Alpine Air NGS-50F — газовый конвектор с вентилятором и чугунным теплообменником мощностью 4,9 кВт
Alpine Air NGS-50F – это настенный конвектор, который предназначен для отопления жилых и нежилых помещений с помощью природного или сжиженного газа. Модель осуществляет поддержание определенной температуры в комнате посредством передачи тепла от чугунного теплообменника. Высокая скорость распространения нагретого воздуха достигается за счет вентилятора. Забор воздушных масс и выпуск отработанного воздуха осуществляется через объединенные телескопические трубы. Мощность прибора в 4,9 кВт обеспечивает достаточно быстрое прогревание комнаты и дальнейшее поддержание установленной на панели управления температуры. Конвектор имеет встроенные защиты от замерзания и перегрева, а также исключает проникновение продуктов горения в помещение из-за полной изолированности камеры горения. Модель электронезависима и может функционировать в тех местах, где имеются перебои при подаче электричества. От бытовой сети работает только вентилятор.
Ключевые особенности
- Приятный внешний вид.
- Полная электронезависимость.
- Коаксиальная телескопическая труба.
- Выброс продуктов горения на улицу.
- Не выжигает кислород.
- Чугунный теплообменник.
- Встроенный вентилятор.
- Срок службы до 50 лет.
- Работа от природного газа.
- Перевод на сжиженный газ.
- Электроподжиг от батарейки.
- Автоматическое поддержание температуры.
- Настенное размещение.
- Защита от перегрева.
- Защита от замерзания.
- Плавная регулировка температуры.
- Для помещения до 50 кв.
м.
- Высокий КПД.
- Простой монтаж.
- Высокая экономичность.
Принцип работы
Настенный газовый конвектор Alpine Air NGS-50F предназначен для обогрева помещений различного назначения и является электронезависимым прибором, поскольку обогрев осуществляется посредством газа, нагревающего чугунный теплообменник, а розжиг огня при включении модели выполняется с кнопки с помощью стандартной батарейки типа АА. Подключение к бытовой сети необходимо только для работы вентилятора. Температура нагрева поддерживается за счет встроенного термостата, что значительно упрощает процесс эксплуатации оборудования. Аппарат адаптирован для установки в жилых помещениях, в гаражах, различных отдельностоящих зданиях, в производственных помещениях, рабочих комнатах на предприятиях, в офисах и т.д.
Внутри конвектора размещена камера сгорания, где происходит процесс горения и тепло передается на чугунный теплообменник.
На корпусе конвектора размещена небольшая непрозрачная крышка, за которой скрывается блок управления устройством. Здесь имеются кнопки включения и выключения вентилятора, активации электророзжига и температурный регулятор. Для пуска оборудования нужно нажать на кнопку поджига. Для того, чтобы газ горел постоянно, требуется удерживать кнопку нажатой на протяжении пяти секунд, как в случае с электроподжигом обычной бытовой газовой плиты, чтобы датчик автоматического отключения прогрелся. С помощью регулятора доступна плавная корректировка температуры нагрева в пределах от +13°C до +38°C, после чего прибор самостоятельно будет поддерживать нужный температурный уровень за счет встроенного термостата.
Камера сгорания полностью изолирована от помещения, где установлен конвектор, в результате чего Alpine Air NGS-50F может устанавливаться в жилых комнатах и тех локациях, где подразумевается длительное нахождение людей и домашних животных. Дополнительный приток свежего воздуха в помещение не требуется, что указывает на простую эксплуатацию модели. В качестве горелки в аппарате установлено надежное оборудование Polidoro, а газовая арматура представлена моделью итальянского производства SIT.
За счет наличия большой площади теплообменника, выполненного из чугуна, оребрения корпуса и встроенного вентилятора, прибор гарантирует быструю теплоотдачу, в результате чего воздух в комнате быстро прогревается. Также быстрая теплоотдача указывает на возможность эксплуатации оборудования в экстремальных условиях при аномально низких температурах.
Функционирование нагревателя по умолчанию осуществляется от природного газа, который проходит по трубопроводам. Однако производитель предусмотрел возможность перевода оборудования на сжиженный газ, поставляемый в баллонах. Это решает проблему экономичного обогрева помещений в тех местах, где не проходит газовый трубопровод. Работы по установке системы перехода на сжиженный газ рекомендуется доверять специалистам, т.к. велика вероятность повредить запальную свечу.
Газ-контроль
В рассматриваемом газовом конвекторе реализована система газ-контроля, которая многократно повышает безопасность использования газового оборудования. Она включает в себя ионизационный электрод, которые выполняют две важные задачи: при зажигании газа открывают подачу горючей смеси при наличии искры и перекрывают газ при затухании пламени. В основе работы используется принцип ионизации, когда между запальником и электродом возникает ток. Такой принцип сокращает время срабатывания защиты, поскольку не требует остывания электрода, как это реализовано во многих газовых горелках, а реагирует на отсутствие тока.
Коаксиальная труба
Настенный газовый конвектор Alpine Air NGS-50F комплектуется коаксиальной трубой изменяемой длины, выполняющей забор кислорода с улицы и отвода отработанных газов из камеры сгорания. Дымоход устанавливается в заранее подготовленное в стене отверстие и подходит для установки во внешние стены разной толщины, так изменяет свою длину в пределах от 46 до 66 см. Именно в таких пределах коаксиальная телескопическая труба может менять свою длину на этапе монтажа. Чтобы влага не попадала в камеру сгорания, дымоход необходимо размещать под углом примерно 3°, где верхней точкой является место крепления трубы к закрытой камере сгорания.
Внешний вид
Настенный конвектор газового типа Alpine Air NGS-50F представляет собой достаточно компактный агрегат для мощности 4,9 кВт и рассчитан только для размещения на стене, которая является уличной. С внешней стороны модель представляет собой прямоугольную форму со скошенными углами. Сверху и снизу расположены решетки, через которые осуществляется теплоотдача от чугунного теплообменника.
Центральная глухая панель белого цвета выступает в качестве защиты пользователя, закрывая собой горячий чугунный теплообменник.
Боковые стенки также закрыты панелями, чтобы нагретый воздух не выдувался по бокам. Это продиктовано тем, что рядом с конвектором могут быть расположены мебель и другие предметы интерьера.
Остались вопросы?
Ознакомьтесь с:
Правила монтажаХарактеристики
Или позвоните нам, мы подскажем и поможем.
Конвектор Alpine Air NGS-50F.
1 штука.
Коаксиальный дымоход телескопический (с изменяемой длиной).
1 штука.
Набор для перевода на сжиженный газ: штуцер 1/2, форсунка, втулка.
1 комплект.
Крепеж.
1 комплект.
Батарейка AA для модуля поджига.
Инструкция.
1 штука.
Настенное крепление
Газовый конвектор Alpine Air NGS-50F размещается исключительно на стене в вертикальном положении. Прибор разрешается размещать только на той стене, которая с наружной стороны выходит на улицу и не связана с замкнутыми пространствами, например, застекленными лоджиями, лестничными пролетами, летними садами и т.д.
Расстояние от края корпуса до ближайшей стены или предмета интерьера не должно быть менее 300 мм. Такое же требование выдвигается к расстоянию от верхнего края конвектора до оконного проема. Расстояние от пола до обогревателя минимум должно составлять 70 мм.
Вывод коаксиальной трубы
Коаксиальная труба газового конвектора Alpine Air NGS-50F должна проходит через стену минимум под углом 3 градуса, чтобы образующийся конденсат, а также вода во время выпадения осадков не попадали в камеру горения. Поскольку в процессе работы труба может нагреваться, все щели между стеной и трубой должны быть закрыты негорючей термостойкой изоляцией. Не допускается прикосновение человека с газоотводом.
Перевод на сжиженный газ
При необходимости перевода настенного газового конвектора Alpine Air NGS-50F на работу с природного газа на сжиженный, следует установить специальный дополнительный комплект. Он обеспечивает нормальное функционирование оборудование при подключении баллона с газом. Все работы рекомендуется проводить квалифицированному специалисту, поскольку велика вероятность повреждения запальной свечи и других элементов.
Подключение к электрической сети
Газовый конвектор Alpine Air NGS-50F включает в свою конструкцию вентилятор, который обеспечивает быстрый выдув разогретого воздуха от корпуса прибора. Сам вентилятор работает от бытовой однофазной сети 220 В, что требует коммутации с оборудования с сетью. Главным требованием, предъявляемым для процесса коммутации, является заземление прибора. Включается вентилятор с помощью тумблера, размещенного на панели управления.
В данном разделе представлены рекомендации и общие условия по подключению и монтажу оборудования. Перед осуществлением работ необходимо ознакомиться с инструкцией и изучить требования техники безопасности. Мы советуем доверять все работы по подключению и монтаж квалифицированным специалистам!
Способ установки
настенный
Номинальная мощность, кВт
4. 9
Вентилятор
да
Тип камеры сгорания
закрытый
КПД, %
86.9
Расход газа, м³/час
0.51
Перевод на сжиженный газ
да
Материал теплообменника
чугун
Минимальная длина дымоходной трубы, мм
460
Максимальная длина дымоходной трубы, мм
660
Диаметр дымоходной трубы, мм
80
Диаметр заборного патрубка, мм
160
Диаметр присоединения газа, дюйм
1/2
Высота, мм
630
Ширина, мм
605
Глубина, мм
250
Вес, кг
30
Высота в упаковке, мм
780
Ширина в упаковке, мм
900
Глубина в упаковке, мм
350
Вес в упаковке, кг
39
- Инструкция по монтажу и эксплуатации Alpine Air NGS-50F (PDF)
Нужно ли получать разрешение на использование газового конвектора?
При использовании конвекторов от магистрального газа требуется получить разрешение местной газораспределительной компании
Что входит в комплектацию?
В комплектацию всех газовых конвекторов Alpine Air, представленных в нашем каталоге, входят следующие компоненты:
- Конвектор
- Коаксиальная труба
- Комплект жиклеров для перевода оборудования на сжиженный газ
- Монтажные изделия для размещения оборудования на стене
- Инструкция по эксплуатации и монтажу
- Гарантийный талон
Дымоход приобретается отдельно?
Нет, он входит в стандартную комплектацию конвектора.
Что значит электронезависимый конвектор?
Газовые конвекторы Alpine Air не требуют подключения к электрической сети и могут эксплуатироваться в тех помещениях, где отсутствует электроэнергия. Модели с вентилятором также могут эксплуатироваться без подключения к электрической сети, однако вентилятор соответственно не будет задействован в работе.
Как работает вентилятор без электричества?
Для работы вентилятора требуется подключение к электросети. Это единственный элемент в конвекторе, питающийся от бытовой сети.
Можно ли не включать вентилятор при работающем конвекторе?
Да, вентилятор можно включать и выключать в любой момент работы конвектора. Он обеспечивает быстрое перемещение воздушных масс для более эффективного прогрева помещения.
В какой стране производятся конвекторы?
Конвекторы Alpine Air выпускаются в Турции.
Какой расход топлива у конвекторов?
Все зависит от мощности конвектора, характеристик помещения, выставленного уровня нагрева и типа газа.
Если говорить о работе на природном газе, то максимальный расход у моделей Alpine Air находится в диапазоне от 0,24 до 0,51 м3/ч.
Если говорить о работе на сжиженном (баллонном) газе, то расход конвектора находится в диапазоне от 0,2 до 0,4 литров газа в час. (Усредненный расход можно принимать как 0,078 литра на кВт в час).
При расчете расхода газа следует учитывать, что за весь отопительный сезон при нормальном утеплении помещения конвектор будет работать в среднем 8 часов в сутки.
Какой материал используется для теплообменника?
Все конвекторы Alpine Air комплектуются только чугунными теплообменниками. Данный материал обеспечивает долговечность при частом взаимодействии с высокими температурами, из-за чего производитель заявляет о 50-летнем эксплуатационном сроке.
Как определить нужную мощность конвектора для помещения?
При наличии стандартной высоты потолков в 2,5-3 метра проще всего подсчитать необходимую мощность конвектора: для 10 кв.м требуется 1 кВт мощности. Это при условии хорошей теплоизоляции дома. В лучшем случае стоит брать конвектор с запасом, а при больших размерах комнат стоит рассмотреть вариант монтажа двух конвекторов.
Возможна ли установка дымохода через крышу?
Нет. Конвекторы закрытого типа требуется монтировать только с горизонтальными коаксиальными трубами для вывода продуктов горения на улицу через стену.
Имеется ли газ-контроль?
Да, данная функция имеется в конвекторах. Она обеспечивает принудительное прекращение подачи газа при затухании пламени. Данная функция работает энергозависимо и сводится к тому, что два ионизационных электрода контролируют пламя на фитиле, который горит постоянно. В случае, когда фитиль тухнет, прекращается подача газа.
Какой цвет пламени нормальный?
Цвет пламени зависит от качества газа. Нормальный цвет пламени синий, может быть с оттенками желтого. Красный цвет пламени свидетельствует о неправильной настройке конвектора. Если пламя красное, то в смеси газа и пламени мало кислорода.
Имеется ли таймер у конвекторов?
Нет. Конвекторы управляются только механическим способом.
Не треснет ли теплообменник при нагреве от минусовой температуры?
В том случае, когда конвектор запускается в промерзшем помещении, сначала требуется зажечь газ и оставить его на некоторое время в режиме фитиля. Только когда теплообменник начнет медленно прогреваться, можно увеличивать огонь в камере.
Какая длина у коаксиальной трубы?
Коаксиальная труба имеет телескопический принцип и подходит для стен толщиной от 25 до 50 см.
Можно перевести конвектор на сжиженный (баллонный) газ?
В комплекте имеются форсунки для перевода оборудования на баллонный газ. Однако стоит доверить выполнение этих работ специалисту. Мы предоставляем такую услугу. При заказе уточните необходимость перевода конвектора на сжиженный газ.
Можно ли самостоятельно перевести конвектор на сжиженный (баллонный) газ?
Перевод конвектора на сжиженный газ должен осуществляться исключительно специалистами сервисного центра. Перевод включает в себя процедуры по настройке и регулировке подающего газового клапана, которые должны выполняться специалистами с использованием специальной измерительной аппаратуры. Кроме этого, конструкция (например, внутренних трубок и их крепления) подразумевает использование спец. инструмента и соответствующей квалификации при работе с ними.
Как монтировать конвектор на деревянные стены?
При монтаже конвектора на деревянные конструкции необходимо обеспечить его крепление к стене через специальные керамические проставки, которые позволяют обеспечить циркуляцию воздуха вдоль задней стенки конвектора и исключающие перегрев прилегающей стены.
Проход под дымоход рекомендуется выполнить с запасом по диаметру отверстия, для создания дополнительной воздушной прослойки. Образовавшиеся щели можно задекорировать накладками из стали или любого подходящего материала.
Какой теплообменник используется в конвекторах Alpine Air?
Продукция компании Alpine Air комплектуется исключительно чугунными теплообменниками.
В чем преимущества чугунного теплообменника?
Как правило, производители помимо чугунных устанавливают стальные теплообменники. Однако преимущества первых очевидно: он более инертный, что уменьшает цикл включения-выключения за счет длительного остывания и долгому поддержанию температуры воздуха в нагретом состоянии. Кроме того, чугун под влиянием высоких температур может оставаться в рабочем состоянии на протяжении длительного времени, в результате срок эксплуатации конвектора составляет 50 лет.
Нужно ли брать конвектор с запасом?
Да, поскольку КПД прибора не составляет 100%, однако здесь не стоит переусердствовать с запасом, т.к. более мощный аппарат нагреет воздух намного быстрее и за счет увеличения частоты включения/выключения повышается вероятность износа газового клапана. Кроме того, мощные аппараты стоят дороже, а в данном случае трата денег не будет оправдана из-за того, что оборудование не будет работать на полную мощность.
Конвектор настенный ALPEN AIR NGS-50 (F), с вентилятором, чугун
Открыть окноГарантия производителя
Производитель: ALPENE AIR
Производство: Турция
Другие товары производителя ➜
Наличие
Тюмень: | |
ул. Народная, 18 | Нет |
ул. Аккумуляторная 1, стр. 2 | Нет |
ул. Энергетиков, 96 | Нет |
40 000
₽
В пути
Количество *
Заказать
Быстрый заказНаличие
Тюмень: | |
ул. Народная, 18 | Нет |
ул.![]() | Нет |
ул. Энергетиков, 96 | Нет |
Описание
Камера сгорания закрытого типа, используемая в конвекторе Alpine Air NGS-50F, полностью изолирована от воздуха внутри помещения. Забор воздуха для работы горелки и отвод продуктов сгорания наружу помещения осуществляется через горизонтальную телескопическую трубу, подсоединяемую с обратной стороны конвектора. То есть, конвектору не нужен традиционный дымоход. Телескопическая труба имеет коаксиальную конструкцию — по внутренней части отводятся продукты горения, а по внешней идет приток воздуха снаружи. При этом отводимые газы разогревают поступающий воздух, в зимний период это способствует более полному сгоранию топлива.
Теплообменник газового конвектора Alpine Air NGS-50F имеет развитое оребрение, что увеличивает теплоотдачу и обеспечивает быстрый выход прибора на рабочую мощность после включения. Встроенный термостат поддерживает заданную температуру в помещении, а вентилятор помогает более равномерно распределять нагретый воздух по помещению.
Долговечность: Чугунный теплообменник рассчитан на 50-летнюю службу
Надежность: Используется газовая арматура SIT и горелка POLIDORO (Италия)
Удобство: Пьезорозжиг и термостат, телескопическая труба
Безопасность: Забор воздуха и выброс продуктов горения происходит на улицу
Универсальность: Прибор может быть переведен на работу с сжиженным газом
Доступность: Минимум монтажных работ при установке.
Нагревает сразу воздух, а не теплоноситель — быстрый прогрев помещения и минимум потерь тепла (КПД 86,9%)
Быстрая регулировка температуры. Не сжигает кислород, продукты горения удаляются через коаксиальную трубу
Удобное управление: кнопка пъезорозжига, кнопка вентилятора, регулятор температуры
Закрытый цикл горения делает конвектор абсолютно безопасным для здоровья
Имеет эстетичный внешний вид и компактные размеры
Прибор работает почти бесшумно
Возможность работы от баллона со сжиженным газом (требуется комплект перехода)
Не требует трубной разводки, поэтому исключены промерзания системы
Установить конвектор проще и легче, чем водяную систему отопления
Встроенный вентилятор ускоряет прогрев помещения
Долговечный чугунный теплообменник (срок службы более 50 лет)
Возможность установки комнатной температуры в диапазоне 13’C – 38’C
Телескопический газоотвод входит в комплект поставки
Газовый клапан Sit (Италия)
Горелка Polidoro (Италия)
Привлекательный дизайн, оптимальная мощность в сочетании с надежностью и абсолютной безопасностью газового конвектора Alpine Air NGS-50F позволяют использовать его для отопления практически любых жилых помещений: коттеджей, дач, загородных домов и технических помещений. Встроенный вентилятор обеспечивает быстрый и равномерный обогрев всего объема помещения.
В конвекторе используется чугунная камера сгорания закрытого типа, срок эксплуатации которой составляет 50 лет. Прибор имеет как стандартную комплектацию, для работы на магистральном природном газе, так и возможность комплектации для использования с сжиженным баллонным газом, благодаря чему может использоваться в негазифицированных районах.
Характеристики
Мощность: | 5.00 кВт |
Производитель/Марка: | ALPENE AIR |
Производство: | Турция |
Теплообменник: | Чугун |
Габариты (В*Ш*Г), мм | 630*605*220 |
Вес, кг |
Написать отзыв
К сожалению, еще никто не оставлял отзыв к этому товару. Будьте первыми!
С этим товаром покупают
Турция
Турция
Комплект для перехода на сжиженный газ NGS 50/50F
В пути
В пути
Заказать
Быстрый заказСтандартизация глубины охвата секвенирования в NGS: рекомендации по обнаружению клональных и субклональных мутаций в диагностике рака большие преимущества для диагностики, выбора лечения и/или прогнозирования для многих пациентов (1).

Одной из проблем, в частности, является правильное обнаружение мутаций, присутствующих на низких частотах вариантных аллелей (VAF), и стандартизация глубины охвата секвенирования (1, 5, 6). Это особенно важно для мутаций, которые оказывают клиническое влияние на субклональные частоты (1), например, в случае генных мутаций TP53 (мутация TP53 ) при хроническом лимфоцитарном лейкозе (ХЛЛ) (7, 8). TP53 аберраций (мутация TP53 и/или делеция хромосомы 17p) являются одними из самых сильных прогностических и прогностических маркеров, определяющих выбор лечения при ХЛЛ (9). В настоящее время Европейская исследовательская инициатива по хроническому лимфоцитарному лейкозу (ERIC) рекомендует обнаруживать мутацию TP53 с пределом обнаружения (LOD) не менее 10% VAF (10), и существует растущий объем данных, посвященных клиническому влиянию малые TP53 мутантных субклонов при ХЛЛ (7, 8).
Секвенирование по Сэнгеру и глубоко направленный NGS в настоящее время являются методами, наиболее часто используемыми для анализа мутаций TP53 (10), а также для анализа других генов с клиническими последствиями при низких частотах аллелей. Хотя секвенирование по Сэнгеру обеспечивает относительно доступный подход к секвенированию, ему не хватает чувствительности, необходимой для обнаружения субклонов, из-за его предела обнаружения 10–20% мутированных аллелей (10). Таким образом, анализ на основе NGS получил известность в диагностических лабораториях для обнаружения соматических вариантов, и различные технические разработки стратегий исправления ошибок, как вычислительные, так и экспериментальные, разрабатываются для точной идентификации генетических вариаций низкого уровня (11). Поэтому мы обращаем внимание на важность правильного определения глубины секвенирования в диагностическом NGS, чтобы получить надежное и воспроизводимое обнаружение не только вариантов с низким VAF. Наконец, мы провели эксперимент с разбавлением, чтобы подтвердить наши теоретические расчеты, и в заключение обсудим наш опыт диагностического обнаружения TP53 mut у пациентов с ХЛЛ и дальнейшие перспективы стандартизации NGS в диагностике рака.
Глубина секвенирования NGS и частота ошибок
Глубина секвенирования NGS напрямую влияет на воспроизводимость обнаружения вариантов: чем больше число прочтений выровненной последовательности, тем выше достоверность базового вызова в конкретной позиции, независимо от того, является ли базовый вызов такой же, как эталонная база, или мутирован (1). Другими словами, отдельные считывания с ошибками секвенирования статистически нерелевантны, если их количество превышает количество правильных чтений. Таким образом, желаемая глубина охвата должна определяться на основе предполагаемого уровня детализации, допуска ложноположительных или ложноотрицательных результатов и частоты ошибок при секвенировании (1, 11).
Используя биномиальное распределение, можно рассчитать вероятность ложноположительных и ложноотрицательных результатов для данной частоты ошибок, а также предполагаемый уровень детализации, а также можно оценить пороговое значение для варианта, требующего заданной глубины (1). Например, при частоте ошибок секвенирования 1 %, нагрузке мутантных аллелей 10 % и глубине охвата 250 прочтений вероятность обнаружения 9 или менее мутантных прочтений согласно биномиальному распределению составляет 0,01 %. Следовательно, вероятность обнаружения 10 и более мутированных прочтений равна 9.9,99% (100–0,01%), и можно определить порог для вызова варианта. Другими словами, глубина охвата 250 с порогом не менее 10 мутированных прочтений будет иметь 99,99% вероятность того, что 10% мутантной аллельной нагрузки не будут пропущены при вызове варианта (хотя он может быть обнаружен в другой пропорции). ). Таким образом, риск ложноотрицательного результата значительно сводится к минимуму. С другой стороны, вероятность ложных срабатываний сильно зависит от частоты ошибок секвенирования (поскольку точность всех аналитических измерений зависит от отношения сигнал/шум) (1, 11). В нашем примере вероятность ложноположительного результата составляет 0,025%; однако частота ложных срабатываний не является незначительной при уменьшении LOD до значения, близкого к частоте ошибок.
Обычная частота внутренних ошибок NGS колеблется от 0,1 до 1% (показатель качества Phred от 20 до 30) (1, 11) в зависимости от платформы секвенирования, содержания GC в целевых областях (12) и длины фрагмента, как показано на рис. Секвенирование парных концов Illumina (13). Следовательно, обнаружение вариантов при ВАФ <2% связано с высоким риском ложноположительного результата независимо от глубины охвата. Также важно отметить, что частота ошибок секвенирования применима только к ошибкам, возникающим в результате самого секвенирования, и не включает другие ошибки, возникающие во время обработки ДНК и подготовки библиотеки, особенно на этапах амплификации, которые еще больше увеличивают частоту ошибок (1, 11).
Минимальный охват секвенированием в клинических условиях
В настоящее время нет единого мнения относительно минимально необходимого охвата в клинических условиях с использованием глубокого целевого повторного секвенирования с помощью NGS, поэтому каждая лаборатория должна устанавливать свои собственные параметры для обеспечения достаточного качества (1, 5). На сегодняшний день только несколько исследований рекомендовали критерии минимального охвата для глубокого прицельного NGS в клинической онкологии: 500 глубина охвата и LOD 5% (2), 300–500 глубина охвата без нарушения LOD (3), 250 глубина и LOD 5% с пороговой регулировкой до 1000 глубины охвата требуется в случаях гетерогенных вариантов в образцах с низкой клеточностью опухоли (1) и 100 глубина по крайней мере с 10 вариантами прочтения и LOD 10% (10). Согласно биноминальному распределению данных, глубина покрытия 250 действительно должна быть достаточной для обнаружения 5% VAF с порогом вариантов, поддерживающих чтения ≥5 (рис. 1). С другой стороны, анализ NGS с глубиной охвата 100 вместе с требованием не менее 10 вариантов, поддерживающих считывания, как рекомендовано консорциумом ERIC (10), приведет к ложноотрицательному результату в 45 % для образцов с LOD 10 %. . Чтобы подтвердить эти теоретические расчеты, мы провели два независимых эксперимента по разбавлению, чтобы оценить эффективность TP53 Анализ NGS для обнаружения 10% VAF при глубине охвата 100 считываний.
Действительно, мы обнаружили 30% ложноотрицательных результатов (5 положительных образцов из 7 истинно положительных образцов и 9 положительных образцов из 13 истинно положительных образцов) в двух независимых циклах секвенирования. К сожалению, частота ложноотрицательных результатов часто недооценивается при целевом повторном секвенировании. Кроме того, недавнее исследование межлабораторных результатов обнаружения соматических вариантов с VAF от 15 до 50% в 111 лабораториях с зарегистрированными LOD 5–15% (6) показывает, что серьезные ошибки в диагностическом NGS могут возникать из-за ложноотрицательных результатов, даже в образцах с высокой мутационной нагрузкой (6). Из трех одновременных ложноположительных результатов все варианты были правильно обнаружены, но неправильно охарактеризованы (6). Поскольку от лабораторий не требовалось сообщать о глубине охвата для других регионов, кроме идентифицированных вариантов (6), мы можем только предположить, что низкий охват или высокие пороги выявления вариантов способствовали ложноотрицательным результатам.
Эти результаты еще раз подчеркивают необходимость стандартизированных параметров глубины покрытия в диагностических NGS с учетом ошибок секвенирования, а также ошибок, связанных с анализом.
Рисунок 1 . LOD как функция глубины покрытия в соответствии с биномиальным распределением. Глубина покрытия, необходимая для поддержания заданного уровня детализации (в диапазоне 3–20 % VAF) для трех кумулятивных настроек вероятности: для вероятности ложного срабатывания 0,001 и истинного положительного результата 0,999 уровень детализации 20 % достигается при глубине покрытия 61, уровень детализации составляет 10% при 175, LOD 5% при 562 и LOD 3% при 1650. Для вероятности ложного срабатывания 0,010 и истинного срабатывания 0,990 LOD 20% достигается при 31, LOD 10% при 81, LOD 5% при 288 и LOD 3% при глубине покрытия 886, соответственно. Для вероятности ложного срабатывания 0,050 и истинного срабатывания 0,950, LOD 20% достигается при 30, LOD 10% при 30, LOD 5% при 124 и LOD 3% при глубине покрытия 392 соответственно.
Частота
TP53 Субклональные мутации при ХЛЛ, обнаруженные с помощью диагностической NGSЧтобы оценить возникновение низкой VAF в реальных условиях, мы провели обзор когорты пациентов с ХЛЛ, обследованных на мутацию TP53 в нашей диагностической лаборатории. Мутацию TP53 оценивали, как сообщалось ранее (14, 15). Кратко, TP53 (экзоны 2–10, включая интронное перекрытие 2 п.н., 5′- и 3’UTR) анализировали с использованием 100 нг гДНК на реакцию. Библиотеки на основе ампликонов секвенировали как парные концы на MiSeq (2×151, Illumina) с минимальной целевой глубиной считывания 5000x. LOD TP53 mut был установлен на 1%, а варианты в диапазоне 1–3% были подтверждены повторением. Письменное информированное согласие было получено от всех пациентов, включенных в исследование в соответствии с Хельсинкской декларацией, и исследование было одобрено локальным этическим комитетом.
Из диагностической когорты из 859 пациентов с ХЛЛ (апрель 2016 г. – апрель 2019 г.) 25% (215/859) были положительными на мутацию TP53 , и из них 52,6% (113/215) носили варианты с ВАФ в возрасте 10 лет. % или ниже. В соответствии с нашими наблюдениями, в недавнем исследовании (8) сообщалось о наличии 63 и 84% мутаций TP53 с низкой нагрузкой (отрицательных по Сэнгеру) у пациентов с ХЛЛ во время постановки диагноза и во время лечения, соответственно, и подтвердили негативное влияние на общую выживаемость TP53 мутирует выше 1% VAF во время лечения (8).
Калькулятор для диагностических настроек NGS для обнаружения субклональных мутаций
Чтобы помочь лабораториям в определении минимально надлежащих параметров охвата, мы предоставляем простой, удобный теоретический калькулятор (программное обеспечение), основанный на биномиальном распределении (рис. 2). , описанный в дополнительном файле. Веб-приложение (или настольное) и отдельные исходные коды на R доступны на Github: https://github.com/mvasinek/olgen-coverage-limit. С помощью этого калькулятора можно легко определить правильные параметры глубины секвенирования и соответствующее минимальное количество прочтений вариантов для данной частоты ошибок секвенирования и предполагаемого уровня детализации. Кроме того, пользователи могут также учитывать другие ошибки, просто добавляя ошибки, характерные для анализа, к частоте ошибок секвенирования и используя эту общую ошибку в качестве входных данных для калькулятора. Например, в нашем случае TP53 мутационный анализ мы рассчитали с общей ошибкой ~ 1,16%, поэтому мы установили наши минимальные требования к глубине охвата до 2000 с порогом минимум 40 прочтений для 3% VAF.
Рисунок 2 . Калькулятор предела охвата OLGEN — простой теоретический калькулятор, подходящий для определения правильной глубины секвенирования и соответствующего минимального количества считываний вариантов в соответствии с биномиальным распределением для заданной частоты ошибок секвенирования и предполагаемого уровня детализации, рекомендованного для диагностических NGS. Примеры рассчитанной глубины секвенирования и соответствующего минимального количества ридов вариантов, рекомендованных для вариантов с (A) 10% VAF и вероятность обнаружения 99,9% и (B) 3% VAF и вероятность обнаружения 99,9%.
Обсуждение
Хотя диагностический NGS приобрел известность в клинических условиях для оценки соматических мутаций при раке, недостаточная стандартизация параметров секвенирования по-прежнему ограничивает его применение в клинической практике (1), в основном для вариантов, присутствующих с низкой частотой аллелей (4) . Поэтому мы обратились к техническому вопросу правильного определения глубины секвенирования в диагностическом NGS, чтобы получить надежные и воспроизводимые обнаружения вариантов с низким VAF. В частности, были проведены теоретические расчеты для определения оптимальной глубины охвата для желаемой вероятности обнаружения вариантов при низких частотах аллелей с учетом частоты ошибок секвенирования. Более того, мы подтвердили эти теоретические расчеты, проведя эксперименты по разбавлению. Основываясь на этих наблюдениях, мы рекомендуем глубину охвата 1650 или выше (вместе с соответствующим порогом не менее 30 мутированных прочтений), чтобы вызвать ≥3% вариантов для достижения 9Вероятность обнаружения варианта 9,9% при использовании только обычной ошибки секвенирования NGS. Варианты в диапазоне 1–3% VAF можно назвать только в том случае, если полученные данные последовательности имеют высокое качество (средний Q30 > 90%) и/или когда варианты подтверждены повторением или ортогональным методом (1, 11, 16). . Мы также предоставляем простой и удобный теоретический калькулятор (программное обеспечение), чтобы помочь лабораториям определить правильную глубину секвенирования и соответствующее минимальное количество считываний вариантов с учетом частоты ошибок секвенирования. Наш простой калькулятор может помочь свести к минимуму ложноположительные и ложноотрицательные результаты при диагностике NGS.
Тем не менее, на правильную глубину секвенирования также влияют специфические для анализа факторы (1). Ошибки могут возникать на многих этапах обработки ДНК и подготовки библиотеки. Наиболее распространенными являются ошибки амплификации, возникающие при подготовке библиотеки NGS (1, 12, 17). Другие распространенные источники ошибок связаны со сложностью библиотеки (количество проанализированных независимых молекул ДНК), качеством ДНК, сложностью целевого региона и т. д. Все потенциальные ошибки, связанные с анализом, следует устранять с помощью дизайна теста, проверки метода и контроля качества.
В настоящее время разрабатываются новые стратегии исправления ошибок, как вычислительные, так и экспериментальные, чтобы уменьшить высокий уровень ошибок в диагностических NGS (11). На сегодняшний день среди наиболее многообещающих методов исправления ошибок — UMI (уникальные молекулярные идентификаторы), которые исправляют ошибки ПЦР (18), и подходы коррекции отношения сигнал-шум (11). Эти достижения направлены на снижение LOD, тем самым повышая точность секвенирования, необходимую для будущих возможностей диагностики NGS.
В целях улучшения стандартизации диагностических NGS оценка правильной глубины охвата является рекомендуемой отправной точкой при оценке порогов, окружающих конкретный анализ NGS. Тем не менее, по-прежнему отсутствуют опубликованные руководства относительно минимальных технических требований и их отчетности в NGS, что особенно важно для обнаружения клональных и субклональных мутаций в диагностике рака. Это в основном связано с широким спектром подходов к подготовке библиотек и многочисленными переменными, играющими роль в каждом конкретном анализе NGS, которые трудно стандартизировать, а также с межлабораторной изменчивостью. Поэтому крайне желательно определение минимальных технических требований и их отчетность в NGS. Основываясь на нашем опыте диагностики NGS в онкогематологии, мы предлагаем сообщать как минимум следующие технические параметры: LOD, общую ошибку анализа NGS (или, по крайней мере, частоту ошибок секвенирования), количество введенной ДНК, источник и качество ДНК. , минимальная глубина покрытия и процент целевых оснований, секвенированных на этой минимальной глубине, общее количество целевых прочтений, покрывающих вариантную область, и количество прочтений, поддерживающих вариант. Особое внимание следует уделить стандартизации NGS образцов, фиксированных формалином и залитых парафином (FFPE) (19)., 20).
В совокупности наше исследование подчеркивает важность правильной глубины секвенирования и минимального количества прочтений, необходимых для надежного и воспроизводимого обнаружения вариантов с низкой VAF в диагностических NGS. Расчет правильной глубины секвенирования для данной частоты ошибок с использованием нашего удобного теоретического калькулятора (программного обеспечения) может помочь свести к минимуму ложноположительные и ложноотрицательные результаты в диагностических NGS, в ситуациях, связанных, среди прочего, с субклональными мутациями. Строгое тестирование и стандартизированные минимальные требования к диагностическому NGS особенно желательны для обеспечения правильных результатов в клинических условиях.
Доступность данных
Наборы данных, созданные для этого исследования, доступны соответствующему автору по разумному запросу.
Вклад авторов
AP и EK разработали исследование, интерпретировали результаты и написали рукопись. AP, LS, TD и PS выполнили анализ NGS. ТП собрал образцы пациентов и клинические данные. М.В. провел биоинформатический анализ и написал код калькулятора. TN подготовил веб-приложение. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.
Финансирование
Грантовая поддержка: MZ CR VES16-32339A, частично MH CZ-DRO (FNOl, 00098892).
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Мы приносим свои извинения многим авторам, чьи статьи не могут быть процитированы из-за ограниченного количества ссылок.
Дополнительный материал
Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fonc.2019.00851/full#supplementary-material
Ссылки
1. Jennings LJ, Arcila ME, Корлесс С., Камел-Рейд С., Любин И.М., Пфайфер Дж. и соавт. Руководство по валидации онкологических панелей следующего поколения, основанных на секвенировании: совместная согласованная рекомендация Ассоциации молекулярной патологии и Колледжа американских патологов. J Мол Диагн . (2017) 19: 341–65. doi: 10.1016/j.jmoldx.2017.01.011
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
2. D’Haene N, Le Mercier M, De Neve N, Blanchard O, Delaunoy M, El Housni H, et al. Клиническая проверка целевого секвенирования следующего поколения для рака толстой кишки и легких. ПЛОС ОДИН. (2015) 10:e0138245. doi: 10.1371/journal.pone.0138245
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
3. Deans ZC, Costa JL, Cree I, Dequeker E, Edsjo A, Henderson S, et al. Интеграция секвенирования нового поколения в клинико-диагностические лаборатории молекулярной патологии для анализа солидных опухолей; экспертное заключение от имени IQN path ASBL. Арка Вирхова . (2017) 470: 5–20. doi: 10.1007/s00428-016-2025-7
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
4. Иванов М., Лактионов К., Бредер В., Черненко П., Новикова Е., Телышева Е. и др. На пути к стандартизации секвенирования следующего поколения образцов FFPE для клинической онкологии: внутренние препятствия и возможные решения. J Transl Med . (2017) 15:22. doi: 10.1186/s12967-017-1125-8
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
5. Bacher U, Shumilov E, Flach J, Porret N, Joncourt R, Wiedemann G, et al. Проблемы внедрения секвенирования нового поколения (NGS) для диагностики миелоидных новообразований в рутинную клиническую практику. Рак крови J . (2018) 8:113. doi: 10.1038/s41408-018-0148-6
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
6. Merker JD, Devereaux K, Iafrate AJ, Kamel-Reid S, Kim AS, Moncur JT, et al. Квалификационное тестирование стандартизированных образцов показывает очень высокую межлабораторную согласованность для клинических онкологических анализов на основе секвенирования нового поколения Arch Pathol Lab Med. (2019) 143:463–71. doi: 10.5858/arpa.2018-0336-CP
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
7. Росси Д., Хиабанян Х., Спина В., Чиардулло С., Брускаггин А., Фама Р. и соавт. Клиническое влияние небольших мутантных субклонов TP53 при хроническом лимфоцитарном лейкозе. Кровь . (2014) 123:2139–47. doi: 10.1182/blood-2013-11-539726
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
8. Brieghel C, Kinalis S, Yde CW, Schmidt AY, Jonson L, Andersen MA, et al. Глубокое целенаправленное секвенирование TP53 при хроническом лимфоцитарном лейкозе: клиническое влияние при постановке диагноза и во время лечения. Гематологические . (2019) 104:789–96. doi: 10.3324/гематол.2018.195818
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
9. Campo E, Cymbalista F, Ghia P, Jager U, Pospisilova S, Rosenquist R, et al. TP53 аберраций при хроническом лимфоцитарном лейкозе: обзор клинических последствий улучшенной диагностики. Гематологические . (2018) 103:1956–68. doi: 10.3324/гематол.2018.187583
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
10. Мальчикова Дж., Тауш Э., Росси Д., Саттон Л.А., Сусси Т., Зенц Т. и другие. Рекомендации ERIC по анализу мутаций TP53 при хроническом лимфоцитарном лейкозе – обновление методологических подходов и интерпретация результатов. Лейкемия . (2018) 32:1070–80. doi: 10.1038/s41375-017-0007-7
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
11. Солк Дж.Дж., Шмитт М.В., Леб Л.А. Повышение точности секвенирования нового поколения для обнаружения редких и субклональных мутаций. Nat Rev Genet . (2018) 19: 269–85. doi: 10.1038/nrg.2017.117
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
12. Куэйл М.А., Смит М., Коупленд П., Отто Т.Д., Харрис С.Р., Коннор Т.Р. и др. Рассказ о трех платформах для секвенирования следующего поколения: сравнение секвенаторов Ion Torrent, Pacific Biosciences и Illumina MiSeq. BMC Геномика . (2012) 13:341. doi: 10.1186/1471-2164-13-341
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
13. Tan G, Opitz L, Schlapbach R, Rehrauer H. Длинные фрагменты обеспечивают более низкое базовое качество при секвенировании парных концов Illumina. Научный представитель . (2019) 9:2856. doi: 10.1038/s41598-019-39076-7
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
14. Обр А., Прохазка В. , Йиркувова А., Урбанкова Х., Криегова Е., Шнейдерова П. и др. ТП53 9Мутация 0008 и сложный кариотип предвещают неблагоприятный прогноз у пациентов с мантийноклеточной лимфомой. Клин Лимфома Миелома Лейк . (2018) 18:762–8. doi: 10.1016/j.clml.2018.07.282
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
15. Турчаный П., Криегова Е., Куделка М., Радванский М., Крузова Л., Урбанова Р. и др. Улучшение стратификации риска пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом с использованием многомерных сетей подобия пациентов. Лейк Рез . (2019) 79:60–8. doi: 10.1016/j.leukres.2019.02.005
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
16. Shin HT, Choi YL, Yun JW, Kim N, Kim SY, Jeon HJ и другие. Распространенность и обнаружение низкоаллельных вариантов в клинических образцах рака. Нац Коммуна . (2017) 8:1377. doi: 10.1038/s41467-017-01470-y
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
17. Ma X, Shao Y, Tian L, Flasch DA, Mulder HL, Edmonson MN, et al. Анализ профилей ошибок в данных глубокого секвенирования следующего поколения. Геном Биол . (2019) 20:50. doi: 10.1186/s13059-019-1659-6
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
18. Смит Т., Хегер А., Садбери И. Инструменты UMI: моделирование ошибок секвенирования в уникальных молекулярных идентификаторах для повышения точности количественного определения. Рез. генома . (2017) 27:491–9. doi: 10.1101/gr.209601.116
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
19. McDonough SJ, Bhagwate A, Sun Z, Wang C, Zschunke M, Gorman JA, et al. Использование ДНК, полученной из FFPE, в секвенировании следующего поколения: методы выделения ДНК. ПЛОС ОДИН. (2019) 14:e0211400. doi: 10.1371/journal.pone.0211400
PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar
20. Ascierto PA, Bifulco C, Palmieri G, Peters S, Sidiropoulos N. Преаналитические переменные и управление тканями для надежного клинического анализа секвенирования следующего поколения (NGS). J Мол Диагн . (2019) 21: 756–67. doi: 10.1016/j.jmoldx.2019.05.004
Полный текст CrossRef | Google Scholar
Cancer NGS Panel — Больницы Оксфордского университета
Стратегия тестирования
Лаборатория использует панель Ion Ampliseq Cancer Hotspot Panel (v2) с секвенированием на машине Ion Torrent Personal Genome Machine для обнаружения онкогенных вариантов в 50 отдельных генах.
Проанализированное и зарегистрированное содержание генов варьируется в зависимости от клинических показаний и отражает Национальный каталог геномных тестов для рака.
Полные гены не охватываются этим набором для тестирования, основное внимание уделяется «горячим точкам» повторяющихся вариаций, выявленным в базе данных COSMIC.
Подробная информация о целевых областях доступна по запросу, хотя, по нашим оценкам, анализ выявит >95% вариантов генов KRAS, NRAS, BRAF, PDGFRA, PIK3CA, KIT и EGFR, пригодных для клинического применения.
Предел обнаружения (процент мутантов, обнаруживаемых на фоне ДНК дикого типа) этого анализа составляет 5–10 процентов для однонуклеотидных вариантов и выше для вставок/делеций.
Предел обнаружения основан на вертикальной глубине считывания 500 чтений, целевые области, находящиеся ниже этого порога, будут указаны в отчетах.
Направления на анализы, финансируемые NHSE, должны соответствовать Национальному каталогу геномных тестов на рак и соответствовать критериям приемлемости:
Национальный каталог геномных тестов (NHS England)
Целевое время отчетности
21 календарный день с момента получения образца в лаборатории для рутинных обращений.
Образец требований и информация о направлении
См. форму направления для получения информации о направлении и образцах требований.
Запрашиваемые специальности
- Гистопатология
- Онкология
Контактная информация
Справочная информация по молекулярной патологии: oxford.