэндвич» (фильтровальная бумага-гель-мембрана-фильтровальная бумага), амортизирующий прокладками и прижимаемый друг к другу опорной сеткой. Поддерживаемый гель-сэндвич помещают вертикально в бак между проволочными электродами из нержавеющей стали/платины, и бак заполняют буфером для переноса.
Электроперенос нескольких гелей может осуществляться в стандартном полевом варианте, который выполняется либо при постоянном токе (от 0,1 до 1 А), либо при напряжении (от 5 до 30 В) от 1 часа до ночи. Для переноса одного геля существует вариант сильного поля, который может сократить время переноса до 30 минут, но требует использования высокого напряжения (до 200 В) или сильного тока (до 1,6 А) и охлаждения. система для рассеивания огромного количества выделяемого тепла.
Эффективность переноса 80–100% достижима для белков в диапазоне 14–116 кДа.Эффективность переноса улучшается с увеличением времени переноса и, как правило, лучше для белков с более низкой молекулярной массой, чем для белков с более высокой молекулярной массой. Однако с увеличением времени возникает риск избыточного переноса (отслоения, продувки) белков через мембрану, особенно для белков с более низкой молекулярной массой (<30 кДа) при использовании мембран с большим размером пор (0,45 мкм). .
Щелкните изображение, чтобы увеличить
Рабочий процесс влажного/резервуарного электропереноса белка для вестерн-блоттинга.
Схема, показывающая сборку типичного аппарата для переноса в резервуаре для вестерн-блоттинга с указанием положения геля, мембраны для переноса и направления белка по отношению к положению электрода.
Смотреть: Как выполнить вестерн-влажный перенос с помощью модуля Invitrogen Mini Blot Module
Исследовать: Системы для влажного переноса в резервуарах перенос, переносной сэндвич помещается горизонтально между двумя пластинчатыми электродами.Скорость переноса улучшена по сравнению с резервуаром для мокрой воды благодаря максимальному току, проходящему через гель, а не вокруг него. Для этого количество буфера, используемого при передаче, ограничено тем, что содержится в сэндвиче передачи. В этом методе очень важно, чтобы листы мембраны и фильтровальной бумаги были нарезаны по размеру геля без выступов, а гель и фильтровальная бумага были тщательно уравновешены в буфере для переноса. Обычно используется очень толстая фильтровальная бумага (толщиной примерно 3 мм), чтобы удерживать больше буфера для переноса.
Метанол может быть включен в буфер для переноса, но обычно не используется. Электроперенос осуществляется либо при постоянном токе (от 0,1 до ~ 0,4 А), либо при напряжении (от 10 до 25 В) в течение от 10 до 60 минут. Методы быстрого блоттинга используют буферы для переноса с более высокой ионной силой без метанола и сильноточный источник питания для сокращения времени переноса менее чем на 10 минут. В экспресс-методах сила тока поддерживается постоянной, а напряжение ограничивается максимальным значением 25 В.
Полусухой электроблот-перенос. Invitrogen Power Blotter разработан специально для быстрого полусухого переноса белков с молекулярной массой 10–300 кДа из полиакриламидных гелей на нитроцеллюлозные или ПВДФ-мембраны за 5–10 минут. Power Blotter оснащен встроенным источником питания, оптимизированным для обеспечения последовательного и высокоэффективного переноса белка при использовании с обычно используемыми сборными или самодельными гелями (SDS-PAGE) и мембранами из нитроцеллюлозы или PVDF.
Смотреть: Как выполнить вестерн-блот полусухой перенос с помощью Invitrogen Power Blotter
Изучить: Системы полусухого переноса содержащие инновационные компоненты, исключающие использование традиционных буферов передачи.Вместо буферных емкостей или пропитанной фильтровальной бумаги используется уникальная гелевая матрица (переносной стек), содержащая буфер. Высокая ионная плотность гелевой матрицы обеспечивает быстрый перенос белка. Во время блоттинга медный анод не выделяет газообразный кислород в результате электролиза воды, что снижает искажение блотов. Обычные методы переноса белка, в том числе влажные и полусухие, используют инертные электроды, генерирующие кислород. Как правило, время переноса сокращается за счет укороченного расстояния между электродами, высокой напряженности поля и высокого тока.Поскольку буферы не нужно подготавливать, время настройки и очистки значительно сокращается по сравнению с другими методами передачи.
Нажмите, чтобы увеличить изображение.
Сухой электроблотинг Система сухого блоттинга Invitrogen iBlot 2 обеспечивает быстрый вестерн-перенос без использования буферов. Эта система эффективно выделяет белки из акриламидных гелей менее чем за 7 минут и совместима как с мембранами из ПВДФ, так и с нитроцеллюлозными мембранами. Система iBlot 2 имеет производительность, сравнимую с традиционными методами влажного переноса, за короткое время.
Смотреть: Как выполнить сухой перенос вестерн-блоттинга с помощью системы сухого блоттинга Invitrogen iBlot 2
Изучить: Система сухого переноса
Сравнение методов переноса вестерн-блоттинга: влажный, полусухой и сухой методы переноса
Эффективный и надежный перенос белка из геля на мембрану для блоттинга является краеугольным камнем успешного эксперимента по западному обнаружению. Точность результатов зависит от эффективности переноса метода вестерн-блоттинга.Традиционный мокрый перенос обеспечивает высокую эффективность, но требует времени и практических усилий. Полусухой блоттинг обеспечивает большее удобство и экономию времени по сравнению с традиционным влажным переносом, с гибкостью использования нескольких типов буферных систем или предварительно собранных или самостоятельных стеков переноса. Однако полусухой перенос может иметь более низкую эффективность переноса белков с большой молекулярной массой (>300 кДа). Сухой электроблотинг обеспечивает как высокое качество переноса в сочетании со скоростью, так и удобство, поскольку для сухого электроблоттинга не требуются дополнительные буферы.
4 4 4 | Сухой трансфер | 2Transfer Time | 30-120 мин | 7-10 мин | 5-7 мин | |
Требования буферов трансфер | Требуется метанол (~ 1000 мл) | БЕСПЛАТНЫХ буферов передачи метанола (~ 200 мл) | без буфера требуется | пропускная способность | + +++++ | + | + |
производительности (эффективность передачи) | +++ | ++ | +++ | |||
Простота использования | ++ | +++ | +++ | |||
Очистка | Обширная очистка после каждого использования, включая утилизацию опасных отходов метанола | Легкая чистка требуется подъем после каждого использования | Минимум при длительном использовании | |||
Особые указания | Для более длительных перемещений может потребоваться охлаждение | Можно использовать несколько методов, включая буферы Towbin |
Сравнение влажного, полусухого и сухого методов переноса.Лизат A431 серийно разбавляли на геле Novex Tris-Glycine 4-20%. Белки переносили с использованием модуля Mini Blot Module в Mini Gel Tank, устройства для переноса iBlot2, Power Blotter и Bio-Rad TransBlot Turbo.
Другие методы переноса
Диффузионный блоттинг
Диффузионный блоттинг основан на тепловом движении молекул, которое заставляет их перемещаться из области высокой концентрации в область низкой концентрации. В методах блоттинга перенос молекул зависит от диффузии белков из гелевой матрицы и абсорбции на мембране для переноса.Поскольку абсорбированные белки «удаляются» из раствора, это помогает поддерживать градиент концентрации, который направляет белки к мембране. Первоначально разработанный для переноса белков из гелей IEF (изоэлектрическое фокусирование), диффузионный блоттинг также полезен для других макромолекул, особенно нуклеиновых кислот. Диффузионный блоттинг наиболее полезен при подготовке нескольких иммуноблотов из одного геля. Блоты, полученные этим методом, также можно использовать для идентификации белков с помощью масс-спектрометрии и анализа белков с помощью зимографии.Извлечение белка обычно составляет 25–50% от общего переносимого белка, что ниже, чем при других методах переноса. Кроме того, перенос белка не является количественным. Диффузионный блоттинг может быть затруднен для очень крупных белков в гелях SDS-PAGE, но более мелкие белки обычно легко переносятся.
Вакуумный блоттинг (Вакуумный капиллярный блоттинг)
Вакуумный блоттинг представляет собой вариант капиллярного блоттинга, при котором буфер из резервуара всасывается через гель и промокательную мембрану в сухую папиросную бумагу или другой абсорбирующий материал.Вакуумный блоттинг использует систему гелевой сушки пластин или другое подходящее оборудование для сушки геля для переноса полипептидов из геля на мембрану, такую как нитроцеллюлоза. Нельзя использовать мощные насосы, поскольку высокий вакуум может разрушить гель или мембрану для переноса. Гели могут высохнуть через 45 минут в вакууме, что требует большого количества резервного буфера. Гели также имеют тенденцию прилипать к мембране после переноса, но регидратация геля может облегчить отделение.
Эффективность переноса вакуумного блоттинга колеблется в диапазоне от 30 до 65 % с низкомолекулярными белками (14.3 кДа) в верхней части этого диапазона эффективности и высокомолекулярные белки (200 кДа) в нижней части. Как и диффузионный блоттинг, вакуумный блоттинг обеспечивает только качественный перенос.
Условия переноса вестерн-блоттинга
В зависимости от используемого метода передачи напряжение и время, используемые для передачи, будут различаться. Ниже приведены примеры условий, используемых с различными методами передачи. В зависимости от молекулярной массы целевого белка время переноса может быть уменьшено (белки с малой молекулярной массой) или увеличено (белки с высокой молекулярной массой) для более эффективного переноса.
Напряжение и время переноса Вестерн-блоттинга
Блоттинговые мембраны
Наиболее распространенными иммобилизационными мембранами для вестерн-блоттинга являются нитроцеллюлоза, ПВДФ и нейлон. Эти мембраны широко используются, потому что они предлагают:
- Большое отношение площади поверхности к площади объема
- Высокая связывающая способность
- Длительное хранение иммобилизованных макромолекул
- Простота использования
- Возможность оптимизации для низкого фонового сигнала и воспроизводимость
Мембраны для вестерн-блоттинга обычно поставляются в виде листов или рулонов и обычно имеют толщину 100 мкм с типичным размером пор 0.1, 0,2 или 0,45 мкм. Большинство белков можно успешно блоттировать с использованием мембраны с размером пор 0,45 мкм, в то время как для низкомолекулярных белков или пептидов (<20 кДа) рекомендуется использовать мембраны с размером пор 0,1 или 0,2 мкм.
Мембраны из нитроцеллюлозы
Мембраны из нитроцеллюлозы являются популярной матрицей, используемой для белкового блоттинга, благодаря их высокому сродству к связыванию с белками, совместимости с различными методами обнаружения и способности иммобилизовать белки и гликопротеины. Нитроцеллюлозные мембраны также можно использовать для следующих целей: саузерн- и нозерн-блоттинг, анализ аминокислот и дот-/слот-блоттинг.Нитроцеллюлозные мембраны обладают способностью связывать белок 80–100 мкг/см 2 . Считается, что иммобилизация белка происходит за счет гидрофобных взаимодействий, а высокие концентрации соли и низкие концентрации метанола улучшают иммобилизацию белка на мембране во время электрофоретического переноса, особенно для белков с более высокой молекулярной массой. Нитроцеллюлозные мембраны остаются популярным выбором из-за высокой эффективности необратимого связывания белков.
Мембраны из ПВДФ
Мембраны из ПВДФ обладают высокой аффинностью связывания с белками и нуклеиновыми кислотами и могут использоваться для таких приложений, как вестерн, саузерн, нозерн и дот-блоттинг.Мембраны PVDF обладают высокой гидрофобностью и должны быть предварительно смочены метанолом или этанолом перед погружением в буфер для переноса. В этих приложениях связывание, вероятно, происходит через дипольные и гидрофобные взаимодействия. Мембраны из ПВДФ обладают способностью связывания белков 170–200 мкг/см 2 и обеспечивают лучшее удержание адсорбированных белков по сравнению с другими носителями из-за большей гидрофобности. Из-за гидрофобности мембран PVDF они являются предпочтительным выбором для гидрофобных белков (т.д., мембранные белки). ПВДФ менее хрупок и хрупок, чем нитроцеллюлоза, и может быть полезен для экспериментов по вестерн-блоттингу, требующих многократных циклов повторной обработки (процедуры зачистки и повторного зондирования) для различных мишеней с использованием новой комбинации антител.
Нейлоновые мембраны
Заряженные нейлоновые (полиамидные) мембраны связывают белки и нуклеиновые кислоты посредством ионных, электростатических и гидрофобных взаимодействий. Нейлоновые мембраны обладают высокой чувствительностью, обеспечивают стабильные результаты переноса и обладают способностью связывания белка 480 мкг/см 2 .Высокая износостойкость нейлоновых мембран дает преимущества в экспериментах по вестерн-блоттингу, требующих процедур зачистки и повторного зондирования. Существенным недостатком использования нейлоновых мембран для блоттинга является возможность неспецифического связывания и сильного связывания с анионами, такими как SDS.
Сравнение мембран для блоттинга
При выборе мембраны свойства белка (например, заряд, гидрофобность) и последующее применение будут определять, какую мембрану использовать. Поиск оптимальной мембраны может потребовать экспериментов с вашим конкретным белком на разных мембранах.Знание свойств, преимуществ и недостатков каждой мембраны поможет определить наилучший формат для вашего приложения.
развертывающие характеристики | Привязка взаимодействия | Обязательные возможности | Преимущества | Недостатки | |
---|---|---|---|---|---|
могут быть разбиты и выброшены | Гидрофобродные и электростатические | 80-100 мкг / см. 2 2 | тенденция к выставлению нижний фон | может быть хрупким и хрупким, что ограничивает использование в зачистке и перепробовании | |
PVDF | PVDFHydrophobic | 170-200 мкг / см 2 2 | тенденция быть более долговечностью, чем нитроцеллюлоза | ДОЛЖНЫ быть предварительно смачиваться метанолом или этанолом перед использованием | |
NYLON | могут быть разбиты и выброшены | ионные, гидрофобные и электростатические | 480 мкг/см 2 | Высокая износостойкость 90 125 | Более высокое неспецифическое связывание с сильными анионами |
Исследовать: Мембраны для переноса
Буферы передачи
Для влажных методов переноса используется несколько различных буферов переноса.Тип используемого буфера зависит от интересующего белка, гелевой буферной системы и метода переноса.
В большинстве экспериментов SDS исключается из западного буфера для переноса, поскольку отрицательный заряд, сообщаемый белкам, может вызывать их прохождение через мембрану. Как правило, SDS, связанный с белками после разделения SDS-PAGE, достаточно для эффективного переноса их из геля на мембранную подложку. Для белков, склонных к выпадению в осадок, добавление низких концентраций SDS (<0.01%) может быть необходимо. Следует отметить, что добавление SDS в буфер для переноса может потребовать оптимизации других параметров переноса (например, времени, тока) для предотвращения чрезмерного переноса белков через мембрану (также известного как «прорыв»).
Метанол включен в состав большинства буферов для переноса, потому что метанол помогает отделить SDS от белков при разделении с помощью SDS-PAGE, повышая их способность связываться с опорными мембранами. Однако метанол может инактивировать ферменты, необходимые для последующих анализов, и он может сжимать гель и мембрану, что может увеличить время переноса белков с большой молекулярной массой (150 кДа) с плохой растворимостью в метаноле.Однако в отсутствие метанола белковые гели могут набухать в буферах с низкой ионной силой, поэтому рекомендуется предварительно набухать гели в течение от 30 минут до 1 часа, чтобы предотвратить искажение полос.