Модельно восковой состав мвс 3а: Модельно-восковой состав МВС-3А — СпецХимПродукт

Содержание

МВС-3Т - Модельный восковый состав

Модельный восковый состав МВС-3Т предназначен для изготовления моделей, используемых в литейном производстве, для литья по выплавляемым моделям (ЛВМ)черных и цветных металлов.

В зависимости от способа приготовления и области применения модельный восковый состав выпускается следующих марок:

Наименование

Аналог

Описание

МВС-3Т/01

МВС-3А, МВС-3АЯ, МВС-3Н, Р-3Н

Базовый состав для литья по выплавляемым моделям отливок различной категории сложности, изготовлен по стандартной технологии путем гомогенизации парафина, церезина, синтетических и природных восков.

МВС-3Т/02

Состав для литья по выплавляемым моделям отливок особой категории сложности - ответственное, тонкостенное, сверхточное литье заготовок (колесо турбины и т.п.) в т.ч. для предприятий оборонного комплекса, изготовлен по особой технологии с улучшением реологических свойств композиции базового материала.

 Физико-химические показатели:

 

Наименование показателя

норма

МВС-3Т/01

МВС-3Т/02

1

Внешний вид

Брикеты, блины от желтого до коричневого цвета

2

Температура каплепадения,ОС

80-90

3

Предел прочности при статическом изгибе при 18-20ОС, кг/см2 (МПа), не менее

50 (5,0)

55 (5,5)

4

Теплоустойчивость,ОС, не менее

37

5

Кислотное число, мг КОН на г состава, не более

0,5

0,4

6

Массовая доля золы, %, не более

0,03

 Отличительные свойства:

- в состав материала  дополнительно введен структурообразующий сополимер;

- в состав материала дополнительно введена антиокислительная присадка

 Получаемые преимущества:

- сокращается расход модельной массы на 1шт. годных отливок на 10-15%;

- уменьшается брак моделей по недоливам и различной точности;

- сокращаются потери моделей при извлечении их из пресс-форм за счет прочности композиции;

- обеспечивается стабильность технологических свойств состава;

- улучшается чистота поверхности;

- повышается трещиноустойчивость, твердость моделей.

 Меры безопасности:

МВС-3Т в соответствие с ГОСТ 12.1.044 относится к горючим, пожароопасным веществам. Температура вспышки не менее 190 ºС, воспламенения не менее 220 ºС.

При работе с МВС-3Т необходимо применять индивидуальные средства защиты по ГОСТ 12.4.011, ГОСТ 12.4.103, ГОСТ 12.4013-85Е, ГОСТ 12.4010-75.

Оборудование и помещение, при работе с составом модельным восковым МВС-3Т, должны быть оборудованы общеобменной приточно-вытяжной вентиляцией и местными отсосами.

 Транспортировка и хранение:

МВС-3Т транспортируют и хранят в соответствии с ГОСТ 1510.

Модельный восковой состав в Нижнем Новгороде (Составы модельно-восковые)

Различают следующие марки модельных восковых составов:

СДС-13М для сыров (ТУ 38.101225-94) - представляет собой композицию глубокоочищенного нефтяного воска с полимерными добавками.

ВН-2 (ТУ 38.401210-93) - в качестве основы применяют, воск который представляет собой фракцию твердых парафиновых углеводородов, выделенных обезмасливанием смеси петролатума и целевого фильтрата, полученного в процессе обезмасливания широкой фракции гача. Для использования в сплаве СДС-13М воск ВН-2 подвергают глубокой очистке.

МВС-ЗА, МВС-3Т\01 и МВС-3Т\02 (ТУ 38.101516-76 и ТУ 0255-001-71462031-2005) МВС-3Н (аналог МВС-3А) представляет собой композицию глубокообезмасленного парафина и высокоплавкого нефтяного церезина с полимерной добавкой. Предназначен для точного стального литья по выплавляемым моделям.

МВС-15 (ТУ 38.1011044-85 и ТУ 0255-001-71462031-2005) представляет собой композицию высокоплавкого церезина с техническим парафином и полимерной добавкой. Р-3Н (аналог Р-3). Р-3,ПЦБ (ТУ 0255-001-71462031-2005). Г-1М-2 (ТУ 6-00-010-5000597-94) (аналог ВИАМ102).

Характеристика Требуемые нормы показателей модельных восковых составов Наименование показателей МВС-3Н ТУ 0258-001-51570957-2002 Р-3Н ТУ 0255-002-51570957-2005 норм. норм. 1. Температура плавления, 0С 75-85 Не норм. 2. Температура каплепадения, 0С не норм. 75-84 3. Предел прочности при статическом изгибе при 18-200С, Мпа (кг/см2) не менее: 40-50 32 4. Теплоустойчивость, 0С не менее 40 не менее 33 5. Кислотное число,

мг КОН на 1 г. состава

0,5 4,0 6. Массовая доля золы, % 0,03 0,03 7. Массовая доля кокса,% не более 0,1 не норм 8. Вязкость кинематическая при 1000С, м2/с (сСт) 9·10-6(9) не норм.

Модельный состав «Г-1» представляет собой сплав на основе природных восков и парафинов, который предназначен для изготовления моделей отливок в литье по выплавляемым моделям предприятий авиационной и судостроительной промышленности.

Технические показатели ТУ 0255-026-71462031-2010 Норма по ТУ Наименование показателей Г-1М-1 Г-1М-2 1. Внешний вид при 20гр.С Твердое воскообразное вещество темно-коричневого цвет 2.Предел прочности пристатическом изгибе притемпературе (19+-1)гр. С, кг/см.2, не менее 45 38 3. Теплоустойчивость, гр.С , не менее 40 40 4. Температура каплепадения 79-87 79-92 Наименование показателей Модельный состав «МВС-3А» ТУ 0255-001-71462031-2005 1.Внешний вид при 20гр.С Твердое воскообразное вещество 2.Предел прочности пристатическом изгибе при температуре (19+-1)гр. С, кг/см.2, не менее 40 3. Теплоустойчивость, гр.С , не менее 40 4.Температура каплепадения 85-95 Применение

Модельные восковые составы нашли применение в различных аспектах человеческой деятельности:

  • на предприятиях машиностроения для точного стального литья;

  • на заводах тракторного и сельскохозяйственного машиностроения для литья по выплавляемым моделям в цехах точного литья;

  • для защиты твердых сычужных сыров от высыхания и плесневения в период их вызревания и хранения. Подходят только глубокоочищенные воски, допущенные к контактам с пищевыми продуктами.

Если Вы решили купить модельный восковой состав оптом или в розницу в ПКФ «Нижегородхимпродукт», то можете быть уверены, что цена Вас приятно удивит. Обусловлено это тем, что являясь прямым дилером заводов, «Нижегородхимпродукт» обеспечивает прямые поставки от производителей по всей России.

Транспортировка

Наличие прямых дилерских контрактов с производителями у ПКФ «Нижегородхимпродукт» гарантирует не только то, что цена однозначно будет конкурентоспособной, но и прямые поставки от производителя оптом и в розницу по всей России обеспечат Вам приобретение продукции без наценки!

Убедитесь сами!

ФотографииКупить модельный восковой составЗаказать93RUB ЗаказатьИли свяжитесь с продавцомСообщениеПостарайтесь кратко описать суть вашего вопроса продавцу (минимум 20 символов)ФИОТелефонE-mailОтправляя вопрос, вы соглашаетесь с пользовательским соглашением ознакоми(лся/лась) и принимаю егоВернуться назад
в раздел "Составы модельно-восковые"
Смотрите также товары категории "Формовочное литейное оборудование" Установки формовочные Машины формовочные Составы модельно-восковые

Модельный восковой состав мвс р-3н - Ярославский завод парафино-восковой продукции, АО Ростов (Россия)

Продукция: Модельный восковой состав МВС Р - 3Н цена купить оптом от производителя в России.

Харакетристики:

  • Внешний вид: чешуйки, стружка, таблетки, монолит или брикеты от желтого до темно - коричневого цвета.
  • Предназначение: предназначен для изготовления выплавляемых моделей при производстве отливок с требованиями по размерной точности в металлургической промышленности.
  • Применение:
    Выплавка ювелирных изделий, выплавка деталей.
  • Показатели качества:

СОГЛАСНО ТУ 0255 - 002 - 13933880 - 2015 С ИЗМ. 1

Наименование показателяМетод испытания

Норма по ТУ
0255 - 002 - 13933880 - 2015 с изм. 1

Температура каплепадения, не менее, °СГОСТ 679370
Предел прочности при статическом изгибе при (18 - 20)°С, кгс/см2, не менееп.4.4, 4.4.2 настоящих ТУ32
Теплоустойчивость, °С не менееп.4.4, 4.4.3 настоящих ТУ32
Кислотное число, мг KOH на 1г состава, не болееГОСТ 24884
Массовая доля золы, %ГОСТ 14610,03

Условия поставки: EXW, также возможны другие условия доставки

Условия оплаты: 100% предоплата, возможна частичная оплата

Производитель: Акционерное общество "Ярославский завод парафино - восковой продукции"

Перечень предлагаемой продукции:

  • Парафины
  • Гачи
  • Воски
  • Мягчители
  • Церезины
  • Петролатумы
  • Антистаритель
  • Стеарин
  • Стеариновая кислота
  • Пальмовый воск
  • Буроугольный воск
  • Модельные восковые составы
  • Гидрофобные заполнители
  • Масло лампадное

ООО ПКП Промарматура - Производим модельные восковые составы и массы МВС-15,МВС-3А,МВС-3Н,Р-3.

Производим полиэтиленовые трубы различных диаметров и различной толщиной стенки. Расчищаем и углубляем малые реки,пруды,водемы,производственные пруды отстойники. Устанавливаем поливочные системы и системы подкорневого орошения.

 

 

Модельные восковые составы МВС-15, МВС-3А, МВС-3Н, Р-3.

 

Уважаемые господа предлагаем Вам ряд восковых составов централизованного производства, выпускаемых на нашем предприятии. Продукт состоит из парафина и синтетических или природных восков. Применяется для точного литья по выплавляемым моделям.

Наша продукция используется на предприятиях России.

 

Надеемся на деловое и взаимовыгодное сотрудничество.

 

Качественные характеристики восковых модельных составов Р-3, МВС-3Н приведены в таблице.

 

Наименование показателей

Требуемые нормы показателей модельных восковых составов

МВС-3Н*

ТУ 0258-001-51570957-2002

Р-3

ТУ 0255-004-0580799-98

Норм.

Норм.

1. Температура плавления, 0С

75-85

Не норм.

2. Температура каплепадения, 0С

Не норм.

75-82

3. Предел прочности при     статическом изгибе  при 18-20 0С

40-50

30

 4.Теплоустойчивость, 0С

Не менее 40

Не менее 34

 5. Кислотное число, мг КОН
     на 1г. состава

0,5

4,0

 6.Массовая доля золы %

0,03

0,03

 7.Массовая доля кокса,%

Не более 0,1

Не норм.

 8. Вязкость кинематическая при          100  0С, м2/с (сСт)

9*10-6 (9)

Не норм.

 

*- Данный восковой модельный состав МВС-3Н  ТУ 0258-001-51570957-2002 аналогичен модельным массам МВС-3А, МВС-15, МС-В и является улучшенной, и более современной версией разработанной С –Петербургским институтом

ОАО «Пластполимер»

 

Цены на МВС-3Н,Р-3 – договорные.

.

 

            Исходя из Ваших потребностей, наше предприятие имеет возможность изготовить модельный восковой состав с характеристиками необходимыми для вашего производства.  

Воск ПВ-200, воск ПВ-300, воск пчелиный , МВС-3А , воск буроугольный

Информация

ООО "РЕЗЕРВ НК" предлагает со склада Москвы : ПВ-200 применяется для подслоя на бумажную подложку в электронной промышленности, для заливочных составов в кабельной промышленности, для улучшения свойств полиграфических красок. ПВ-300 применяется для производства модельно- восковых составов. Воск пчелиный производственный , Срок хранения: не ограничен Условия хранения: не регламентируются Область применения: для приготовления косметических средств, полировочных мастик, водоотталкивающих пропиток для тканей, красок; при выделке кожи, а также в медицине. Воск идёт для приготовления свечей, искусственных цветов; для лепки вместо глины. При переработке из пчелиного воска можно получить два высококачественных продукта для косметики- душистый воск и липиды. Модельно-восковой состав МВС-3А является сплавом на основе природных парафинов и восков для изготовления выплавляемых моделей в процессе точного литья деталей в машиностроении.

11 марта 2020 в 17:12 (до 19.01.2038) РЕЗЕРВ НК («РЕЗЕРВ НК, ООО»)
Магазин «РЕЗЕРВ НК, ООО»

Другие предложения от РЕЗЕРВА НК, ООО

  • Этиленгликоль высший сорт 99, 8% в мелкой таре.
  • Синтанол АЛМ-7, АЛМ-10.
  • Присадки:Агидол-1;2, ДФ-11, С-300, Сигбол, С-5А, Детерсол-140, ПМА-Д, КП-2,
  • Оксифос КД-6, Б, Б-1
  • Рабочие жидкости РЖ-3, РЖ-8 для электро-эрозионных станков .
Похожие объявления
  • Ортоксилол
  • Масла индустриальные И-5, 8, 12, 20, 30, 40, 50 ₽1
  • Литол-24, Солидол, Циатим, ТМ-9П, ПВК, воск и др.
  • ЦИАТИМ-201 фасовка в ассортименте со склада в Нижнем Новгороде
  • Бутилцеллозольв ТУ Продукция завода ПАО «Казаньоргсинтез» ₽50

Твердые нефтепродукты (Воски)| Нектон Сиа

Твердые нефтепродукты (Воски)

27. 03.2012

Наряду с парафинами, церезинами, петролатумами и вазелинами к товарным нефтепродуктам на базе твердых углеводородов относят также воски, восковые композиции и составы, широко применяемые в различных областях промышленности. Получают их путем фракционирования парафинов и церезинов, либо обезмасливанием специально подобранного парафиносодержащего сырья, а также путем компаудирования парафинов, церезинов, петролатумов и их смесей с полимерными, смоляными и другими добавками для усиления или придания композициям определенных функциональных свойств.

       

К числу таких восковых продуктов относят воски для терморегуляторов, для резин, для покрытия сыров, для литья по выплавляемым моделям, для прессового производства, заливочные и прошпарочные массы, защитные восковые и водно-восковые составы различного назначения.

      Воски для терморегуляторов

       

Воски для терморегуляторов - узкие фракции парафинов, церезинов и их смесей - применяют в датчиках температуры, реагирующих на изменение объема воска при его плавлении и кристаллизации.  

   

Синтетический церезин для терморегуляторов (ТУ 38.101261-79) выпускают трех марок. Применяют для терморегуляторов, автоматически регулирующих тепловое состояние двигателей внутреннего сгорания в интервале температур 70...93 градусов Цельсия. Получают путем глубоковакуумного фракционирования синтетического высокоплавкого церезина.

   

Специальные воски для датчиков температуры (ТУ 38.40102-81) представляю собой специально подобранные смеси твердых углеводородов, получаемых путем глубоковакуумного и холодного фракционирования парафинов и церезинов.

Применяют для терморегуляторов, обеспечивающих автоматическое поддержание заданных температур различных тепловых систем в интервале 15...102 °C.

Воски для резин

Эти воски применяют для защиты резин от отрицательных атмосферных воздействий, светоозонного и теплового старения, в качестве мягчителей резины.

В процессе эксплуатации резин как в статически, так ив динамически нагруженном состоянии воски, выпотевая на поверхность резин, препятствуют разрушающему воздействию света и озона, увеличивая срок годности резиновых изделий.

Защитный воск Паралайт-17 (ТУ 38.1011042-85) - композиция церезина 80 с парафином.

предназначен для защиты резины от атмосферных воздействий при эксплуатации в умеренном и тропическом климате.

Защитный воск ЗВП (ТУ 398.1011290-90) представляет собой фракцию твердых углеводородов, получаемую путем обезмасливания специально подобранной смеси гача и петролатума.

Используется при производстве шин и других резино-технических изделий.

Защитный воск ЗВ-ПФ (ТУ 38.401212-93) - композиция высокоплавкого парафина с церезином.

По эффективности защитного действия и области применения аналогичен защитному воску ЗВП.

Сплав АФ-1 (ТУ 38. 101595-81) представляет собой композицию церезинов нефтяного и синтетического с парафином.

Применяют в производстве резино-технических изделий для защиты их от озонного растрескивания.

Мягчитель ПП для резины (ТУ 38.101225-94) применяют при изготовлении резин для кабельной промышленности.

 Получают сплавлением парафина с петролатумом.

      Воски для покрытия сыров

Для защиты твердых сычужных сыров от высыхания и плесневения в период их вызревания и хранения применяют глубокоочищенные воски, допущенные к контактам с пищевыми продуктами.

   

Восковой сплав СДС-13М для сыров (ТУ 38.101225-94), представляет собой композицию глубокоочищенного нефтяного воска с полимерными добавками. В качестве основы применяют воск ВН-2 (ТУ 38.401210-93), который представляет собой фракцию твердых парафиновых углеводородов, выделенных обезмасливанием смеси петролатума и целевого фильтрата, полученного в процессе обезмасливания широкой фракции гача. Для использования в сплаве СДС-13М воск ВН-2 подвергают глубокой очистке.

Модельные восковые составы

Модельные восковые составы применяют на предприятиях машиностроения для точного стального литья. Предложено более 200 рецептур восковых составов для стального литья, но практическое использование нашли лишь единицы. Ниже приведена информация по двум модельным восковым составам, по которым организовано централизованное производство.

Модельный восковой состав МВС-ЗА (ТУ 38.101516-76) представляет собой композицию глубокообезмасленного парафина и высокоплавкого нефтяного церезина с полимерной добавкой.

Предназначен для точного стального литья по выплавляемым моделям.

Модельный восковой состав МВС-15 (ТУ 38.1011044-85) представляет собой композицию высокоплавкого церезина с техническим парафином и полимерной добавкой.

Предназначен для литья по выплавляемым моделям в цехах точного литья заводов тракторного и сельскохозяйственного машиностроения.

      Воски для прессового производства

В прессовом производстве машиностроительных предприятий автомобильной и других отраслей промышленности воски используются при изготовлении рабочих моделей и оснастки для штампов и пресс-форм.

  

Восковой лист ЛК-4С (ТУ 38.101300) представляет собой парафино-церезиновую композицию с полимерными добавками и красителем красного цвета.

Предназначен для изготовления модельной оснастки в прессовом производстве. Выпускают в виде пластин размером 450 х 1000 х 0,8 мм

Восковой лист ЛЖ-4 (ТУ 38.101452-80) предназначен для изготовления рабочих моделей в прессовом производстве. Имитирует листовой металл разной толщины. Выпускают в виде пластин размером 305 х 610 х (0,75-3,0) мм.

С одной стороны лист ЛЖ-4 покрыт невысыхающим клеем, что обеспечивает его прилипание к мастер-модели. Для предотвращения слипания восковые листы перекладывают антиадгезионной силиконизированной бумагой, которую перед использованием листов отделяют без нарушения клеевого слоя.  

Восковая паста ЦСМ-1 ( ТУ 101344-77) представляет собой дисперсию высокоплавкого церезина в смеси скипидара и уайт-спирита.

Применяют в качестве разделительного слоя при изготовлении модельной оснастки прессового производства.

Выпускают в герметично закрывающихся металлических банках.

ВОСКОВЫЕ КОМПОЗИЦИИ И СОСТАВЫ - Справочник химика 21

    В состав этих продуктов, как правило, входят сложные петролатумные композиции с большим содержанием маслорастворимых ингибиторов коррозии, ПАВ и углеводородных растворителей. Продукты этой группы образуют на металле эластичные, восковые или мазеобразные мягкие пленки. Основным представителем группы МЛ-1 яьляется продукт мовиль. [c.196]
    Сорта церезина с высокой температурой плавления можно употреблять для пропитывания форм без смешивания с другими материалами. Однако наиболее целесообразно производить пропитку в восковых композициях, т. е. в сплавах отдельных компонентов, составленных так, чтобы пропитывающий состав обладал следующими качествами  [c.40]

    Очень хорошими свойствами обладает восковая композиция, применяемая для механической записи звука при изготовлении граммофонных пластинок. Такая композиция имеет следующий примерный состав (в % по весу)  [c.42]

    В состав твердых углеводородов входят компоненты, различающиеся по свойствам и, в частности, по температуре плавления. От соотношения углеводородов, плавящихся при разных температурах, зависят многие важнейшие эксплуатационные характеристики нефтяных парафинов, церезинов и восковых композиций, такие, как пластичность, твердость, скорость затвердевания, возможность применения в широком или узком диапазоне температур. [c.33]

    Модельный восковой состав МВС-15 (ТУ 38.1011044-85) представляет собой композицию высокоплавкого церезина с техническим парафином и полимерной добавкой. [c.485]

    В состав продуктов, как правило, входят сложные мыльно-полимерно-восковые (петролатумные) композиции с большим содержанием маслорастворимых ингибиторов коррозии и других ПАВ и углеводородные растворители, обеспечивающие высокие водовытесняющие, проникающие и пропитывающие свойства ПИНС этой группы. Продукты образуют на металле эластичные, восковые или мазеобразные мягкие пленки. [c.18]

    Состав восковой для сыров, ГОСТ 7508—55, представляет собой композицию из парафина (любой марки, кроме спичечного) и петролатума ПК. Состав должен сдаваться окрашенным органическими красителями. Применяется для покрытия сыров с целью предохранения их от усыхания и плесневения. Температура каплепадения, отсутствие запаха и вкуса и ограниченное содержание механических примесей — основные показатели качества воскового состава. [c.376]

    Состав восковой № 23, МРТУ 12 Н № 85—64, представляет собой композицию из петролатума по ГОСТ 4096—62 (40 2%) и парафина спичечного по ГОСТ 784—53 (60 2%). Применяется для изготовления восковых моделей при бронзовом литье. Основными показателями качества воскового состава являются температура каплепадения и глубина проникания иглы. [c.385]

    Проведенные исследования показывают, что наилучшие варианты применения кремнеорганических соединений все-таки не являются достаточно эффективными, так как не позволяют сохранить гидрофобность в течение 12 часов дождевания. Наилучшие варианты позволяют получить износостойкость только до 6 часов. В связи с этим были проведены изыскания способа повышения эффективности покрытий при дождевании. Проведенные исследования привели в конце концов к применению на силикатном стекле тонких двухслойных покрытий, состоящих из кремнеорганического подслоя и органического наружного слоя. В результате изучения большого количества различных веществ для образования наружного слоя была выбрана композиция из церезина, полиэтилена, нолиизобутилена и лакового бензина (восковой состав). Двухслойное покрытие обеспечивает увеличение износостойкости в два раза. [c.340]


    Восковая композиция включает 70 % гаровакса, восковая мон-тановая композиция — 30 % (температура плавления 58,5 °С). Состав пропиточного лака (г) асфальт 50, сера 3,5, льняное масло 150, скипидар 50, бензин 200 смесь нагревают до температуры 120°С и перемешивают. Состав каучукового лака (г) каучук 50, кани-( юль 120, скипидар 300 (готовят так же, как и пропиточный лак).[c.267]

    Хорошо высушенная форма должна иметь совершенно белый цвет и издавать при постукивании специфический звук сухого гипса. Сухая форма быстро воспринимает пропитку и не дает трещин-Гипсовые формы пропитывают расплавленными восковыми составами с температурой плавления от 50 до 125°, в зависимости от состава пропиточной композиции предпочтительны составы, имеющие низкую температуру плавления. Формы, погружаемые в пропиточньг и состав, прогреваются до его температуры при этом состав медленно проникает в поры гипса, вытесняя воздухе. В зависимости от времени выдержки гипсовых форм в составе глубина пропитки может быть различной и считается достаточной при толщине примерно от 2 до 5 мм.- [c.39]

    В зависимости от области применения, каждая из которых предъявляет строго определенные требования к качеству потребляемых продуктов, парафины и церезины должны обладать совокупностью эксплуатационных свойств, обусловленной составом и кристаллической структурой твердых углеводородов, на базе которых получены эти продукты. Знание взаимосвязи состава и свойств твердых углеводородов нефти позволяет создавать восковые продукты, представля-юцще собой смеси парафинов и церезинов (взятых в определенных соотношениях), которые обеспечивают высокое качество получаемой композиции. В ряде случаев для улучшения комплекса физико-химических и эксплуатационных свойств восковых композиций в их состав вводят добавки, повышающие стабильность против окисления, улучшающие адгезионные, оптические, физико-химические и другие свойства. [c.57]

    Способность кремнийорганических соединений улучшать блеск и кроющую способность восковых композиций используют при приготовлении различных косметических препаратов, в частности губных помад, в состав которых вводится до 6—10% ПМС [12]. Губная помада представляет собой сложную композицию, включающую жиры, масла, воска, эфиры, наполнители, красители и ароматические вещества. Рецептуры отечественных и зарубежных помад примерно одинаковы, однако последние, как правило, содержат силоксаны, которые придают губной помаде специфические потребительские свойства блеск и хорошую кроющую способность. В качестве добавок за рубежом используют жидкие полиметилсилоксаны с вязкостью 200—300 мм с. В Советском Союзе для этих целей применяют полиэтилсилоксановую жидкость ПЭС-5 и полиметилсилоксановую жидкость ПМС-200А. Их вводят в расплав стандартной жировой основы помады в количестве 8—10%. Губная помада с добавкой силоксанов не оказывает на кожу раздражающего и аллергического действия. [c.271]

    У одельный восковой состав МВС-ЗА (ТУ 38.101516—76) представляет собой композицию глубокообезмасленного парафина и высокоплавкого нефтяного церезина с полимерной добавкой. [c.484]

    В качестве углеводородных загустителей ПИНС могут быть использованы самые разнообразные восковые составы и сплавы— для пищевой промышленности (№ 36, СКФ-15), для флег-матизаторов (СФ-3 и др.), а также воски, используемые в шинной, резинотехнической и других отраслях промышленности ОМСК-1, ОМСК-7, ЦСМ-1, паразон 5Н, ЗВ-1 и др. Технология получения и химический состав твердых углеводородов защитных восков приведены в работах [98]. Показана перспективность получения твердых углеводородов и защитных композиций на их основе из остаточных продуктов переработки западно-сибирских нефтей. Из смесей масла, петролатума, церезина, парафина с добавкой полиизобутилена и окисленного церезина (присадка МНИ-7) вырабатывают защитные смазки ВТВ-1 и ВТВ-2, используемые для защиты от коррозии электроаппаратуры и электрооборудования автомобилей семейства Жигули . Церезин или воск Совцернн с полимерными добавками служат основой для защитных восковых составов изоляционного типа, наносимых из растворителей ПСС-5, ПСС-6, ПЭВ-74. [c.145]

    Состай восковой для кондитерских изделий № 36, ГОСТ 7509—55, представляет собой композицию из ларафина (любой марки, кроме спичечного), церезина и вазелинового медицинского масла в соотношении 1 1 2. [c.375]

    Показатели Восковой состав № 23. МРТУ 12Н № 85-64 Композиция № 3 для пластилина, МРТУ38-1Г-2-68 Методы испытаний [c.385]

    Восковой состав № 23 представляет собой композицию из парафина и пет-ролатума. [c.330]

    Озокерпт широко используется и в других отраслях народного хозяйства в парфюмерии применяется специальный церезин для косметических це.ией (ВТУ 499-53) в пищевой прол1Ышленно-сти восковой состав для кондитерских изделий (ГОСТ 7509-55) в резиновой иромышленности озокеритовая композиция (ГОСТ 780-54) как мягчитель при пропитке резиновых тканей. [c.195]


Эффективное масштабируемое производство терапевтических микровезикул, полученных из мезенхимальных стволовых клеток человека

Изготовление массивов цилиндрических микролунок из ПЭГ-гидрогелей с перевернутыми пирамидальными отверстиями

Для настройки массивов цилиндрических микролунок с перевернутыми пирамидальными отверстиями использовались два процесса формования, процесс формования полидиметилсилоксана (PDMS, СИЛИКОНОВЫЙ ЭЛАСТОМЕР SYLGARD® 184, Dow Corning, Мидленд, Мичиган, США) для формирования формы с противоположной структурой PDMS и процесс формования PEG для получения окончательных массивов микролунок гидрогеля PEG.Для первого процесса формования требовалась мастер-форма из кремния (Si), которая имела ту же структуру, что и окончательная конструкция микролунки, и была изготовлена ​​на кремниевой пластине (Waferbiz, Сеул, Корея) с использованием традиционных технологий микротехнологий, таких как мокрое травление Si для отверстия в форме перевернутой пирамиды, сухое травление для цилиндрических структур и процессы распыления и фотолитографии для индивидуальных масок мокрого травления и сухого травления. Изготовленная Si мастер-форма использовалась в первом процессе формования для формирования встречной формы из PDMS, которая имела форму перевернутой Si мастер-формы.Раствор PDMS (соотношение смолы и отвердителя в составе 10: 1) выливали на Si-матрицу и отверждали при 95 ° C в течение 2 часов. Структуры PDMS, отделенные от Si мастер-формы, использовались во втором процессе формования PEG для формирования окончательных массивов микролунок PEG-гидрогеля. Для второго процесса формования ПЭГ использовался раствор ПЭГ, который состоял из фосфатно-солевого буфера (PBS, Lonza, Базель, Швейцария), фотоинициатора (BASF, Людвигсхафен, Германия) и диметакрилата поли (этиленгликоля) 1000 (PEGDMA 1000, Polysciences, Inc., Warrington, PA, USA) в соотношении 10: 0,1: 1 соответственно, выливали на предметное стекло, предварительно покрытое 3- (триметоксисилил) пропилметакрилатом (TMSPMA. Sigma, St. Louis, MO, USA). Раствор PEG штамповался с помощью встречной формы PDMS, и УФ-индуцированное сшивание PEG проводили при 7 Вт / см 2 в течение 65 секунд (Omnicure ® S2000, Excelitas Technologies Corp., Уолтем, Массачусетс, США). После удаления противоформы PDMS изготовленные массивы микролунок с гидрогелем PEG хранили в 70% растворе этанола до использования.

3D-культура hMSC с использованием микролунок

hMSC (PT2501, Lonza, Basel, Switzerland) культивировали в инкубаторе с 5% CO 2 при 37 ° C. Среда для выращивания представляла собой среду Игла, модифицированную Дульбекко с низким содержанием глюкозы (DMEM, Gibco, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США), содержащую 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS, Hyclone, Logan, UT, США) или FBS без экзосом (System Biosciences, Palo Альто, Калифорния, США) и 1% антибиотиков-антимикотиков (Gibco). FBS, добавленный в нашу культуральную среду hMSC, предварительно фильтровали через 0.22-мкм мембраны для устранения большинства МВ, происходящих из FBS, в анализе. Для посева hMSC в массивы микролунок клетки трипсинизировали с использованием TrypLE Express (Gibco) и подсчитывали с помощью гемоцитометра. Затем их суспендировали в 200 мкл культуральной среды с плотностью 5 × 10 5 клеток / матрица и высевали по каплям в наборы микролунок. ЧМСК объединились в микролунках и агломерировались в виде сфероидов, которые наблюдали с помощью фазово-контрастной микроскопии через 20 мин и 1 день после посева клеток, соответственно.Затем их культивировали при 30 об / мин в орбитальном шейкере в течение 7 дней. Фибробласты мыши (NIh4T3, ATCC, Манассас, Вирджиния, США) также культивировали в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы (Gibco), содержащей 10% FBS (Hyclone) и 1% антибиотиков-антимикотиков (Gibco), и использовали для сравнения включений цитокинов в собранных Видеоклипы с таковыми из чМСК.

Выделение MV из культуральной среды hMSC

MV были выделены из собранных сред последовательным центрифугированием при 2500 × g в течение 10 минут для удаления клеточного дебриса / апоптотических тел и при 14000 × g в течение 45 минут при 10 ° C для получения гранул MV 58,59 .

Анализ живых и мертвых hMSC-сфероидов

Жизнеспособность клеток hMSC-сфероидов оценивали с использованием набора LIVE / DEAD Viability / Cytotoxicity Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Сфероиды hMSC были сформированы, как описано выше, и собраны в D3, D5 и D7 в группе 3D со встряхиванием. Изображения кальцеина AM (живые клетки) и EthD-1 (мертвые клетки) получали с помощью флуоресцентного микроскопа (EVOS, Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, США).

Гистологический анализ hMSC-сфероидов

hMSC-сфероиды фиксировали с использованием 4% (мас. / Об.) Параформальдегида (Sigma).После промывки PBS фиксированные образцы помещали в раствор яичного альбумина, разбавленного глицерином, а затем центрифугировали при 3000 об / мин в течение 5 минут с последующим стандартным протоколом заливки в парафин. Срезы погружали в ксилол (Junsei, Tokyo, Japan) для депарафинизации, а затем помещали в этанол с уменьшающейся концентрацией для регидратации. Образцы окрашивали H&E (Sigma) и M&T (Sigma) с использованием стандартных протоколов и наблюдали под микроскопом (EVOS, Advanced Microscopy Group).

Анализ кинетики роста

Количество клеток определяли количественно с использованием набора для количественного анализа ДНК (CyQUANT NF Cell Proliferation Assay Kit, Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя.

Массив кПЦР для характеристики hMSC-сфероидов

Суммарные РНК из hMSC экстрагировали с использованием реагента Trizol (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. 84 гена, представляющие характеристики hMSC, были количественно проанализированы с использованием коммерческого набора матриц qPCR (RT 2 Profiler TM PCR array: Human Mesenchymal Stem Cells, Qiagen, Hilden, Germany) в соответствии с инструкциями производителя.

Количественная оценка проточной цитометрии и характеристика размера MV

Метод проточной цитометрии был использован для фенотипирования и подсчета MV, как сообщалось ранее 27,28 . Выделенные MV дважды окрашивали анти-CD105 (AbD Serotec, Кидлингтон, Великобритания) и анти-аннексином V (BD Pharmingen, Сан-Хосе, Калифорния, США) 29 , чтобы подтвердить, что подсчитанные MV произошли от hMSC. Абсолютное количество MV анализировали с использованием как прямого рассеяния (FSC), так и бокового рассеяния (SSC) в логарифмическом режиме (проточный цитометр FACS Verse и программное обеспечение BD FACSuiteTM, BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США).Стандартные шарики 0,22, 0,45, 0,88 и 1,35 мкм (Nano Fluorescent Size Standard, Spherotech, Lake Forest, IL, USA) использовали для оценки размера подсчитываемых MV; в частности, положение затвора R1 было предварительно определено с использованием стандартных шариков 1,35 мкм для обнаружения частиц размером менее 1 мкм. Счетные шарики (7 мкм, CountBrightTM Absolute Counting Beads, Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) были использованы и введены в интервал R2 для расчета абсолютных количеств MV, следуя инструкциям производителя (1):

$$ \ frac {{ \ rm {MVs}}} {{\ rm {\ mu}} {\ rm {l}}} = \, (\ frac {total \, events} {назначено \, bead \, count}) \, \ times \, (\ frac {standard \, bead \, event} {volume \, of \, sample}) $$

Подсчитанные MV были нормализованы по количеству клеток в соответствующей культуральной группе, чтобы скорости продукции MV были соизмеримы среди групп с одинаковым стандартом.

Чтобы подтвердить, что собранные MV не были агрегатами белка, а скорее настоящими пузырьками, окруженными липидным двойным слоем, мы исследовали их структурную чувствительность с помощью Triton X-100, который обычно используется для липосомного переваривания 28,31 . Собранные MV погружали в 3% раствор Triton X-100 (Sigma), разбавленный PBS, и измеряли с помощью проточного цитометра, как описано выше.

Количественное определение белка в MV

Содержание белка в MV измеряли с помощью набора Micro BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific) в соответствии с инструкциями производителя.Измеренное количество белка нормализовали к количеству клеток в соответствующей культуральной группе для сравнения всех групп с одним и тем же стандартом.

Определение морфологии и размера MV с использованием TEM

MV фиксировали в течение ночи 2,5% (мас. / Об.) Глутаровым альдегидом (Sigma) в 4% (мас. / Об.) Растворе параформальдегида (Sigma) при 4 ° C. После инкубации в 1% (мас. / Об.) OsO 4 в течение 1 часа образцы дегидратировали в серии разбавителей этанола, пропускали через оксид пропилена и заливали эпоксидной смолой (Epok 812, 02–1001, Окен, Япония. ).Ультратонкие срезы (60 нм) собирали на никелевые сетки 200 меш и окрашивали в течение 10 мин в 1% уранилацетате и цитрате свинца Рейнольдса. Образцы наблюдали с помощью электронного микроскопа Hitachi HT7700 (Токио, Япония) при 80 кВ. Приблизительно 1400 MV были случайным образом выбраны из одиннадцати изображений ПЭМ, и их размеры были измерены с использованием программного обеспечения ImageJ (NIH, Bethesda, MD, USA) для анализа распределения частиц по размерам.

Вестерн-блоттинг-анализ апоптотических телец

Лизаты MV, клеточный дебрис и цельные hMSC для вестерн-блоттинга экстрагировали буфером RIPA, содержащим ингибиторы протеаз и ингибиторы фосфатаз (Roche, Базель, Швейцария).Концентрации белка определяли методом Брэдфорда. Лизаты (25 мкг) подвергали электрофорезу на SDS-полиакриламидных гелях и переносили на мембраны из PVDF (Millipore, Billerica, MA, USA). После блокирования мембраны инкубировали в течение ночи при 4 ° C с первичными антителами: человеческим антитромбоспондином (разведенным до 1: 500, BD Pharmingen) и человеческим анти-C3b (разведенным до 1: 500, BD Pharmingen). Затем мембраны инкубировали со вторичными антителами (разведенными до 1: 5000, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, США).Полосы визуализировались с усиленной хемилюминесценцией (Millipore).

Приготовление и лечение IBE

Все эксперименты на животных были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) Института биомедицинских исследований Samsung (SBRI, номер разрешения 20160106001) и выполнены в соответствии с требованиями Института ресурсов лабораторных животных (ILAR). ) руководящие указания. Все животные содержались в соответствии с соответствующими законами и институциональными руководящими принципами Исследовательского центра лабораторных животных (LARC; учреждение, одобренное AAALAC International, No.001003) в Медицинском центре Самсунг. Анестезию индуцировали с использованием лицевой маски самцам крыс Sprague-Dawley (SD) (возраст 7-8 недель, 250-300 г) 4% изофлураном (Hana Pharm, Gyeonggi-do, Корея) и поддерживали 1,5% изофлураном в 70 случаях. % N 2 O и 30% O 2 . Температуру тела поддерживали на уровне 37,0–37,5 ° C (ректально) с помощью грелок. Мы вызвали преходящую окклюзию средней мозговой артерии (tMCAo), используя ранее описанный метод внутрипросветной окклюзии сосудов, модифицированный в нашей лаборатории 60 .IBE получали через 3 дня после 90-минутной tMCAo. Ипсилатеральные полушария гомогенизировали в среде DMEM (150 мг / мл) на льду. После центрифугирования при 10000 × g при 4 ° C в течение 10 минут супернатанты собирали и хранили при -70 ° C. hMSC высевали в колбы T75 при плотности 6 × 10 5 клеток на колбу и культивировали при 37 ° C в 5% CO 2 в течение 24 часов. Сохраненный IBE размораживали и центрифугировали при 2500 × g в течение 10 минут для удаления мусора. После 5-кратного разбавления DMEM, IBE центрифугировали при 14000 × g в течение 45 мин при 10 ° C и фильтровали с 0.Фильтр на крышке бутылки 2 мкм для удаления МВ из экстрактов тканей. hMSC подвергались действию приготовленного IBE в течение 24 часов.

Анализы терапевтических включений, содержащихся в MV: цитокины и микро-РНК

Высокопроизводительный скрининг различных включений цитокинов в MV, связанных с терапевтической способностью, был проведен с использованием нескольких наборов набора цитокинов, таких как Proteome Profiler TM Набор человеческих цитокинов XL (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США), набор человеческих антител к ангиогенезу (Abcam, Кембридж, Великобритания) и набор человеческих антител против воспаления (Abcam), следуя инструкциям производителя.Чтобы определить ключевые игроки в нейрогенной и / или ангиогенной молекулярной передаче сигналов в MV, мы выполнили анализ экспрессии микро-РНК с использованием количественной ПЦР. Суммарные РНК IBE- и 3D-MV экстрагировали с использованием реагента Trizol (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии микро-РНК измеряли с использованием праймеров RT «стебель-петля» и TaqMan PCR Mastermix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) и нормализовали по уровням miR-16. Праймеры для микро-РНК были включены в тесты TaqMan® MicroRNA Assays (Applied Biosystems), miR-16 (Cat.№ 4427975–000391), miR-134 (№ по каталогу 4427975-001186), miR-137 (№ по каталогу 4427975-001129), miR-184 (№ по каталогу 4427975-000485), miR-210 ( Кат. № 4427975-000512), miR-150 (Кат. № 4427975-462465), miR-155 (Кат. № 4427975-002623) и miR-296 (Кат. № 4427975-002101). Относительные сравнения уровней экспрессии микро-РНК между IBE- и 3D-MV были рассчитаны с использованием сравнительного метода CT (2 - ΔΔCT ).

Анализ культуры HUVEC и образования пробирок

HUVEC были приобретены в ATCC и культивированы в покрытых 1% желатином колбах в M199 с добавлением 20% FBS, 5 ед / мл гепарина (Sigma), 3 нг / мл bFGF (Invitrogen), и антибиотики-антимикотики (Гибко).HUVEC пассажа 3–5 высевали на покрытые матригелем мкл-слайды в M199 с добавлением 1% FBS, 5 Ед / мл гепарина и антибиотиков-антимикотиков. Одновременно HUVEC обрабатывали 3 мкг / мл IBE- или 3D-MV без добавок фактора роста и сравнивали с контрольной (базальная среда) и группами, получавшими VEGF (100 нг / мл, Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США). ). Образование трубок HUVEC наблюдали через 6 часов после обработки, и количество петель, количество ветвей и длины ветвей были количественно определены с помощью программного обеспечения ImageJ.

Первичная культура НСК крыс

SD крысиных эмбрионов получали через 14,5 дней. Кору головного мозга собирали и погружали в DMEM / F12 (Gibco). Менинги удаляли и промывали в DMEM / F12 центрифугированием в течение 5 мин при 500 × g. Осадок коры головного мозга обрабатывали Аккутазой (Biowest, Nuaillé, Франция). Переваривание Accutase нейтрализовали добавлением DMEM / F12, содержащего 1% добавок N2, 20 нг / мл EGF, 20 нг / мл FGF и 1% антибиотиков-антимикотиков. Затем клетки распределяли пипеткой вверх и вниз несколько раз и осаждали центрифугированием.После повторного суспендирования в культуральной среде клетки переносили в колбы T25 и культивировали в инкубаторе при 37 ° C. После 5-7 дней культивирования нейросферы были пассированы для расширения NSC для будущих экспериментов.

Анализ нейрогенной дифференцировки NSC

NSC высевали при 2,5 × 10 5 клеток / мл на 24-луночные планшеты, покрытые 20 мкг / мл поли-D-лизина (Sigma) с использованием DMEM / F12 с добавлением N2 ( Gibco), 20 нг / мл bFGF (Invitrogen), 20 нг / мл EGF (Invitrogen) и антибиотики-антимикотики (Gibco).Для анализа NSC обрабатывали 3 мкг / мл IBE- или 3D-MV без добавок факторов роста. Эти экспериментальные группы сравнивали с контрольной (базальная среда) и группами, обработанными NGF (100 нг / мл, Thermo Scientific). После 4 дней культивирования нейрогенную дифференцировку NSC анализировали с использованием стандартного протокола иммуноцитохимии для кроличьего анти-Ki 67 (разведенное 1:50, Abcam) и мышиное анти-Tuj1 (разведенное 1: 100, Millipore). Вторичные антитела применяли последовательно следующим образом: меченый DyLight анти-кроличий IgG (разведенный 1: 200, 594 нм, Abcam) и меченный DyLight антимышиный IgG (разведенный 1: 200, 488 нм, Vector Laboratories, Burlingame, CA, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ).После монтажа с использованием Vectashield TM с 1,5 мкг / мл 4'-6 'диамидино-2-фенилиндола (DAPI) (Vector Laboratories) образцы были визуализированы с использованием флуоресцентного микроскопа (EVOS, Advanced Microscopy Group), и положительно окрашенные НСК были количественно с использованием программного обеспечения ImageJ.

Статистический анализ

Количественный анализ проводился в более чем трех независимых экспериментах (n ≥ 3), и данные были представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего (SEM). Различия между группами оценивали с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA, апостериорный тест Тьюки) на уровне значимости p <0.001 (***), 0,001

Доступность данных

Все данные, полученные или проанализированные в этом исследовании, включены в эту опубликованную статью (и ее файлы с дополнительной информацией).

Численное моделирование разрушения хрупких твердых тел при нагрузке I / III

В данном исследовании использовался численный анализ для проведения большого числа расчетов численной модели на основе новой модели полукруглого изгиба (SCB).Вместо существующих методов численных расчетов ( J -интегральный), для расчета параметров трещин смешанного режима использовался метод M -integral ( K I , K II и K III ), исследовать влияние геометрии и параметров материала на поведение разрушения при смешанном режиме нагружения I / III и прогнозировать траекторию разрушения. Результаты показали, что ограничения в области применения параметра смешения M e в предыдущих исследованиях могут быть в определенной степени преодолены.Диапазон M e был установлен для различных коэффициентов Пуассона и может использоваться в качестве эталона для реальных испытаний материалов. Траектория моделирования хорошо согласуется с экспериментально полученной траекторией разрушения, и предложенный метод может быть использован для моделирования траектории разрыва при смешанном режиме нагружения I / III.

1. Введение

Механика разрушения фокусируется на механических свойствах материалов и конструкций с трещинами. Трещины могут возникать в самом материале или возникать во время производства, и наличие и рост этих трещин снижает несущую способность конструкции или даже вызывает ее разрушение.

Полукруглый изгиб (SCB) - это классический тест на механику разрушения, который широко используется для исследования твердых материалов из-за присущих ему благоприятных свойств, таких как простота, минимальные требования к механической обработке, удобство тестирования и легкость достижения разрушения при растяжении, как сообщает Махинда и Куруппу [1]. Образец SCB был предложен Чонгом [2–4] и постепенно улучшался. Кроме того, он широко использовался для определения параметра разрушения K IC , и его потенциальное применение в испытании на разрушение в смешанном режиме было исследовано [5–9].Исследование образца SCB в основном включает испытания на вязкость разрушения и определение параметров разрушения [10–28], обсуждение и пересмотр ограничений критериев расширения [11, 13, 16, 25, 29, 30] и численное прогнозирование разрушения. путь [14, 20, 23, 27, 31–33]. Из-за ограничений формы образца, вышеупомянутые исследования были сосредоточены на параметрах разрушения режима I, режима II и смешанного режима I / II. Режим сдвига вне плоскости (режим III) не был так тщательно исследован, хотя он существует в реальных ситуациях.Кроме того, существующие методы испытаний сильно зависят от машины и испытательного оборудования и в основном ориентированы на металлические материалы, керамику и другие искусственные материалы [34–38].

Поскольку инженерные аварии, такие как разрушение горных пород и разрыв покрытия, происходят часто, исследование режима III вызвало большой интерес. Более того, наблюдения показали, что плоские трещины имеют тенденцию переориентироваться в наклонные плоскости во время распространения и могут расти в условиях смешанного режима I / III [39, 40].Поэтому были предложены методы испытаний и образцы в вышеупомянутых условиях для горных пород, бетона, асфальта и других материалов. Берто и др. применили критерий плотности энергии деформации (SED) к чистым режимам и смешанным режимам I / III условий нагружения [41–45]. Алиха и др. [46–49] предложили новую конфигурацию испытаний, названную ENDB образцом, для исследования поведения разрушения в смешанном режиме I / III. Кроме того, эта конфигурация может обеспечить произвольную композицию режима I и режима III.Примечательно, однако, что в эксперименте необходимо контролировать больше переменных. Linul et al. [50, 52] провели эксперименты с пеноматериалами и получили данные о вязкости разрушения для смешанных режимов I / II и I / III. Впоследствии Пирмохаммад [53] предложил новый тип образца SCB, поведение разрушения которого в смешанном режиме I / III легче исследовать, используя предложенные образцы с наклонной трещиной, и дополнительно исследовал поведение разрушения асфальтобетона при низкой температуре.

В предыдущих исследованиях [49, 53] изменение геометрических параметров и параметров материала оказало значительное влияние на смешанный режим I / II нагружения образцов SCB.Однако лишь несколько исследований изучали, влияют ли вышеупомянутые условия на поведение разрушения в режиме I / III. В этом исследовании был использован относительно точный метод численного анализа для исследования возможности реализации смешанного режима I / III нагружения и влияния геометрических параметров образца и коэффициента Пуассона на эти условия нагружения. Наконец, траектория трещины была смоделирована и проанализирована на основе параметров трещины.

2. Трехмерный численный анализ

В предыдущих численных исследованиях [41, 53, 54] параметры трещин рассчитывались напрямую с использованием интегрального метода J в программе Abaqus.Однако, по словам Ли, интеграл J больше подходит для задач разрушения чистой моды I [55]. Для разрушения в смешанном режиме наиболее точным методом расчета параметров трещины является уравнение эквивалентной области для интеграла взаимодействия ( M -интеграл) [56, 57]. Макроструктурная модель SCB была создана в Abaqus; Затем сетка была перестроена с использованием технологии адаптивной сетки в franc3D, и была вставлена ​​нижняя наклонная трещина. Наконец, с помощью интеграла M были получены различные значения K I , K II и K III .

Принципиальная схема полукруглой формы показана на рисунке 1; Радиус образца SCB ( R ), толщина образца ( t ) и половина диапазона нагрузки ( S ) в испытании SCB были определены путем моделирования в Abaqus. На рисунке 2 (а) показана сеточная модель Abaqus с ячейками C3D10. На рисунке 2 (b) показана сеточная модель после определения длины трещины ( a ) и угла трещины ( α ). На рисунке 3 показано распределение элементов и типы вершин трещин.Отдельный элемент был вставлен в вершину трещины, и интегральная оценка консервации была проведена вокруг двух колец элементов на фронте трещины. Для уменьшения локальных дискретных ошибок использовались внутреннее кольцо 15-узлового сингулярного клиновидного элемента и внешнее кольцо 20-узлового шестигранного элемента с симметричными сетками. Примечательно, что параметры разрушения ( K I , K II , и K III ), рассчитанные в зоне контакта с поверхностью, не являются надежными, поскольку условие локальной плоской деформации больше не поддерживается. .Элемент на вершине трещины может быть сильно деформирован, как показано на рисунке 2 (c), и симметрия сетки может быть потеряна. Кроме того, на рис. 2 (c) показано, что переходная область в вершине трещины имеет пирамидальные элементы, а глобальная область представляет собой элемент тетраэдрического типа.



В созданных моделях радиус образца SCB ( R ), толщина образца ( т ) и приложенная нагрузка ( P ) являются инвариантами, соответственно, 75 мм, 32 мм и 40,3437 кН.Геометрические параметры и параметры материала, такие как отношение половины пролета точки нагружения ( S / R ), отношение длины трещины ( a / R ), угол трещины ( α ) и коэффициент Пуассона, варьировались в следующие диапазоны: S / R = {0,4, 0,6, 0,8}, a / R = {0,2, 0,26, 0,3}, α = {0, 5, 10, 15, 20 , 25, 30, 35, 40, 45, 48, 50, 52, 55, 60} и = {0,1, 0,2, 0,3, 0,4}. Когда α составляет 0 °, это разрушение чистой моды I.При увеличении α можно получить трещину смешанного типа I / III.

Параметры трещины ( K I , K II и K III ) могут быть непосредственно извлечены с помощью следующих выражений. Для линейного анализа мы можем добавить два действительных решения, и результатом будет действительное решение, как показано ниже:

Давайте рассмотрим решения с угловой меткой (1) как результаты Abaqus и решения с угловой меткой (2) как решения, которые мы можем выбрать.Их можно подставить в выражение для интеграла J следующим образом:

Согласно теореме взаимности Бетти, имеет место следующее соотношение:

Собрав члены, можно получить следующее соотношение: с

Кончик трещины Скорость высвобождения энергии может быть определена из интеграла закрытия трещины Ирвина для мелкомасштабной текучести в предположении условий плоской деформации следующим образом:

Подставляя в выражение для скорости выделения энергии, мы получаем следующее соотношение:

Приравнивая два определения для M -Integral, мы можем получить следующее соотношение: где

Мы использовали результаты Abaqus для решения (1) и выбрали три простых вспомогательных решения (2a), (2b) и (2c).В таблице 1 представлены значения асимптотических решений для трещин чистой моды.


K I K II K III
1,0 0,0 0,0
b 0,0 1,0 0,0
c 0.0 0,0 1,0

Из аналитических выражений для полей фронта трещины можно получить следующее:

Подставив значение K (2) , представленный в Таблице 1, в уравнении (9), мы можем получить три уравнения для неизвестных K (1) , как показано ниже: где - коэффициент Пуассона, - интегральная кривая от конца трещина, - дельта Кронекера, q - функция, которая равна единице на вершине трещины и нулю на границе области интегрирования и может интерпретироваться как виртуальное расширение трещины, является значением функции q вдоль фронта трещины, а L - длина цилиндрической области вдоль фронта трещины.это решение, предоставленное результатами Abaqus.

K I , K II и K III могут быть выражены безразмерными параметрами Y I , Y II и Y III , а именно:

Для проверки того, что метод численного моделирования может точно реализовать ГРП в смешанном режиме I / III, K I , K II и K III вершины трещины по толщине образца были приняты после обработки нормализации, как показано на рисунке 4.Здесь K n ( n = I, II, III) - параметр разрушения, а K Im - максимальное значение режима I. Отношение длин трещин ( a / R ) модели составляет 0,26, половина отношения точки нагружения ( S / R ) составляет 0,8, а угол трещины ( α, ) составляет 0 °, 20 °, 40 ° и 60 °. ° соответственно.

Рисунок 4 (а) показывает, что, когда α было 0 °, разрушение произошло в условиях чистой моды I; K I по направлению толщины образца оставалась примерно неизменной в определенном диапазоне (0.1 < z / t <0,9) и уменьшилась на свободной поверхности, что согласуется с результатами численного моделирования, представленными Алихой и Сагхафи [54]. Кроме того, значение z / t было принято равным 0,5 для значения K I образца.

Рисунки 4 (b) –4 (d) показывают, что по мере увеличения α эффекты мод I и III преобладали в определенном диапазоне (0,2 < z / t <0,8) вдоль направления толщины. образца.Доля моды II была мала, и ею можно было пренебречь, когда z / t было 0,5, что согласуется с ранее опубликованными результатами численного анализа [46–49]. Учитывая, что расчет зоны контакта поверхности K I , K II и K III не является надежным, и согласно традиционному определению поля сингулярных напряжений вблизи свободной поверхности, Широко признано, что поле напряжений в вершине трещины отличается, как это обсуждали Бажант и Эстенсоро [58].Следовательно, K I , K II и K III близко к свободной поверхности не следует рассматривать, и этот численный метод действителен и осуществим для испытания разрушения смешанного режима I / III. . Примечательно, что при смешанном режиме нагружения I / III вершина трещины по толщине образца полностью соответствует точке, где z / t составляет 0,5. Поэтому в последующих расчетах эта точка рассматривалась как значение K I , K II и K III образца.

Параметр смешивания M e может использоваться для описания относительных вкладов режима I и режима III, как выражено уравнением (15). В условиях чистой моды I значение M e равно единице и уменьшается по мере увеличения вклада режима III:

Для количественной оценки роли режима I и режима III в численном моделировании , мы предлагаем подставить уравнение (16) вместо уравнения (15), а параметр | M e | может изменяться от 0 до 1, что соответствует условиям нагрузки чистого режима III и режима I соответственно:

3.Результаты и обсуждение
3.1. Результаты численных расчетов и анализ

Отношение длины трещины ( a / R ) осталось неизменным на уровне 0,267 и a = 20 мм. Влияние угла трещины ( α ), половинного отношения пролета точки нагружения ( S / R ) и коэффициента Пуассона для Y I , Y III и | M e | были исследованы. На рисунках 5 и 6 показаны варианты Y I , Y III и | M e |, с углом наклона трещины ( α ) для различных значений S / R и в образце SCB.

Из анализа изображений были сделаны следующие выводы: (a) Y III оставалось равным нулю только тогда, когда α было 0 °. Для того же α , увеличение S / R и продвижение Y I . Но для Y III увеличение S / R привело к его уменьшению и увеличению соответственно. (Б) Для чистой моды I ( α = 0 °) увеличение способствовал вкладу режима I, и скорость роста имела тенденцию к увеличению.(c) С увеличением α , после входа в смешанный режим I / III нагружения, значения Y I постепенно уменьшались, и | Y III | сначала увеличился, а затем уменьшился. Кроме того, α , соответствующий | Y III | max медленно увеличивался с увеличением S / R . Чувствительность Y I к изменениям уменьшалась по мере увеличения α , а чувствительность Y III была максимальной при | Y III | макс .(d) Увеличение стоимости S / R оказало лишь незначительное влияние на | M e | значения, когда было 0,1 образцов SCB. При изменении диапазона от 0,2 до 0,4 увеличение S / R , очевидно, привело к уменьшению | M e |. Кроме того, по мере увеличения α нисходящий тренд стал более очевидным.

Половина коэффициента пролета точки нагружения ( S / R ) осталась неизменной и составила 0.8, S = 60 мм, и влияние угла трещины ( α ), отношения длины трещины ( a / R ) и коэффициента Пуассона () на Y I , Y III и | M e | были исследованы. На рисунках 7 и 8 показаны варианты Y I , Y III и | M e | с углом наклона трещины ( α ) для различных значений a / R и в образце SCB.На рисунке 9 показан | M e | мин. получается с заменой на / R и.


На основе анализа изображений были сделаны следующие выводы: (a) Для того же α увеличение на / R и привело к значениям Y I . Но для Y III увеличение на / R и привело к его уменьшению и увеличению соответственно.(b) Значение α , соответствующее | Y III | макс. стабилизировано примерно при 49 °. (C) Для значений | M e |, увеличение на / R привело к продвижению M e ; когда значение a / R было относительно небольшим, влияние на M e было меньше при том же α .(d) Значение α было 60 °, что соответствует | M e | мин. всех образцов SCB. Как и , / R стал меньше, тем меньше | M e | мин. Было получено значение , минимальное значение составило 0,39. В этом случае вклад модели III был явно выше по сравнению с вкладом модели I. Кроме того, для меньшего / R оказал лишь незначительное влияние на | M e | мин ; однако, когда / R был больше, | M e | мин был более чувствителен к вариациям.

Следует отметить, что правило, описанное в предыдущем разделе, не описывается.

3.2. Моделирование траектории разрушения

С использованием K I , K II и K III значений вершины трещины и критерия максимального растягивающего напряжения (MTS), три группы моделей ( S / R = 0,8; a / R = 0,267; α = 0 °, 30 °, 45 ° и 60 °) были получены для пути разрушения и роста трещины, как показано на рисунках 10 и 11.Для облегчения сравнения режим отказа после переворота изображения по горизонтали хорошо согласуется с предыдущими результатами [53].


При смешанном режиме нагружения I / III морфология роста поверхности трещины отличалась от плоского разрушения. Рисунок 12 (а) показывает, что, когда возникла трещина в плоскости (режим I, режим II и смешанный режим I / II), поверхность трещины оставалась в той же плоскости, несмотря на определенный прогиб. Однако на Рисунке 12 (b) показано, что, когда произошло разрушение в смешанном режиме I / III, поверхность трещины была скручена и отклонена от направления поверхности трещины, образуя угол, называемый углом перегиба.

Учитывая направление угла излома трещины (), компоненты нормального напряжения и касательного напряжения на новой плоскости могут быть получены путем преобразования координат следующим образом: где x , y и z - это исходные оси и x ′, y ′ и z ′ являются осями плоскости трещины после прогиба. Коэффициент интенсивности преобразованного напряжения может быть выражен следующим образом:

Соотношение между скоростью высвобождения механической энергии и углом выражается следующим образом:

Путем совмещения вкладов режима III можно выразить соответствующий коэффициент интенсивности преобразованного напряжения. следующее.

Подставляя уравнение (18) в уравнение (19), можно получить выражение скорости высвобождения механической энергии, изменяющейся в зависимости от угла, для смешанного режима I / III. На рисунке 13 показана нормализация скорости выделения механической энергии вместе с изменением угла перегиба трещины ().


Как видно на графике, в случае чистого режима I трещиноватость ( K III / K I = 0) стала максимальной при угле перегиба () 0 °.Следовательно, трещина чистой моды I распространялась в направлении оригинала, когда угол перегиба составлял 0 °. При добавлении наложения вклада моды III ( K III / K I = 0,25), как показано на рисунке 13, угол излома трещины отклонился от исходной плоскости трещины на угол, который может быть рассматривается как поправка за счет режима III. Наконец, трещина двигалась вверх в направлении, перпендикулярном максимальному главному растяжению, и переходила от смешанного режима I / III к чистому режиму I.Результаты численного моделирования, представленные на рисунке 10, показывают, что поверхность растяжения постепенно возвращается в плоскость с изогнутой поверхности вблизи точки нагружения и, наконец, разрушается вблизи точки нагружения. Это явление согласуется с тем, что поверхность излома делится на три области [53]. В таблице 2 представлен угол перегиба от 0,2 до 0,8 на фронте трещины при различных α , извлеченных из Franc3D. Параметры образца SCB: S / R = 0.8, a / R = 0,267 и = 0,2. Кроме того, было замечено, что угол перегиба трещины связан с α , а большее значение α привело к большему углу перегиба.


α (°) z (т)
0,2 0,3 0,4 ​​ 0,5
4

0 0.055 0,003 0,083 0,129 0,094 −0,007 0,027
10 −5,691 −3,742 −2,034 902,034
20 −12,993 −8,229 −3,891 0,0435 3,933 8,833 13,207
30 − 99.466 −13,083 −6,010 0,071 6,762 13,082 20,372
40 −25,093 −16.241
9029.125
50 −30,394 −19,982 −9,789 −0,169 10,919 21,063 31,432
60 −
60 − −24.966 −12.113 −0.025 13.049 26.081 40.163

4. 9000 были сделаны следующие выводы. Численное моделирование в сочетании с анализом Abaqus и Franc3D было использовано для исследования влияния половины отношения пролета точки нагружения ( S / R ), отношения длины трещины ( a / R ), угла трещины ( α ) и коэффициент Пуассона () на поведение смешанного режима нагружения I / III.(b) Увеличение S, / R , a / R и продвижение безразмерных параметров Y I . Но для Y III только увеличение , / R и S / R привело к его снижению. По мере увеличения α чувствительность Y I уменьшалась с изменением, а чувствительность Y III становилась максимальной при | Y III | макс .(c) Очевидный подход к уменьшению параметра смешивания | M e | это уменьшить α . Дополнительно возможно уменьшение | M e | заменив S / R или на / R . Более того, материалы образцов SCB с малым размером показали лучший эффект восстановления. (D) | M e | мин. значений образцов SCB были получены при различных , / R и, что может быть использовано в качестве справочных данных для образцов SCB из различных материалов, подвергнутых испытаниям на нагрузку в смешанном режиме I / III.(e) Численные параметры, полученные с помощью интеграла M , были использованы для моделирования роста трещины и пути разрушения, что хорошо согласуется с предыдущими экспериментальными результатами. Связь между α и углом изгиба () была количественно проанализирована, и их положительная корреляция была подтверждена. Предлагаемый метод может быть использован для моделирования траектории трещины при смешанном режиме нагружения I / III.

Доступность данных

В статью включены все данные, использованные для подтверждения выводов этого исследования.

Конфликты интересов

Конфликты интересов относительно публикации этой статьи отсутствуют.

Благодарности

Авторы выражают признательность старшему инженеру Хайцзюну Вану и доктору Шуян Юю за их поддержку в этой исследовательской программе, а также выражают свою благодарность Национальной ключевой программе исследований и разработок Китая (2017YFC0404902), Национальному фонду естественных наук Китай (51739008), Фонд естественных наук провинции Цзянсу Китая (BK20171130) и операционные расходы на фундаментальные научные исследования Научно-исследовательских институтов общественного благосостояния на центральном уровне Китая (Y419005).

Опосредованный микровезикулами перенос микроРНК-150 от моноцитов к эндотелиальным клеткам способствует ангиогенезу

Недавние исследования нашей группы и других показывают, что микроРНК могут активно секретироваться во внеклеточную среду через микровезикулы (MV) и функционировать как секреторные сигнальные молекулы, влияющие на фенотипы реципиентных клеток. Здесь мы исследуем роль секретируемого моноцитами miR-150 в стимулировании образования капиллярных трубок эндотелиальных клеток и в усилении ангиогенеза.Анализы in vitro, образования капиллярной трубки и in vivo, ангиогенеза показали, что полученные из моноцитов МВ обладают сильной проангиогенной активностью. Путем истощения miR-150 из моноцитарных MV и увеличения miR-150 в MV, полученных из клеток, которые обычно содержат низкие уровни miR-150, мы также продемонстрировали, что содержание miR-150 объясняет проангиогенную активность моноцитарных MV в этих анализах. . Используя в качестве моделей мышей с имплантированной опухолью и мышей ob / ob, мы обнаружили, что секреция miR-150, которая увеличивается при таких заболеваниях, как рак и диабет, значительно способствует ангиогенезу.Однако доставка антисмысловых олигонуклеотидов против miR-150 мышам с имплантированной опухолью и мышам ob / ob через MV значительно снижает ангиогенез у обоих типов мышей. Наши результаты в совокупности демонстрируют, что секреция miR-150 через MV может способствовать ангиогенезу in vitro и in vivo , и мы также представляем новый терапевтический подход на основе микроРНК для лечения заболевания.

Предпосылки: механизм секретируемой miRNA, способствующей ангиогенезу, все еще неясен.

Результаты: секретированный miR-150 из моноцитов индуцирует образование трубок эндотелиальных клеток in vitro и ангиогенез in vivo , а подавление miR-150 ингибирует ангиогенез, вызванный диабетом, раком и атеросклерозом.

Заключение: происходящая из моноцитов miR-150 может индуцировать ангиогенез посредством нацеливания на эндотелиальные клетки.

Значение: наше исследование иллюстрирует новую роль секретируемой миРНК в ангиогенезе.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

% PDF-1.5 % 1 0 объект > >> эндобдж 4 0 obj / CreationDate (D: 201806205 + 08'00 ') / ModDate (D: 201806205 + 08'00 ') /Режиссер /Заголовок () / Ключевые слова () >> эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 5 0 obj > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / Аннотации [35 0 R] / MediaBox [0 0 595.32 841,92] / Содержание 36 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 0 >> эндобдж 6 0 obj > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 39 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 2 >> эндобдж 7 0 объект > / ExtGState> / XObject> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 42 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 3 >> эндобдж 8 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595.32 841,92] / Содержание 43 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 4 >> эндобдж 9 0 объект > / ExtGState> / XObject> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 46 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 5 >> эндобдж 10 0 obj > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 47 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 6 >> эндобдж 11 0 объект > / ExtGState> / XObject> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595.32 841,92] / Содержание 50 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 7 >> эндобдж 12 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 51 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 8 >> эндобдж 13 0 объект > / ExtGState> / XObject> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 53 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 9 >> эндобдж 14 0 объект > / ExtGState> / XObject> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595.32 841,92] / Содержание 57 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 10 >> эндобдж 15 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 58 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 11 >> эндобдж 16 0 объект > / ExtGState> / XObject> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 60 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 12 >> эндобдж 17 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595.32 841,92] / Содержание 63 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 13 >> эндобдж 18 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 64 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 14 >> эндобдж 19 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 65 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 15 >> эндобдж 20 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595.32 841,92] / Содержание 66 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 16 >> эндобдж 21 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / Аннотации [67 0 R] / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 68 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 17 >> эндобдж 22 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / Аннотации [70 0 R 71 0 R] / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 72 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 19 >> эндобдж 23 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595.32 841,92] / Содержание 74 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 22 >> эндобдж 24 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 75 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 23 >> эндобдж 25 0 объект > / ExtGState> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595,32 841,92] / Содержание 76 0 руб. / Группа> / Вкладки / S / StructParents 24 >> эндобдж 26 0 объект > эндобдж 27 0 объект > эндобдж 28 0 объект > эндобдж 29 0 объект > эндобдж 30 0 объект > эндобдж 31 0 объект > эндобдж 32 0 объект > эндобдж 33 0 объект > эндобдж 34 0 объект > эндобдж 35 0 объект > / F 4 / A> / StructParent 1 >> эндобдж 36 0 объект > ручей x \ YsF ~ Wɔ ͉6, ThJJW + 䁑 iHrR_s

Число гигантских полиплоидных раковых клеток (PGCC) глиомы, ассоциированных с формированием васкулогенной мимикрии, и степень злокачественности опухоли в глиоме человека | Журнал экспериментальных и клинических исследований рака

  • 1.

    Heppner GH: неоднородность опухоли. Cancer Res. 1984, 44 (6): 2259-2265.

    CAS Google Scholar

  • 2.

    Хоуп К., Бхатиа М: Клональное исследование стволовых клеток. Нат методы. 2011, 8 (4 доп.): S36-S40.

    CAS Статья Google Scholar

  • 3.

    Malpica A, Deavers MT, Lu K, Bodurka DC, Atkinson EN, Gershenson DM, Silva EG: Оценка серозной карциномы яичников с использованием двухуровневой системы.Am J Surg Pathol. 2004, 28 (4): 496-504.

    Артикул Google Scholar

  • 4.

    Поляк К. Гетерогенность рака груди. J Clin Invest. 2011, 121 (10): 3786-3788.

    CAS Статья Google Scholar

  • 5.

    Wolberg WH, Street WN, Mangasarian OL: Важность ядерной морфологии в прогнозе рака груди. Clin Cancer Res. 1999, 5 (11): 3542-3548.

    CAS Google Scholar

  • 6.

    Geigl JB, Obenauf AC, Schwarzbraun T, Speicher MR: Определение «хромосомной нестабильности». Тенденции Genet. 2008, 24 (2): 64-69.

    CAS Статья Google Scholar

  • 7.

    Holland AJ, Cleveland DW: Повторное посещение Бовери: хромосомная нестабильность, анеуплоидия и туморогенез. Nat Rev Mol Cell Biol. 2009, 10 (7): 478-487.

    CAS Статья Google Scholar

  • 8.

    Сторчова З., Пеллман Д: От полиплоидии к анеуплоидии, нестабильности генома и раку. Nat Rev Mol Cell Biol. 2004, 5 (1): 45-54.

    CAS Статья Google Scholar

  • 9.

    Витале I, Галлуцци Л., Сеновилла Л., Криолло А., Джемаа М., Кастедо М., Кремер Г.: Незаконное выживание раковых клеток во время полиплоидизации и деполиплоидизации. Смерть клетки отличается. 2011, 18 (9): 1403-1413.

    CAS Статья Google Scholar

  • 10.

    Vitale I, Senovilla L, Jemaa M, Michaud M, Galluzzi L, Kepp O, Nanty L, Criollo A, Rello-Varona S, Manic G и др.: Мультиполярный митоз тетраплоидных клеток: ингибирование p53 и зависимость от Mos. EMBO J. 2010, 29 (7): 1272-1284.

    CAS Статья Google Scholar

  • 11.

    Zhang S, Mercado-Uribe I, Xing Z, Sun B, Kuang J, Liu J: Генерация раковых стволовых клеток посредством образования полиплоидных гигантских раковых клеток.Онкоген. 2013 г., DOI: 10.1038 / onc.2013.96 Epub перед печатью

    Google Scholar

  • 12.

    Чжан С., Меркадо-Урибе I, Лю Дж .: Строма опухоли и дифференцированные раковые клетки могут происходить непосредственно из полиплоидных гигантских раковых клеток, индуцированных паклитакселом. Int J Cancer. 2013 г., doi: 10.1002 / ijc.28319 Epub перед печатью

    Google Scholar

  • 13.

    Sun B, Zhang D, Zhang S, Zhang W, Guo H, Zhao X: Гипоксия влияет на формирование васкулогенных мимикрических каналов и экспрессию белков, связанных с опухолевой инвазией, в меланоме.Cancer Lett. 2007, 249 (2): 188-197.

    CAS Статья Google Scholar

  • 14.

    Sun B, Zhang S, Zhang D, Du J, Guo H, Zhao X, Zhang W, Hao X: Васкулогенная мимикрия связана с высокой степенью злокачественности опухоли, инвазией и метастазами и короткой выживаемостью у пациентов с гепатоцеллюлярным карцинома. Oncol Rep.2006, 16 (4): 693-698.

    CAS Google Scholar

  • 15.

    Сиракава К., Кобаяси Х., Собадзима Дж., Хашимото Д., Симидзу А., Вакасуги Х .: Воспалительный рак молочной железы: васкулогенная мимикрия и ее гемодинамика модели ксенотрансплантата воспалительного рака молочной железы.Рак молочной железы Res: BCR. 2003, 5 (3): 136-139.

    Артикул Google Scholar

  • 16.

    Лю Р., Ян К., Мэн С., Чжан З., Сюй У.: Васкулогенная мимикрия является маркером плохого прогноза при раке простаты. Cancer Biol Ther. 2012, 13 (7): 527-533.

    CAS Статья Google Scholar

  • 17.

    Wang JY, Sun T, Zhao XL, Zhang SW, Zhang DF, Gu Q, Wang XH, Zhao N, Qie S, Sun BC: Функциональное значение VEGF-a в карциноме яичников человека: роль в васкулогенезе мимикрия.Cancer Biol Ther. 2008, 7 (5): 758-766.

    CAS Статья Google Scholar

  • 18.

    Sun B, Zhang S, Zhao X, Zhang W, Hao X: Васкулогенная мимикрия связана с плохой выживаемостью у пациентов с мезотелиальными саркомами и альвеолярными рабдомиосаркомами. Int J Oncol. 2004, 25 (6): 1609-1614.

    Google Scholar

  • 19.

    Сунь Б., Ци С., Чжан С., Сан Т., Чжао X, Гао С., Ни Ц, Ван Х, Лю И, Чжан Л.: Роль и механизм васкулогенной мимикрии в опухолях стромы желудочно-кишечного тракта.Hum Pathol. 2008, 39 (3): 444-451.

    CAS Статья Google Scholar

  • 20.

    Чжан С., Меркадо-Урибе И., Лю Дж .: Получение эритроидных клеток из фибробластов и раковых клеток in vitro и in vivo. Cancer Lett. 2013, 333 (2): 205-212.

    CAS Статья Google Scholar

  • 21.

    Франческоне Р., Скалли С., Бентли Б., Ян В., Тейлор С. Л., О Д., Морал Л., Шао Р. Опухолевые клетки, происходящие из глиобластомы, индуцируют васкулогенную мимикрию через активацию белка Flk-1.J Biol Chem. 2012, 287 (29): 24821-24831.

    CAS Статья Google Scholar

  • 22.

    El Hallani S, Boisselier B, Peglion F, Rousseau A, Colin C, Idbaih A, Marie Y, Mokhtari K, Thomas JL, Eichmann A, et al: Новый альтернативный механизм васкуляризации глиобластомы: тубулярный васкулогенный мимикрия. Мозг: нейрол. 2010, 133 (Pt 4): 973-982.

    Артикул Google Scholar

  • 23.

    Weidner N: Плотность микрососудов внутри опухоли как прогностический фактор рака. Am j pathol. 1995, 147 (1): 9-19.

    CAS Google Scholar

  • 24.

    Weidner N: Современные патологические методы измерения плотности внутриопухолевых микрососудов в карциноме молочной железы и других солидных опухолях. Лечение рака груди. 1995, 36 (2): 169-180.

    CAS Статья Google Scholar

  • 25.

    Zhang S, Guo H, Zhang D, Zhang W, Zhao X, Ren Z, Sun B: Модели микроциркуляции на разных стадиях роста меланомы. Онкол респ. 2006, 15 (1): 15-20.

    CAS Google Scholar

  • 26.

    Гуденбергер М.Л., Дженкинс РБ: Генетика взрослой глиомы. Ген рака. 2012, 205 (12): 613-621.

    CAS Статья Google Scholar

  • 27.

    Matsutani T, Hiwasa T, Takiguchi M, Oide T, Kunimatsu M, Saeki N, Iwadate Y: аутологичное антитело к src-гомологическому 3-домену GRB2-подобному 1 специфически увеличивается в сыворотках пациентов с низким уровнем глиомы степени.J exp Clin Cancer Res: CR. 2012, 31: 85-

    CAS Статья Google Scholar

  • 28.

    Ji T, Liu D, Shao W, Yang W, Wu H, Bian X: Снижение экспрессии LATS1 коррелирует с прогрессированием и прогнозом глиомы. J exp Clin Cancer Res: CR. 2012, 31: 67-

    CAS Статья Google Scholar

  • 29.

    Deb P, Pal S, Dutta V, Boruah D, Chandran VM, Bhatoe HS: Корреляция характера экспрессии аквапорина-1 в первичных опухолях центральной нервной системы с типом опухоли, степенью, пролиферацией, плотностью микрососудов, контрастом -усиление и перилезионный отек.Остаток рака. 2012, 8 (4): 571-577.

    CAS Статья Google Scholar

  • 30.

    Гердес Дж., Шваб У., Лемке Х., Штейн Х .: Получение мышиного моноклонального антитела, реактивного с ядерным антигеном человека, ассоциированным с пролиферацией клеток. Int J рак. 1983, 31 (1): 13-20.

    CAS Статья Google Scholar

  • 31.

    Ямамото Ю., Оно Ю., Ага Ф., Кавай Н., Кудоми Н., Нишияма Ю.: Корреляция поглощения 18F-FLT со степенью опухоли и иммуногистохимией Ki-67 у пациентов с впервые диагностированными и рецидивирующими глиомами.Журнал ядерной медицины: официальное издание Общества ядерной медицины. 2012, 53 (12): 1911-1915.

    CAS Статья Google Scholar

  • 32.

    Шольцен Т., Гердес Дж .: Белок Ki-67: из известного и неизвестного. J cell Physiol. 2000, 182 (3): 311-322.

    CAS Статья Google Scholar

  • 33.

    Rong Z, Li L, Fei F, Luo L, Qu Y: Комбинированное лечение глибенкламидом и CoCl2 снижает экспрессию MMP9 и подавляет рост высокометастатического рака молочной железы.J Exp Clin Cancer res: CR. 2013, 32: 32-

    CAS Статья Google Scholar

  • 34.

    Шираи К., Седов М.Р., Чакраварти А: Антиангиогенная терапия для пациентов с рецидивирующими и вновь диагностированными злокачественными глиомами. J Oncol. 2012, 2012: 1-

    Статья Google Scholar

  • 35.

    Коноплева М.Ю., Иордания CT: Стволовые клетки лейкемии и микросреда: биология и терапевтическое нацеливание.J Clin Oncol. 2011, 29 (5): 591-599.

    Артикул Google Scholar

  • 36.

    Squatrito M, Brennan CW, Helmy K, Huse JT, Petrini JH, Holland EC: Потеря компонентов пути ATM / Chk2 / p53 ускоряет развитие опухоли и способствует устойчивости к радиации в глиомах. Раковая клетка. 2010, 18 (6): 619-629.

    CAS Статья Google Scholar

  • 37.

    Коноплева М.Ю., Иордания CT: Стволовые клетки лейкемии и микросреда: биология и терапевтическое нацеливание.J Clin Oncol. 2011, 29 (5): 591-599.

    Артикул Google Scholar

  • 38.

    Ройтбак Т., Сурвиладзе З., Каннингем Л.А.: Непрерывная экспрессия HIF-1альфа в нервных стволовых клетках / клетках-предшественниках. Cell Mol Neurobiol. 2010, 31 (1): 119-133.

    Артикул Google Scholar

  • 39.

    Scully S, Francescone R, Faibish M, Bentley B, Taylor SL, Oh D, Schapiro R, Moral L, Yan W., Shao R: Трансдифференцировка стволовых клеток глиобластомы в настенные клетки стимулирует васкулогенную мимикрию в глиобластомы.Int j Neurosci: официальный журнал Общества неврологии. 2012, 32 (37): 12950-12960.

    CAS Google Scholar

  • 40.

    Folkman J, Browder T, Palmblad J: Исследование ангиогенеза: руководящие принципы для перевода в клиническое применение. Тромб и гемост. 2001, 86 (1): 23-33.

    CAS Google Scholar

  • 41.

    Zhang S, Zhang D, Sun B: Васкулогенная мимикрия: текущее состояние и перспективы на будущее.Раковый латыш. 2007, 254 (2): 157-164.

    CAS Статья Google Scholar

  • 42.

    Lin Z, Liu Y, Sun Y, He X: экспрессия Ets-1, Ang-2 и маспина при раке яичников и их роль в ангиогенезе опухоли. J exp Clin Cancer Res: CR. 2011, 30: 31-

    Статья Google Scholar

  • 43.

    Maniotis AJ, Folberg R, Hess A, Seftor EA, Gardner LM, Pe'er J, Trent JM, Meltzer PS, Hendrix MJ: Формирование сосудистых каналов клетками меланомы человека in vivo и in vitro: васкулогенная мимикрия .Am j pathol. 1999, 155 (3): 739-752.

    CAS Статья Google Scholar

  • Ремоделирование митрального клапана, вызванное стрессом: модель утолщения створки и образования наложенной ткани при заболевании митрального клапана | Сердечно-сосудистые исследования

    Аннотация

    Цели

    Недавно было высказано предположение, что при пролапсе митрального клапана (ПМК) утолщение створки связано, помимо миксоматозной дегенерации, с наличием наложенной ткани (SIT), определяемой как дополнительный фиброзный слой поверх оригинальный буклет.Механизмы образования СИТ в настоящее время неизвестны. Мы предположили, что образование SIT может быть результатом чрезмерного стресса створки, и мы использовали уникальную модель ex vivo для оценки корреляции между ремоделированием створки и типом и локализацией механического стресса, а также для выяснения механизмов, лежащих в основе образования SIT.

    Методы и результаты

    Пораженные митральные клапаны человека (MV; n = 21) были гистологически проанализированы на образование SIT и первоначальное утолщение створок.SIT состоит из различных композиций внеклеточного матрикса и может достигать более 50% общей толщины створки. Исходная толщина створки и толщина SIT не показали значимой корреляции ( r = -0,27, P = 0,23), что свидетельствует о различных механизмах регуляции. Для изучения роли механической среды в ремоделировании MV мыши MV культивировали в их естественном положении в сердце и подвергали различным гемодинамическим условиям, представляющим определенные фазы сердечного цикла и конфигурацию MVP.Образование SIT было индуцировано в модели ex vivo , в основном присутствующее на стороне предсердий и явно зависящее от продолжительности, типа и степени механического стресса. Специфические эксперименты по окрашиванию и отслеживанию клонов показали, что SIT состоит из макрофагов и миофибробластов и связан с активацией трансформирующего фактора роста бета и сигнальных путей костного морфогенетического белка. Миграция клапанных интерстициальных клеток и макрофагов через разрывы слизистой оболочки эндотелиальных клеток способствовала образованию SIT.

    Выводы

    Механические напряжения вызывают специфические клеточные и молекулярные изменения в MV, которые приводят к образованию SIT. Эти наблюдения дают первое представление о механизме образования SIT и представляют собой начальный шаг для определения потенциального нового и раннего лечения MVP.

    Абстрактное графическое изображение

    Абстрактное графическое изображение

    1. Введение

    Пролапс митрального клапана (ПМК) - распространенное заболевание клапанов, поражающее 1-2% населения и связанное с повышенной заболеваемостью и смертностью. 1 MVP характеризуется смещением митральной створки в левом предсердии во время систолы и часто приводит к тяжелой митральной регургитации (MR), для которой хирургическое (или чрескожное) восстановление или замена митрального клапана (MV) являются единственными вариантами лечения. . 2 Выпадение створки характеризуется миксоматозной инфильтрацией слоя фиброзы и расширением губчатой ​​оболочки, что вызывает значительное утолщение створки. 3 , 4 Предыдущие исследования описали также фиброзный слой на предсердной или желудочковой стороне створки МК, 5–7 , который позже был описан Roberts et al. 8 как накладывается на листовку и вносит значительный вклад в утолщение MV при MVP. Происхождение и механизмы образования этой наложенной ткани (SIT) все еще в значительной степени неизвестны. Было высказано предположение, что неблагоприятное ремоделирование клапана может быть результатом чрезмерного напряжения створок или аномального контакта между створками. 8 , 9 Фактически, MV показал способность («пластичность») изменять свою структуру и фенотип. 10 , 11 , но до сих пор нет исследований, изучающих взаимосвязь между образованием SIT и определенным напряжением, вызванным потоком, например, в условиях MVP.

    В этом исследовании мы исследовали разницу в ремоделировании створки, а именно в формировании SIT и первоначальном утолщении створки, в зависимости от типа и местоположения испытываемых механических нагрузок. Принимая во внимание гетерогенность MV в отношении анатомии, состава внеклеточного матрикса (ECM), биомеханического поведения и фенотипа клапанных интерстициальных клеток (VIC) и клапанных эндотелиальных клеток (VEC) 12 , 13 и возможных дифференциальных эффектов Мы использовали уникальную модель потока ex vivo , Miniature Tissue Culture System (MTCS), в которой MV сохраняет свою трехмерную структуру и культивируется в своем естественном положении. в сердце. 14 , 15 MV взрослых мышей подвергали различным гемодинамическим условиям, представляющим определенные фазы сердечного цикла или конфигурацию MVP, и структурное ремоделирование створок и клеточный состав сравнивали с таковыми, наблюдаемыми в створках митрального клапана, удаленных от пациентов с MVP. перенесла операцию.

    2. Методы

    2,1 человека MV

    части задних створок митрального клапана были собраны у пациентов ( n = 21), которые подверглись восстановлению МК по поводу тяжелой МР из-за ПМК ( Таблица 1 ).Сбор и обработка образцов производились в соответствии с Комитетом по медицинской этике Медицинского центра Лейденского университета после получения информированного согласия и в соответствии с принципами, изложенными в Хельсинкской декларации. Образцы фиксировали в течение ночи в 4% растворе параформальдегида в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PFA / PBS, pH 7,2).

    Таблица 1

    Клиническая характеристика 21 пациента

    Возраст (лет) n (%)
    Среднее ± SD 59 ± 14
    ≥65 8 (38)
    Пол
    Мужской 14 (67)
    Женский 7 (33)
    Коморбидность
    9029 Гипертензия Диабет 2 (10)
    Гиперхолестеринемия 3 (14)
    Сопутствующая ишемическая болезнь сердца 3 (14)
    9029 лет n (%)
    Среднее ± стандартное отклонение 59 ± 14
    ≥65 8 (38)
    G ender
    Мужской 14 (67)
    Женский 7 (33)
    Коморбидность
    Гипертония 2 (10)
    Гиперхолестеринемия 3 (14)
    Сопутствующая ишемическая болезнь сердца 3 (14)
    Таблица 1

    Клинические характеристики 21 пациента

    лет 90 ) n (%) Среднее ± стандартное отклонение 59 ± 14 ≥65 8 (38) Пол Мужской 14 ) Женский 7 (33) Коморбидность Гипертензия 5 (24) Диабет 2 (10) Гиперхолестеринемия 3 (14) Сопутствующая ишемическая болезнь сердца 9163 Возраст (лет) n (%) Среднее ± стандартное отклонение 59 ± 14 ≥65 8 (38) Пол4 Мужской 14 (67) Женский 7 (33) Коморбидность Гипертония 5 (24) Диабет 2ia 3 (14) Сопутствующая ишемическая болезнь сердца 3 (14)

    2.2

    Ex vivo Культура мыши MV

    Все эксперименты на животных проводились на мышах в возрасте 2–9 месяцев со смешанным генетическим фоном (B6; 129) в соответствии с протоколами, утвержденными комитетом по защите животных Медицинского центра Лейденского университета, и соответствовали руководящим принципам Директивы 2010/63 / EU Европейский парламент по защите животных, используемых в научных целях. Чтобы проследить судьбу макрофагов и клеток, происходящих из эндокарда, мышей LysMCre * Rosa26Sortm1 (EYFP) 16 , 17 и мыши VE-cadherin-CreERT2 18 скрестили с B6.Использовали 129 (Cg) -Gt (ROSA) 26-Sor tm4 (ACTB-tdTomato, –EGFP) Luo / J репортерную мышь (R26-mT / mG мышь) соответственно. Для обнаружения повышенной экспрессии желтого флуоресцентного (EYFP) и зеленого флуоресцентного белка (EGFP) иммунофлуоресцентное окрашивание выполняли для зеленого флуоресцентного белка (GFP).

    Мышиные сердца культивировали в MTCS, как описано ранее, 14 , 15 со следующими модификациями: выходная игла перфузионной камеры была заменена иглой с тупым концом 14 калибра, которая позволила среде выходить перфузионная камера.Между резервуаром и ловушкой для пузырьков помещали фильтр 0,2 мкм для контроля и сохранения стерильности культуры. Мышей анестезировали 4% изофлураном, сердце извлекали и переносили в перфузионную камеру, где его канюлировали, как описано ниже для каждой экспериментальной установки. В среду добавляли 4ОН-тамоксифен (1 мкМ; Sigma) для индукции рекомбинации с использованием мыши VE-cadherin-CreERT2. После культивирования сердца выделяли и фиксировали в течение ночи в 4% PFA / PBS.

    2.2.1 МВ культивировано в закрытом положении

    Для культивирования МК в закрытом положении ( Рисунок 1A-1 ) впускную иглу перфузионной камеры вставляли в аорту изолированного сердца и лигировали швами (Silk 7-0, Ethicon). С помощью насоса через аорту вводили поток, направляя среду в коронарный кровоток. Среда вышла из сердца через правое предсердие и рециркулировала в резервуар. Из-за повышения давления в левом желудочке (ЛЖ) МК остается закрытым.MV культивировали для 1 ( n = 3), 2 ( n = 2), 4 ( n = 2), 5 ( n = 3), 7 ( n = 16) и 14 ( n = 5) дней с разными скоростями потока (от 250 до 1600 мкл / мин). Группу из 10 некультивированных MV использовали в качестве контроля. Индекс сферичности ЛЖ (SI) использовался как косвенная мера механического напряжения, испытываемого клапаном в закрытом положении, и рассчитывался по соотношению короткой и длинной оси культивируемого ЛЖ (, рис. 1В, ).

    Рисунок 1

    Проточная система ex vivo для мышиных MV. ( A ) Схематическое изображение установки MTCS для посева МК с конфигурациями для (1) закрытого, (2) открытого и (3) положения пролапса митрального клапана (изменено из Kruithof et al. 2015). 14 ( B ) LV SI использовался как косвенная мера механического напряжения, испытываемого клапаном в закрытом положении, и рассчитывалась по отношению короткой оси к длинной оси LV.( C ) Схематический рисунок мыши MV для обозначения мест измерений.

    Рисунок 1

    Проточная система ex vivo для мышиных MV. ( A ) Схематическое изображение установки MTCS для посева МК с конфигурациями для (1) закрытого, (2) открытого и (3) положения пролапса митрального клапана (изменено из Kruithof et al. 2015). 14 ( B ) LV SI использовался как косвенная мера механического напряжения, испытываемого клапаном в закрытом положении, и рассчитывалась по отношению короткой оси к длинной оси LV.( C ) Схематический рисунок мыши MV для обозначения мест измерений.

    2.2.2 МВ культивировано в открытой позиции

    Для культивирования МК в открытом положении ( Рисунок 1A-2 ) игла для притока вводилась через легочную вену в левое предсердие и перевязывалась швами. Верхушка ЛЖ удалена. Среду направляли через отверстие MV в LV и через отверстие в верхушке в перфузионную камеру. MV ( n = 6) культивировали при скорости потока 1000 мкл / мин в течение 7 дней.

    Рисунок 2

    Утолщение листка больных МВ человека. ( A – C ) Окрашивание эластина, коллагена и гликоаминогликанов (ГАГ) на больных МВ человека с ( B и C ) или без SIT ( A ). ( D ) График толщины исходной створки (синий), предсердной (зеленый) и желудочковой (красный) SIT для каждого исследованного резецированного МК ( n = 21). Шкала 200 мкм ( A – C ) и 50 мкм ( A –C ′; A –C ″).

    Рисунок 2

    Утолщение листка больных МВ. ( A – C ) Окрашивание эластина, коллагена и гликоаминогликанов (ГАГ) на больных МВ человека с ( B и C ) или без SIT ( A ). ( D ) График толщины исходной створки (синий), предсердной (зеленый) и желудочковой (красный) SIT для каждого исследованного резецированного МК ( n = 21). Шкала 200 мкм ( A – C ) и 50 мкм ( A –C ′; A –C ″).

    2.2.3 МВ культивировано в положении пролапса

    Для культивирования MV с листком в положении пролапса ( Рисунок 1A-3 ) верхушка LV была удалена и передняя папиллярная мышца LV была разрезана. Приточную иглу вводили в ЛЖ через отверстие в верхушке и лигировали биосовместимым клеем (Histoacryl, B. Braun). Аорту лигировали швами. Среду направляли в LV и через отверстие выпавшего MV в левом предсердии, где она выходила из сердца через устье легочной вены.MV ( n = 4) культивировали в этом положении при скорости потока 1000 мкл / мин в течение 7 дней.

    Рисунок 3

    Ремоделирование культивированного MV ex vivo в закрытом положении. Схематическое изображение экспериментальной конфигурации с МВ в закрытом положении ( A ). Окрашивание эластина ( B, E, и H ), коллагена ( C, F и I ) и гликоаминогликанов (GAG; D, G и J ) на культивированных MV на 0 ( B – D ), 7 ( E – G ) и 14 ( H – J ) дней в закрытом положении.( K и L ) Толщина исходной створки на уровне средней части тела створки ( K ) и SIT ( L ) после 0 (не культивированный; n = 10), 7 ( n = 7) и 14 ( n = 6 для передней створки, n = 5 для задней створки) дней культивирования для передней и задней створок. Данные представлены как средние ± стандартная ошибка среднего. Для оценки значимых различий был проведен однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом множественных сравнений Бонферрони.* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, **** P <0,0001. ( M и N ) Корреляция между SI и толщиной предсердной и желудочковой SIT передней ( M ; n = 10) и задней ( N ; n = 10) створок, определенных с использованием метода Пирсона. r - тест корреляции. Шкала 100 мкм ( B, E, и H ) и 20 мкм ( B ′, B ″, E ′, E ″, H ′ и H ″) .

    Рисунок 3

    Ремоделирование культивированного MV ex vivo в закрытом положении. Схематическое изображение экспериментальной конфигурации с МВ в закрытом положении ( A ). Окрашивание эластина ( B, E, и H ), коллагена ( C, F и I ) и гликоаминогликанов (GAG; D, G и J ) на культивированных MV на 0 ( B – D ), 7 ( E – G ) и 14 ( H – J ) дней в закрытом положении.( K и L ) Толщина исходной створки на уровне средней части тела створки ( K ) и SIT ( L ) после 0 (не культивированный; n = 10), 7 ( n = 7) и 14 ( n = 6 для передней створки, n = 5 для задней створки) дней культивирования для передней и задней створок. Данные представлены как средние ± стандартная ошибка среднего. Для оценки значимых различий был проведен однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом множественных сравнений Бонферрони.* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, **** P <0,0001. ( M и N ) Корреляция между SI и толщиной предсердной и желудочковой SIT передней ( M ; n = 10) и задней ( N ; n = 10) створок, определенных с использованием метода Пирсона. r - тест корреляции. Шкала 100 мкм ( B, E, и H ) и 20 мкм ( B ′, B ″, E ′, E ″, H ′ и H ″) .

    2.3 Гистологический анализ

    Ткань клапана человека и культивируемые мышиные сердца дегидратировали с помощью дозированной серии этанола, очищали ксилолом, заливали парафином и делали срезы размером 6 мкм. Срезы окрашивали в соответствии с протоколом производителя резорцином фуксином Вейгерта (EMS) для идентификации эластичных волокон и контрастировали с ядерно-быстрым красным (Sigma). Срезы окрашивали с использованием трихрома Массона (набор для трихрома Массона, Klinipath) для визуализации коллагеновых волокон и альцианового синего (Klinipath) для визуализации гликоаминогликанов (ГАГ).

    Для иммунофлуоресцентного окрашивания срезы депарафинизировали, гидратировали и кипятили в течение 8 или 35 минут в буфере для поиска антигена [10 мМ Трис (pH 9) / 1 мМ ЭДТА / 0,05% Твин-20] с использованием скороварки. После блокирования 1% BSA в 0,1% Tween-PBS срезы инкубировали в течение ночи с первичными антителами, указанными в , таблица 2 , с последующей инкубацией с вторичными антителами, конъюгированными с Alexa (молекулярные зонды). Слайды монтируются с использованием DAPI, содержащего реагент ProlongGold Antifade (Thermofisher).Окрашивание на фосфо-SMAD1 / 5/9 (pSMAD1 / 5/9) и фосфо-SMAD2 (pSMAD2) проводили, как описано ранее. 19 Терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза dUTP для мечения по нику (TUNEL) была проведена в соответствии с инструкциями производителя ( набор для определения гибели клеток in situ ; Roche Applied Science).

    Таблица 2

    Обзор первичных антител

    Клетка Prolife ядерный антиген2
    Антитело . Виды . Разведение . Компания (каталожный номер) .
    Молекула адгезии эндотелиальных клеток тромбоцитов Кролик 1: 800 Санта-Крус (sc-1506)
    Зеленый флуоресцентный белок Курица 9 9
    Альфа-актин гладких мышц Мышь 1:10 000 Сигма (A2547)
    Виментин Кролик 1: 100 Передача сигналов клеток (# 3295)
    Мышь 1: 1000 Sigma (P8825)
    F4 / 80 Кролик 1: 100 eBioscience (12-4801-82)
    CD204 Кролик 1: 300 Abcam (ab64693)
    Расщепленная каспаза-3 Rabbit 1: 100 Сигнализация клеток (# 9 664)
    Клетка Prolife ядерный антиген2
    Антитело . Виды . Разведение . Компания (каталожный номер) .
    Молекула адгезии эндотелиальных клеток тромбоцитов Кролик 1: 800 Санта-Крус (sc-1506)
    Зеленый флуоресцентный белок Курица 9 9
    Альфа-актин гладких мышц Мышь 1:10 000 Сигма (A2547)
    Виментин Кролик 1: 100 Передача сигналов клеток (# 3295)
    Мышь 1: 1000 Sigma (P8825)
    F4 / 80 Кролик 1: 100 eBioscience (12-4801-82)
    CD204 Кролик 1: 300 Abcam (ab64693)
    Расщепленная каспаза-3 Rabbit 1: 100 Сигнализация клеток (# 9 664)
    Таблица 2

    Обзор первичных антител

    Клетка Prolife ядерный антиген2
    Антитела . Виды . Разведение . Компания (каталожный номер) .
    Молекула адгезии эндотелиальных клеток тромбоцитов Кролик 1: 800 Санта-Крус (sc-1506)
    Зеленый флуоресцентный белок Курица 9 9
    Альфа-актин гладких мышц Мышь 1:10 000 Сигма (A2547)
    Виментин Кролик 1: 100 Передача сигналов клеток (# 3295)
    Мышь 1: 1000 Sigma (P8825)
    F4 / 80 Кролик 1: 100 eBioscience (12-4801-82)
    CD204 Кролик 1: 300 Abcam (ab64693)
    Расщепленная каспаза-3 Rabbit 1: 100 Сигнализация клеток (# 9 664)
    Клетка Prolife ядерный антиген2
    Антитело . Виды . Разведение . Компания (каталожный номер) .
    Молекула адгезии эндотелиальных клеток тромбоцитов Кролик 1: 800 Санта-Крус (sc-1506)
    Зеленый флуоресцентный белок Курица 9 9
    Альфа-актин гладких мышц Мышь 1:10 000 Сигма (A2547)
    Виментин Кролик 1: 100 Передача сигналов клеток (# 3295)
    Мышь 1: 1000 Sigma (P8825)
    F4 / 80 Кролик 1: 100 eBioscience (12-4801-82)
    CD204 Кролик 1: 300 Abcam (ab64693)
    Расщепленная каспаза-3 Rabbit 1: 100 Сигнализация клеток (# 9 664)

    Все слайды были отсканированы с помощью сканера слайдов Pannoramic 250 (версия 1.23, 3DHISTECH Ltd.) и анализировали с помощью CaseViewer (версия 2.0, 3DHISTECH Ltd.).

    2.4 Измерения

    Измерения листовок и параметров SIT были выполнены на срезах, окрашенных на эластин, с использованием программного обеспечения CaseViewer. Граница между исходной листовкой и SIT ограничена эластичной мембраной, как описано ранее. 8

    Чтобы определить среднюю толщину резецированной ткани МК человека, были измерены поверхности исходной створки, желудочковой и предсердной SIT и разделены на длину створки.

    Аналогично, среднюю толщину как предсердной, так и желудочковой SIT листочков мыши определяли путем деления их поверхности на длину листочка. Кроме того, измерения толщины SIT и исходной створки были выполнены в месте введения фиброзного кольца, в середине тела створки и / или на свободном крае (, рис. 1C, ). Для каждого сердца использовали три фронтальных среза сердца с интервалом 196 мкм, показывающие как переднюю, так и заднюю створки МК, и измерения усредняли.

    Напряжение сдвига (дин / см 2 ) было рассчитано для MV, культивируемого в открытом положении, по формуле 4μQ / πr 3 , где μ - вязкость воды при 37 ° C (= 0,006913 дин.с / см. 2 ), где Q - объемный расход, установленный на 0,017 см 3 / с (= 1000 мкл / мин), π = 3,1415

    59,

    r (см) - радиус, измеренный как расстояние между центрами листочки тела передних и задних листочков.

    Программное обеспечение ImageJ используется для определения количества положительных клеток и ядер, а также площади и интенсивности положительного окрашивания.

    2,5 Статистический анализ

    GraphPad Prism 7 использовался для статистического анализа. Для статистического анализа двух групп использовались парные или непарные t -тесты. Дисперсионный анализ (ANOVA) с поправкой Бонферрони был выполнен для множественных сравнений, и корреляции были определены с использованием теста корреляции r Пирсона. Значение P <0,05 считалось значимым.

    3. Результаты

    3.1 SIT и толщина створки MV человека

    Для определения вклада SIT в утолщение пораженных МК, резецированную ткань исследовали и окрашивали на эластин, чтобы указать исходные границы створки 8 ( Рисунок 2A – C ). Степень образования SIT варьировалась от отсутствия ( рис. 2A и D ) до толстых слоев SIT на стороне предсердий и / или желудочков ( рис. 2B – D ), достигающих более 50% от общей толщины створки (рис. ). 2D ; Дополнительный материал в Интернете, Рисунок S1A ).В большинстве образцов SIT предсердий была толще, чем SIT желудочков (, рисунок 2D, ; дополнительный материал онлайн, , рисунок S1B, ). Не было обнаружено корреляции между толщиной исходной створки и SIT ( r = -0,27, P = 0,23; дополнительный материал онлайн, Рисунок S1C ), что свидетельствует о различных механизмах регулирования. SIT содержал широкий спектр эластических и коллагеновых волокон как на стороне предсердия, так и на стороне желудочка (для эластина очень мало в , рис. 2B ' и много в , рис. 2B и C '; для коллагена очень мало в Рисунок 2C ″ и многие из Рисунок 2C ').GAG в большинстве случаев обильно экспрессировались в SIT ( Рисунок 2 B и C ). В трех образцах были четко различимы несколько уровней SIT, каждый из которых содержал разные уровни компонентов ECM (, рис. 2C, 'и C ″). Эти наблюдения показывают, что SIT может вносить значительный вклад в общую толщину створки и имеет различный состав ECM.

    3.2 Ремоделирование мыши, культивируемой

    ex vivo , MV

    Чтобы определить, как измененная механическая среда может способствовать ремоделированию интактного нативного клапана, мышиные MV, культивируемые ex vivo 14 , постоянно подвергались механическим нагрузкам, как в закрытом (систола), открытом (диастола) или положение пролапса.

    3.2.1 МВ культивировано в закрытом положении

    Во время систолы МК находится в закрытом положении и испытывает давление со стороны желудочков и растяжение со стороны предсердий. В MTCS эта конфигурация была смоделирована (, рис. 3A, ) и привела к значительному увеличению общей толщины исходной створки (, рис. 3B – K, ). Интересно, что в то время как задний листок продолжал утолщаться до 14 дней, передний не показал дальнейшего утолщения через 7 дней ( Рисунок 3K ).

    SIT наблюдался как слой ткани, сформированный на предсердной стороне над эластичными волокнами ( Рисунок 3E, H, и L ), и, в меньшей степени, на стороне желудочков ( Рисунок 3H и л ). Наибольшее увеличение SIT произошло между 7 и 14 днями культивирования на стороне предсердий ( Рисунок 3H и L ), в то время как желудочковый SIT не наблюдался ранее, чем через 14 дней культивирования ( Рисунок 3E, H и L ).

    Организация ЕСМ в исходных листочках была изменена из-за разрушения коллагена ( Рисунок 3C, F и I ) и эластина ( Рисунок 3B, E и H ) и увеличения количества ГАГ ( Рисунок 3D, G и J ). В SIT эластин ( Рисунок 3E и H ) и коллагеновые волокна ( Рисунок 3F и I ) не были обнаружены через 7 и 14 дней культивирования, тогда как ГАГ присутствовали ( Рисунок 3G и ). J ).

    Для определения взаимосвязи между степенью механического стресса и образованием SIT или утолщением створок мыши MV культивировали в течение 7 дней в закрытом положении с различными скоростями потока. В результате наблюдалась определенная степень дилатации ЛЖ и измерялся SI, отражающий различное внутриполостное давление, испытываемое клапаном (, рис. 1B, ). Наблюдалась сильная корреляция между SI и средней толщиной SIT предсердий ( Рисунок 3M и N ).С другой стороны, не было обнаружено значительной корреляции между SI и толщиной исходных передних и задних створок (дополнительный материал онлайн, , рисунок S2A и B ).

    Эти наблюдения показывают, что культивирование MV в постоянно закрытом положении приводит к обеим формам утолщения клапанов, первоначальному утолщению створок и образованию SIT, а также к ремоделированию ECM. Кроме того, повышенное механическое напряжение, испытанное на этой модели, является сильным индуктором и усилителем образования SIT, но не для первоначального утолщения створок.

    3.2.2 МВ культивировано в открытой позиции

    Во время диастолы МК находится в открытом положении и испытывает напряжение сдвига на предсердной стороне створки. В проточной системе ex vivo была смоделирована эта конфигурация (, фиг. 4A, ). Культивирование мыши MV в течение 7 дней в непрерывном открытом положении привело к получению более толстых передних и задних створок ( Рисунок 4I ). Подобно тому, как это видно в закрытом положении, SIT формировался вдоль предсердной стороны створок ( Рисунок 4B ) с присутствием ГАГ, но без обнаруживаемых волокон коллагена и эластина ( Рисунок 4B – D ).SIT, однако, был толще (, рис. 4J, ) и располагался более свободно (, рис. 4B ', и B ″ ). Была обнаружена четкая связь между толщиной SIT обеих створок и напряжением сдвига (, рис. 4K ), что позволяет предположить, что постоянное высокое напряжение сдвига может вызывать образование SIT. Для задней створки, но не для передней, исходная толщина створки показала пограничную значительную корреляцию с напряжением сдвига ( r = 0,86; P = 0.06 для мид и r = 0,79; П = 0,06 для кольцевой части; Дополнительный материал в Интернете, Рисунок S3A и B ). Эти данные свидетельствуют о том, что напряжение сдвига может регулировать как образование SIT, так и первоначальное утолщение створки.

    Рисунок 4

    Ремоделирование культивированного MV ex vivo в открытом положении и пролапсе. ( A и E ) Схематические чертежи экспериментальной конфигурации с MV в открытом ( A ) и пролапсе ( E ) положении.( B – H ) Окрашивание эластина ( B и F ), коллагена ( C и G ) и гликоаминогликанов (GAG; D и H ) на митральном клапане, культивированном для 7 дней в открытом ( Б – Д ) и пролапсе ( Ф – Н ) положении. ( I и J ) Толщина исходной створки ( I ) и SIT ( J ) через 7 дней культивирования передних и задних листочков и сравнение не культивированных ( n = 10) , закрытое ( n = 16), открытое ( n = 6 для передней створки, n = 5 для задней створки) и положение пролапса ( n = 4) (MVP).( K ) График, изображающий связь толщины SIT с напряжением сдвига. Пунктирные линии в ( B ) и ( F ) обозначают кольцевую плоскость. Шкала 200 мкм ( B и F ) и 20 мкм ( B ′, B ″, C , D , F ′, F ″, G и H ). Данные представлены как средние ± стандартная ошибка среднего. Для оценки значимых различий был проведен однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом множественных сравнений Бонферрони.* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, **** P <0,0001.

    Рисунок 4

    Ремоделирование культивированного MV ex vivo в открытом положении и пролапсе. ( A и E ) Схематические чертежи экспериментальной конфигурации с MV в открытом ( A ) и пролапсе ( E ) положении. ( B – H ) Окрашивание эластина ( B и F ), коллагена ( C и G ) и гликоаминогликанов (GAG; D и H ) на митральном клапане, культивированном для 7 дней в открытом ( Б – Д ) и пролапсе ( Ф – Н ) положении.( I и J ) Толщина исходной створки ( I ) и SIT ( J ) через 7 дней культивирования передних и задних листочков и сравнение не культивированных ( n = 10) , закрытое ( n = 16), открытое ( n = 6 для передней створки, n = 5 для задней створки) и положение пролапса ( n = 4) (MVP). ( K ) График, изображающий связь толщины SIT с напряжением сдвига.Пунктирные линии в ( B ) и ( F ) обозначают кольцевую плоскость. Шкала 200 мкм ( B и F ) и 20 мкм ( B ′, B ″, C , D , F ′, F ″, G и H ). Данные представлены как средние ± стандартная ошибка среднего. Для оценки значимых различий был проведен однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом множественных сравнений Бонферрони. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0.001, **** П <0,0001.

    3.2.3 МВ культивировано в положении пролапса

    При ПМК МВ имеет патологическую конфигурацию с аномальным контактом между створками и аномальной картиной потока из ЛЖ в левое предсердие. Эта конфигурация MV была имитирована в проточной системе ex vivo (, фиг. 4E, ) с частью створок, расположенных над плоскостью митрального кольца (, фиг. 4F, ). Через 7 дней культивирования листок показал увеличенную толщину исходной листочки, подобную MV, культивируемому в открытом положении (, рис. 4K ), за исключением свободных краев, которые были значительно толще в обоих листочках по сравнению с закрытым положением ( Рисунок 4L ).

    SIT сформировался ( рис. 4F и J ) без коллагеновых и эластиновых волокон ( рис. 4F и G ), но с ГАГ ( рис. 4H, ) и с такой же протяженностью, как в закрытом положении ( рис. 4J ). Наблюдались тканевые перемычки между частями неправильных створок ( фиг. 4F ″ ) или частями створок, которые располагались близко друг к другу ( фиг. 4F и F ').

    Эти результаты предполагают, что конфигурация MVP с непрерывным ретроградным потоком вызывает первоначальное утолщение створки, в частности свободного края, и образование SIT.

    3.3 Механизмы образования СИТ

    В этой модели ex vivo образование SIT может иметь два возможных происхождения, а именно от клеток, которые растут из соседней ткани и мигрируют поверх листка, или, альтернативно, от самих клапанных клеток. После 7 дней культивирования с MV в закрытом положении, SIT на уровне фиброзного кольца отсутствовал или был тонким, тогда как SIT был толще в средней части тела створки (дополнительный материал онлайн, Рисунок S4 ), поддерживая второй гипотеза.

    Кроме того, чтобы получить дополнительную информацию о развитии образования SIT, MV культивировали в течение более коротких периодов времени и окрашивали на молекулу адгезии эндотелиальных клеток тромбоцитов (PECAM-1) и эластин. В начале культивирования ( n = 10) и через 1 день ( n = 3) культивирования с MV в закрытом положении не наблюдалось SIT, и слой VEC был интактным (, рис. 5A и F ). ). На 2-й день сначала наблюдался разрыв эндокардиальной выстилки на стороне контакта противоположных створок ( Рисунок 5B ; n = 2), за которым последовали разрывы на предсердной стороне тела створки.В дни 4 ( n = 2 из 3) и 5 ​​( n = 3) наблюдались скопления клеток, распространяющиеся через вновь образованные эндокардиальные отверстия ( Рисунок 5C ), формирующие первый SIT ( Рисунок 5H ). ). Было обнаружено, что SIT покрывает большую часть предсердной стороны через 7 дней ( Рисунок 5I ; n = 12 из 16) и 14 дней ( Рисунок 5J ; n = 5) культивирования с одиночными эндотелиальными клетками. и сосудистые структуры на границе МСН и оригинальной брошюры (стрелка на , рис. 5D 'и E' ).Выстилка VEC на желудочковой стороне МК оставалась в основном неповрежденной после 1 недели культивирования ( n = 13 из 16), тогда как через 2 недели также разрывы слизистой оболочки VEC (зеленая стрелка на рис. 5E ') и Образование SIT (зеленая стрелка на фиг. 5J ) не наблюдалось ( n = 5). Эти наблюдения предполагают, что VIC мигрируют через поврежденную подкладку VEC и образуют SIT. Повышенное количество клеток, положительных по ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA), наблюдалось в MV после 7 дней культивирования как в SIT, так и в исходном листке ( n = 4; Рисунок 5K и L ), что свидетельствует о вкладе пролиферации в расширение SIT.Кроме того, расщепленная каспаза-3- ( n = 4; фиг. 5M и N ) и TUNEL-положительные клетки ( n = 4; фиг. 5O и P ) наблюдались, главным образом в SIT, граничащей с исходный листок (75–95% апоптозных клеток), указывающий на наличие апоптоза. Совместное мечение с PECAM-1 показало апоптоз в эндотелиальных клетках на границе SIT с исходной створкой ( n = 3; фигура 50 ).

    Рисунок 5

    Механизм образования СИТ.Срезы MV мыши, культивируемые в закрытом положении для 0 ( A, F, и Q ), 2 ( B и G ), 5 ( C и H ), 7 ( D , I, K, M, O, R, T, V, и X ) и 14 ( Y ) дней и окрашены на эндотелиальный маркер PECAM-1 ( A – E ), эластин ( F – J ), маркер пролиферации PCNA ( K ), маркер апоптоза cCasp3 ( M ), PECAM-1 с окрашиванием TUNEL ( O ), GFP [маркировка линии макрофагов (линия M) ] и PECAM-1 ( Q и R ), αSMA ( T ), виментин ( V ), коллаген I ( X ) и GFP [линия эндотелиальных клеток (линия EC)] вместе с PECAM-1 и αSMA ( Y ).Пунктирные линии в C ', D', E ', I, J, K, M, R, T, V, и X указывают приблизительное расположение слоя эластина. Стрелка ( B ) указывает на нарушение слоя эндотелиальных клеток. Стрелки в ( C ') указывают скопления клеток, выходящие за пределы листочка. Стрелки в ( D ') и ( E ') показывают множественные разрушения слоя эндотелиальных клеток и сосудоподобной структуры. L , N и P - это графики, отображающие процентное содержание PCNA-, cCasp3-, TUNEL-положительных клеток в день 0 ( n = 5, 5, 3) и 7 ( n = 5 , 4, 4) культуры. S , U и W - это графики, отображающие процент GFP (линия M) -положительных клеток ( n = 4), процент αSMA-положительной области ( n = 7) и интенсивность окрашивания виментина ( n = 5) в SIT и оригинальном листке-вкладыше (OL). График в ( Z ) отображает процент GFP (EC-lineage) -положительных клеток, экспрессирующих PECAM-1 ( n = 6). Данные в ( L , N , P и Z ) представлены как средние значения ± SEM.Данные в ( S , U и W ) представлены как отдельные эксперименты. Для оценки значимых различий был проведен непарный t -тест для ( L, N и P ) и парный t -тест отношения для ( S , U и W ). Шкала 200 мкм ( A – E и O ) и 20 мкм ( A ′ - E ′, K , M , O ′, O ″, Q , R , T , V , X и Y ).* P <0,05, ** P <0,01, **** P <0,0001.

    Рисунок 5

    Механизм образования СИТ. Срезы MV мыши, культивируемые в закрытом положении для 0 ( A, F, и Q ), 2 ( B и G ), 5 ( C и H ), 7 ( D , I, K, M, O, R, T, V, и X ) и 14 ( Y ) дней и окрашены на эндотелиальный маркер PECAM-1 ( A – E ), эластин ( F – J ), маркер пролиферации PCNA ( K ), маркер апоптоза cCasp3 ( M ), PECAM-1 с окрашиванием TUNEL ( O ), GFP [маркировка линии макрофагов (линия M) ] и PECAM-1 ( Q и R ), αSMA ( T ), виментин ( V ), коллаген I ( X ) и GFP [линия эндотелиальных клеток (линия EC)] вместе с PECAM-1 и αSMA ( Y ).Пунктирные линии в C ', D', E ', I, J, K, M, R, T, V, и X указывают приблизительное расположение слоя эластина. Стрелка ( B ) указывает на нарушение слоя эндотелиальных клеток. Стрелки в ( C ') указывают скопления клеток, выходящие за пределы листочка. Стрелки в ( D ') и ( E ') показывают множественные разрушения слоя эндотелиальных клеток и сосудоподобной структуры. L , N и P - это графики, отображающие процентное содержание PCNA-, cCasp3-, TUNEL-положительных клеток в день 0 ( n = 5, 5, 3) и 7 ( n = 5 , 4, 4) культуры. S , U и W - это графики, отображающие процент GFP (линия M) -положительных клеток ( n = 4), процент αSMA-положительной области ( n = 7) и интенсивность окрашивания виментина ( n = 5) в SIT и оригинальном листке-вкладыше (OL). График в ( Z ) отображает процент GFP (EC-lineage) -положительных клеток, экспрессирующих PECAM-1 ( n = 6). Данные в ( L , N , P и Z ) представлены как средние значения ± SEM.Данные в ( S , U и W ) представлены как отдельные эксперименты. Для оценки значимых различий был проведен непарный t -тест для ( L, N и P ) и парный t -тест отношения для ( S , U и W ). Шкала 200 мкм ( A – E и O ) и 20 мкм ( A ′ - E ′, K , M , O ′, O ″, Q , R , T , V , X и Y ).* P <0,05, ** P <0,01, **** P <0,0001.

    3.4 Вклад сотовой связи в формирование МСН

    Для определения клеточного вклада в образование SIT мышей LysMCre * Rosa26Sortm1 (EYFP) использовали для отслеживания вклада клеток, полученных из костного мозга. Двойное окрашивание YFP ​​и маркеров макрофагов CD206 и F4-80 показало, что практически все YFP-положительные клетки в MV были макрофагами (не показаны).В не культивируемых сердцах макрофаги наблюдались под эндокардом предсердия и рассредоточены по свободному краю ( n = 8; Рисунок 5Q ), как описано ранее. 20 В MV, культивируемых в закрытом положении, макрофаги были расположены вокруг разрывов эндотелиальных клеток и в сформированном SIT на 7-й день культивирования ( n = 4; Рисунок 5R ), при этом процент клеток был макрофаги были выше в SIT по сравнению с исходной листовкой ( Рисунок 5S ).Вместе эти наблюдения предполагают, что резидентные макрофаги вносят вклад в SIT.

    Кроме того, для визуализации миофибробластов проводили окрашивание альфа-актина гладких мышц (αSMA). В начале культивирования под VEC предсердия наблюдались одиночные миофибробласты ( n = 9 из 12; не показано). После 7 дней культивирования 60,4% [стандартная ошибка среднего (SEM): ± 5,0%; n = 9] SIT был αSMA-положительным по сравнению с 6,2% (SEM: ± 1,0%; n = 9) исходной брошюры (, рис. 5T и U ).Эти миофибробласты и другие клетки, содержащие виментин, экспрессируемый SIT (, фиг. 5V, ), типичный клапанный маркер с такой же интенсивностью, как и клетки в исходной створке (, фиг. 5W, ). Кроме того, цитозольная экспрессия коллагена I наблюдалась в 61,7% (SEM: ± 4,6%; n = 6) проживающих в SIT клеток ( Рисунок 5X ), что указывает на их активное производство коллагена.

    Чтобы определить, произошли ли VIC в SIT из эндотелиальных клеток посредством трансформации эндотелия в мезенхиму (EMT), отслеживание клонов эндотелиальных клеток выполняли с использованием мышей VE-cadherin-CreERT2 / R26-mT / mG.Cre-рекомбинацию индуцировали добавлением тамоксифена в начале культивирования, позволяя мечение эндотелиальных клеток GFP. В шести MV, культивированных в течение 7 дней ( n = 4) и 14 дней ( n = 2), была достигнута средняя эффективность мечения 91,1% (SEM: ± 1,6%; PECAM-1-положительные клетки, экспрессирующие GFP). Ни одна из GFP-экспрессирующих клеток, находящихся в SIT (подсчитано 3039 клеток), не была отрицательной для PECAM-1, что указывает на то, что эндотелиальные клетки не вносят вклад в VIC в SIT по EMT ( рис. 5Y и Z ) и что резидентные VIC внести свой вклад в SIT.

    3,5 Костный морфогенетический белок и сигнальные пути трансформирующего фактора роста бета в образовании SIT

    Повышенная передача сигналов костного морфогенетического белка (BMP) и трансформирующего фактора роста-бета (TGFbeta) наблюдалась в миксоматозных клапанах человека 21 , 22 и на мышиных моделях болезни MV. 23 , 24 Для определения участия этих путей в образовании SIT, окрашивание проводилось для pSMAD1 / 5/9 и pSMAD2, сигнальных преобразователей путей BMP и TGFbeta, соответственно, на MV, культивируемых в закрытом положении. ( п = 4).Экспрессия как pSMAD1 / 5/9, так и pSMAD2 была повышена в культивируемых клапанах (, фиг. 6A – G, ) с клеточно-специфическими уровнями экспрессии pSMAD1 / 5/9 и pSMAD2 (, фиг. 6F '). Наблюдалась тенденция относительно большего количества клеток, экспрессирующих pSMAD1 / 5/9, но не pSMAD2, в SIT по сравнению с исходным листком (, фиг. 6H и I, ). Эти наблюдения предполагают важную роль сигнальных путей BMP и TGFbeta в образовании SIT.

    Рисунок 6

    Активация сигнальных путей BMP и TGFbeta во время ремоделирования митрального клапана ex vivo .Срезы мышиных MV культивировали в закрытом положении в течение 0 ( A, C, и E ) и 7 ( B, D, и F ) дней и дважды окрашивали на pSMAD1 / 5/9 ( A , B, E, и F ) и pSMAD2 ( C – F ). Графики ( G – I ) отображают процент pSMAD1 / 5 / 9- и pSMAD2-положительных клеток после 0 ( n = 5) и 7 ( n = 4) дней культивирования во всем клапане ( G ), а также в SIT и оригинальном буклете (OL; H и I ; n = 4) через 7 дней культивирования.Данные в ( G ) представлены как средние значения ± SEM. Данные в ( H ) и ( I ) представлены как отдельные эксперименты. Для оценки значимых различий был проведен непарный t -тест для ( G ) и парный t -тест отношения для ( H ) и ( I ). Шкала 100 мкм ( A – F ) и 20 мкм ( A –F ′). *** P <0,001, **** P <0,0001.

    Рисунок 6

    Активация сигнальных путей BMP и TGFbeta во время ремоделирования митрального клапана ex vivo .Срезы мышиных MV культивировали в закрытом положении в течение 0 ( A, C, и E ) и 7 ( B, D, и F ) дней и дважды окрашивали на pSMAD1 / 5/9 ( A , B, E, и F ) и pSMAD2 ( C – F ). Графики ( G – I ) отображают процент pSMAD1 / 5 / 9- и pSMAD2-положительных клеток после 0 ( n = 5) и 7 ( n = 4) дней культивирования во всем клапане ( G ), а также в SIT и оригинальном буклете (OL; H и I ; n = 4) через 7 дней культивирования.Данные в ( G ) представлены как средние значения ± SEM. Данные в ( H ) и ( I ) представлены как отдельные эксперименты. Для оценки значимых различий был проведен непарный t -тест для ( G ) и парный t -тест отношения для ( H ) и ( I ). Шкала 100 мкм ( A – F ) и 20 мкм ( A –F ′). *** P <0,001, **** P <0,0001.

    3.6 Клеточные вклады и сигнальные пути у больных MV

    человека Окрашивание

    в MV больных людей для PECAM-1 показало наличие одиночных VEC ( фигура 7A ′; n = 12 из 21) и сосудовидных структур ( Figure 7A n = 5 out из 21) в SIT. Экспрессия αSMA была более обширной ( фиг. 7B и C ), а пролиферация была выше ( фиг. 7D и E ) в SIT по сравнению с исходным листком. Наблюдалась тенденция к относительному увеличению количества клеток, экспрессирующих маркер макрофагов CD206 ( фигура 7F и G ) и преобразователь сигнала pSMAD1 / 5/9 ( фигура 7H и I ), но не pSMAD2 ( фигура 7J и K ). в SIT по сравнению с исходной листовкой.Вместе эти данные показывают много сходства между SIT больного MV человека и сформированным SIT в модели ex vivo на мышах , предполагая общие механизмы.

    Рисунок 7

    Клеточный вклад и сигнальные пути в SIT больных MV человека. Заболевшие МВ человека окрашены на эндотелиальный маркер PECAM-1 ( A ), αSMA ( B ), маркер пролиферации PCNA ( D ), маркер макрофагов CD206 ( F ), датчик передачи сигналов BMP pSMAD1 / 5/9 ( H ) и сигнальный преобразователь TGFbeta pSMAD2 ( J ).Шкала 500 мкм ( A, B, D и F ), 100 мкм ( H и J ), 20 мкм ( A , A , D , F , и F ″). C, E, G, I, и K - это графики, отображающие αSMA-положительную область ( n = 7) и процент PCNA- ( n = 6), CD206- ( n = 5), pSMAD1 / 5 / 9- ( n = 6) и pSMAD2- ( n = 6) положительные клетки в SIT и исходной листовке (OL).Данные представлены как единичные эксперименты. Для оценки значимых различий был проведен парный тест t . * P <0,05.

    Рисунок 7

    Клеточный вклад и сигнальные пути в SIT больных MV человека. Заболевшие МВ человека окрашены на эндотелиальный маркер PECAM-1 ( A ), αSMA ( B ), маркер пролиферации PCNA ( D ), маркер макрофагов CD206 ( F ), датчик передачи сигналов BMP pSMAD1 / 5/9 ( H ) и сигнальный преобразователь TGFbeta pSMAD2 ( J ).Шкала 500 мкм ( A, B, D и F ), 100 мкм ( H и J ), 20 мкм ( A , A , D , F , и F ″). C, E, G, I, и K - это графики, отображающие αSMA-положительную область ( n = 7) и процент PCNA- ( n = 6), CD206- ( n = 5), pSMAD1 / 5 / 9- ( n = 6) и pSMAD2- ( n = 6) положительные клетки в SIT и исходной листовке (OL).Данные представлены как единичные эксперименты. Для оценки значимых различий был проведен парный тест t . * P <0,05.

    4. Обсуждение

    Основные результаты настоящего исследования следующие: (i) ремоделирование MV, включая утолщение исходной створки и образование SIT, могло быть индуцировано в ex vivo культивируемых сердцах мышей с такими же характеристиками, как и в образцах MVP человека; (ii) природа ремоделирования клапана варьировалась в зависимости от типа, величины и местоположения механического напряжения потока; (iii) SIT состоит из макрофагов и миофибробластов; (iv) миграция VIC через разрывы футеровки VEC способствует образованию SIT; и (v) образование SIT включает активацию сигнальных путей BMP и TGFbeta.

    4,1 МВ листочка утолщения

    Утолщение листочка при ПМК вызвано миксоматозной инфильтрацией слоя фиброзы и расширением губчатой ​​ткани, 3 , 4 , 25 и дополнительным волокнистым слоем поверх исходного листка, недавно определен как SIT. 5–8 В настоящем исследовании, включающем большой образец резецированных тканей человека, наблюдался широкий диапазон ремоделирования створок, с утолщением, вызванным только образованием SIT, первоначальным утолщением створок или комбинацией обоих.Исходные листочки также демонстрировали типичную миксоматозную дегенерацию, в то время как в SIT наблюдались различные уровни накопления волокон GAGS, коллагена и эластина. Интересно, что в этих образцах MVP человека не было обнаружено корреляции между толщиной SIT и исходной листовки, что предполагает, вероятно, различные регуляторные механизмы.

    Хотя несколько исследований предоставили важную информацию о потенциальном генетическом или молекулярном происхождении миксоматозной дегенерации при ПМК, 26–30 мало что известно о механизме образования SIT.В настоящем исследовании конкретная модель мыши ex vivo , сохраняющая всю конфигурацию сердца, MTCS, позволила определить причинную связь между измененной гемодинамикой и образованием SIT (без смешивающего фактора первичной тканевой патологии). MV культивировали в положении, которое представляет определенную фазу сердечного цикла, закрытом (систола), открытом (диастола) или выпавшем положении, и исследовали изменения исходной толщины створки и образование SIT в ответ на конкретное механическое напряжение.

    4.1.1 Оригинальное утолщение листовки

    Во всех трех экспериментальных установках МВ наблюдалось утолщение исходной створки. Полный набор изменяющихся механических сил, когда MV испытывает in vivo при непрерывном открытии и закрытии, вероятно, потребуется для сохранения его первоначальной толщины. Это утолщение не было достоверно коррелировано с механическим напряжением, которое испытывается в MV в закрытом положении (нет корреляции с SI). Для задней створки значимая граница ( P = 0.06) наблюдалась корреляция между исходной толщиной створки и напряжением сдвига в открытом положении MV, что позволяет предположить, что аномальный поток может вызвать первоначальное утолщение створки. Кроме того, настоящее исследование подтверждает, что ретроградного потока через МК с аномальным контактом кончика створок достаточно, чтобы вызвать утолщение, в частности, свободного края, что также обычно наблюдается у пациентов с ПМК. 8 , 31

    Интересно, что степень и время ремоделирования различались между передними и задними створками.В то время как в закрытом положении передняя створка утолщалась в основном в первую неделю культивирования, задняя створка утолщалась преимущественно на второй неделе культивирования. Кроме того, мы обнаружили корреляцию между величиной напряжения сдвига и исходной толщиной створки для задней створки, но не для передней створки. Ранее было показано, что передние и задние створки по-разному реагируют в зависимости от возраста, 6 механических свойств, 32 генетических мутаций у мышей, 33 и способности ремоделирования. 34 , 35

    4.1.2 Формирование SIT

    Во всех трех экспериментальных установках MV, SIT был важным фактором утолщения створок. В основном он присутствовал на предсердной стороне створок, аналогично тому, что наблюдалось в образцах человека, что указывает на то, что предсердная сторона более склонна к развитию SIT. Это, вероятно, связано с более высоким механическим напряжением из-за более высокого радиуса кривизны в закрытом положении, вызывающим растяжение предсердных венозных эритроцитов, прямое воздействие кровотока в открытом положении, вызывающее более высокое напряжение сдвига на стороне предсердий, а также потому, что побочная специфичность эндотелиальных фенотипов сердечных клапанов. 36 , 37 Образование SIT зависело от продолжительности и степени механического напряжения, которому клапан подвергался, а также от величины напряжения сдвига. Различные характеристики SIT наблюдались через неделю культивирования, при этом SIT, индуцированная напряжением сдвига, показывала неупорядоченный внешний вид, тогда как SIT, индуцированная растяжением, имела более компактный вид.

    Сравнивая характеристики SIT непосредственно между образцами людей и мышей, мы предположили, что вновь образованные SIT в основном содержат ГАГ и протеогликаны, чтобы обеспечить миграцию и размножение клеток, поскольку в нашей модели ex vivo (культивирование максимум 14 дней) SIT действительно не содержат коллагена или эластина, а в основном содержат ГАГ.Однако на активное производство указывает присутствие цитозольного коллагена в миофибробластах, находящихся в SIT. Состав сформированного ECM, вероятно, зависит от механических и молекулярных стимулов, которым подвергается каждая область створки, что приводит к различным составам ECM, как это видно на больных MV человека. Наблюдалось множество четко различимых слоев в SIT, что позволяет предположить, что образование SIT может повторяться на существующем SIT.

    Хотя происхождение SIT неясно, наш анализ с использованием PECAM-1 и окрашивания эластином предполагает, что SIT может быть сформирован миграцией VIC и резидентных макрофагов через прерванный слой VEC.Об этом миграционном поведении VIC свидетельствует их экспрессия αSMA и виментина и образование тканевых мостиков. Миофибробласты в основном присутствовали в SIT, а не в исходной брошюре. Примечательно, что ЭМП не способствовала образованию миофибробластов. Однако пролиферация вызвала экспансию VIC в SIT, позволяя клеткам покрывать поверхность предсердия створки. С другой стороны, экспрессия маркеров апоптоза была обнаружена в эндотелиальных клетках, что позволяет предположить, что гибель клеток способствует удалению эндотелиальных клеток.Интересно, что разрывы слоя VEC наблюдались на уровне точек контакта створок, что подтверждает гипотезу Roberts et al. 8 , который предположил образование SIT в результате аномального контакта с тканями. Однако разрывы в слое VEC также наблюдались на предсердной стороне створки, указывая на то, что еще одним важным триггером является непрерывное растяжение эндотелиального слоя на предсердной стороне. Аналогичным образом в образцах человека мы наблюдали макрофаги, миофибробласты и положительные по PECAM-1 клетки в SIT.Было показано, что сигнальные пути BMP и TGFbeta участвуют в заболевании MV. 21–24 Гетерогенные паттерны экспрессии его сигнальных преобразователей pSMAD1 / 5/9 и pSMAD2 в SIT человеческих и мышиных MV предполагают множественную роль этих путей в заболевании MV в целом и в формировании SIT в частности.

    4,2 Клинические последствия

    Текущее исследование предполагает, что образование SIT может быть вторичным по отношению к аномальным гемодинамическим состояниям.Поэтому мы предположили, что при ПМК первичное изменение ткани створки и фиброзного кольца будет приводить к аномальному движению и увеличению нагрузки на створки, что может вызвать образование SIT как компенсаторный процесс. Это ремоделирование MV, однако, может привести к дальнейшему изменению механических свойств створок, потенциально увеличивая их пролапсирующую конформацию и приводя к прогрессирующей MR. Ретроградный поток будет еще больше увеличивать механическое напряжение створки и, следовательно, образование SIT и первоначальное утолщение створки, замыкая порочный круг этого дегенеративного заболевания.

    Знание деталей этого, первого компенсирующего, а затем и пагубного процесса будет иметь решающее значение для профилактики и лечения ПМК, поскольку ранняя диагностика и лечение могут быть важны для обеспечения хорошего долгосрочного прогноза этого заболевания. Например, восстановление в максимально возможной степени естественной геометрии клапана в рамках восстановления митрального клапана, становится важным уменьшить нагрузку на створки и, следовательно, рецидив МР после операции. Образование SIT может быть более общим признаком заболевания клапана, поскольку фиброзное утолщение створок описано при заболевании аортального клапана. 38 Новое понимание молекулярного механизма образования SIT необходимо для того, чтобы установить новые цели для медикаментозного лечения пороков сердца.

    4.3 Ограничения

    Следует отметить следующие ограничения. Сердца мышей не бились в течение большей части культивирования, что указывает на то, что клапаны не двигались, как это делают in vivo . Однако это дает уникальную возможность исследовать влияние конкретной механической среды на клапан и отличить его от других.Кроме того, различие видов может помешать экстраполяции результатов на человеческие клапаны. Мышиные сердца меньше по размеру, а многослойная организация ECM локально трудно различить. Однако MV мышей и людей имеют много общего. Их анатомическое развитие и молекулярная регуляция схожи, и многие заболевания клапанов человека моделируются на различных генетических моделях мышей. 39 , 40 Как описано выше, мы также наблюдали многие сходные характеристики между SIT больного MV человека и индуцированным SIT в модели ex vivo на мышах .Кроме того, небольшой размер сердца мыши позволяет культивировать ex vivo целого сердца мыши, тем самым сохраняя нативное положение интактного MV в сердце, что важно для получения наиболее репрезентативных ответов MV на стимулы. Кроме того, в отличие от более крупных моделей животных, небольшой размер клапанов мыши позволяет проводить микроскопическое исследование всего клапана.

    Трансляционная перспектива

    Это исследование показывает, что образование фиброзного слоя поверх исходной створки (наложенная ткань; SIT) является общим признаком пролапса митрального клапана и может быть воспроизведено ex vivo при аномальных гемодинамических условиях.Это говорит о том, что повышенная нагрузка на створки митрального клапана из-за первичного заболевания створки и фиброзного кольца может привести к патологическому ремоделированию самих створок, в дальнейшем изменяя ее механические свойства и функцию. Мы даем первое представление о механизмах образования SIT, которые необходимы для определения новых целей для лечения клапанных пороков сердца.

    5. Выводы

    Это исследование продемонстрировало, что образование SIT, которое является основным детерминантом утолщения створок при MVP, связано с повышенными нагрузками на створки.Характеристики модели ex vivo в сочетании с образцами человека позволили постулировать первую гипотезу о механизме образования SIT, которая может быть целью для будущих терапевтических возможностей.

    Срок первичной проверки: 43 дня

    Благодарности

    Благодарим Кирстен Лоддер и Кариен Висмейер за квалифицированную техническую помощь.

    Конфликт интересов: Не объявлен.

    Финансирование

    Эта работа была поддержана грантами, полученными от GE Healthcare, Lantheus medical imaging, St Jude Medical, Medtronic, Boston Scientific, Biotronik и Edwards Lifesciences, а также грантом голландского фонда сердца AHA номер 2013T093, предоставленным консорциуму BAV.

    Список литературы

    1

    Freed

    LA

    ,

    Levy

    D

    ,

    Levine

    RA

    ,

    Larson

    MG

    ,

    Evans

    JC

    ,

    Fuller

    h

    h4 ,

    Бенджамин

    EJ.

    Распространенность и клинические исходы пролапса митрального клапана

    .

    N Engl J Med

    1999

    ;

    341

    :

    1

    -

    7

    .2

    Wilcken

    DE

    ,

    Hickey

    AJ.

    Пожизненный риск развития тяжелой клапанной регургитации, требующей хирургического вмешательства, для пациентов с пролапсом митрального клапана

    .

    Тираж

    1988

    ;

    78

    :

    10

    -

    14

    .3

    Fornes

    P

    ,

    Heudes

    D

    ,

    Fuzellier

    JF

    ,

    Tixier

    D

    Карпентье

    А.

    Корреляция между клиническими и гистологическими паттернами дегенеративной недостаточности митрального клапана: гистоморфометрическое исследование 130 иссеченных сегментов

    .

    Cardiovasc Pathol

    1999

    ;

    8

    :

    81

    -

    92

    .4

    Гупта

    V

    ,

    Barzilla

    JE

    ,

    Mendez

    JS

    ,

    Stephens

    ,

    9000 ELH4 9000 EL 9000 Collard

    CD

    ,

    Laucirica

    R

    ,

    Weigel

    PH

    ,

    Grande-Allen

    кДж.

    Обилие и расположение протеогликанов и гиалуронана в нормальных и миксоматозных митральных клапанах

    .

    Cardiovasc Pathol

    2009

    ;

    18

    :

    191

    -

    197

    ,5

    Olsen

    EG

    ,

    Al-Rufaie

    HK.

    Гибкий митральный клапан. Исследование патогенеза

    .

    Br Heart J

    1980

    ;

    44

    :

    674

    -

    683

    ,6

    Померанс

    A.

    Возрастные изменения сердечных клапанов человека

    .

    Br Heart J

    1967

    ;

    29

    :

    222

    -

    231

    ,7

    Трент

    JK

    ,

    Adelman

    AG

    ,

    Wigle

    ED

    ,

    Silver

    MD.

    Морфология выпадения задней створки митрального клапана

    .

    Am Heart J

    1970

    ;

    79

    :

    539

    -

    543

    .8

    Робертс

    WC

    ,

    Гласные

    TJ

    ,

    Ko

    JM

    ,

    Hebeler

    RF

    Jr.

    Макро и гистологические особенности иссеченных частей задней митральной створки у пациентов, перенесших оперативное восстановление пролапса митрального клапана, и комментарии к концепции отсутствующих (= разорванных) сухожильных хорд

    .

    J Am Coll Cardiol

    2014

    ;

    63

    :

    1667

    -

    1674

    .9

    Richards

    JM

    ,

    Farrar

    EJ

    ,

    Kornreich

    BG

    ,

    Mose

    NS

    ,

    Butcher

    JT.

    Механобиология функции митрального клапана, дегенерация и ремонт

    .

    J Vet Cardiol

    2012

    ;

    14

    :

    47

    -

    58

    .10

    Chaput

    M

    ,

    Handschumacher

    MD

    ,

    Guerrero

    JL

    ,

    Holmvang

    B4 G4 ,

    Sullivan

    S

    ,

    Vlahakes

    GJ

    ,

    Hung

    J

    ,

    Levine

    RA

    ; Leducq Foundation Трансатлантическая сеть MITRAL.

    Адаптация митральной створки к ремоделированию желудочков: предполагаемые изменения в модели ишемической митральной регургитации

    .

    Тираж

    2009

    ;

    120

    :

    S99

    -

    S103

    .11

    Connell

    PS

    ,

    Azimuddin

    AF

    ,

    Kim

    SE

    ,

    Ramirez

    F4 Little

    SH

    ,

    Grande-Allen

    кДж.

    Регургитационная гемодинамика сама по себе вызывает ремоделирование митрального клапана, характерное для клинических болезненных состояний in vitro

    .

    Ann Biomed Eng

    2016

    ;

    44

    :

    954

    -

    967

    .12

    Grande-Allen

    KJ

    ,

    Liao

    J.

    Гетерогенная биомеханика и механобиология митрального клапана: значение для тканевой инженерии

    .

    Curr Cardiol Rep

    2011

    ;

    13

    :

    113

    -

    120

    .13

    Kruithof

    BP

    ,

    Krawitz

    SA

    ,

    Gaussin

    V.

    Развитие атриовентрикулярного клапана на поздних эмбриональных и постнатальных стадиях включает конденсацию и ремоделирование внеклеточного матрикса

    .

    Dev Biol

    2007

    ;

    302

    :

    208

    -

    217

    ,14

    Kruithof

    BP

    ,

    Lieber

    SC

    ,

    Kruithof-de Julio

    M

    ,

    000

    000 Gouussin

    000 Gouussin

    000 .

    Культивирование сердечных клапанов мыши в миниатюрной системе культивирования тканей

    .

    J Vis Exp

    2015

    ;

    105

    :

    e52750.

    15

    Lieber

    SC

    ,

    Kruithof

    BP

    ,

    Aubry

    N

    ,

    Vatner

    SF

    ,

    Gaussin

    V.

    Разработка миниатюрной системы культивирования тканей для культивирования сердечных клапанов мыши

    .

    Энн Биомед Энг

    2010

    ;

    38

    :

    674

    -

    682

    .16

    Clausen

    BE

    ,

    Burkhardt

    C

    ,

    Reith

    W

    ,

    Renkawitz

    R

    ,

    Forster

    I.

    Условное нацеливание гена в макрофагах и гранулоцитах с использованием мышей LysMcre

    .

    Transgenic Res

    1999

    ;

    8

    :

    265

    -

    277

    ,17

    Ye

    M

    ,

    Iwasaki

    H

    ,

    Laiosa

    CV

    ,

    X Stadtfeld

    M Heck

    S

    ,

    Clausen

    B

    ,

    Akashi

    K

    ,

    Graf

    T.

    Гематопоэтические стволовые клетки, экспрессирующие ген миелоидного лизоцима, сохраняют долгосрочную способность к многократной репопуляции

    .

    Иммунитет

    2003

    ;

    19

    :

    689

    -

    699

    .18

    Monvoisin

    A

    ,

    Alva

    JA

    ,

    Hofmann

    JJ

    ,

    Zovein

    AC40009

    AC40009

    Ируэла-Ариспе

    мл.

    Трансгенная мышь VE-cadherin-CreERT2: модель индуцибельной рекомбинации в эндотелии

    .

    Dev Dyn

    2006

    ;

    235

    :

    3413

    -

    3422

    ,19

    Alkema

    M

    ,

    Goumans

    MJ

    ,

    Kruithof

    B.

    Иммунофлуоресцентная визуализация активации передачи сигналов BMP на залитых парафином срезах ткани

    .

    Методы Мол Биол

    2019

    ;

    1891

    :

    191

    -

    200

    .20

    Хулин

    A

    ,

    Анстин

    LJ

    ,

    Ким

    AJ

    ,

    Поттер

    SJ

    Lincoln

    J

    ,

    Yutzey

    KE.

    Макрофагальные переходы при развитии сердечного клапана и миксоматозной болезни клапана

    .

    Артериосклер Тромб Васк Биол

    2018

    ;

    38

    :

    636

    -

    644

    ,21

    Sainger

    R

    ,

    Grau

    JB

    ,

    Branchetti

    E

    ,

    See Poggio

    000

    P40009 Поле

    BC

    ,

    Acker

    MA

    ,

    Gorman

    RC

    ,

    Gorman

    JH

    3rd,

    Hargrove

    CW

    3rd,

    Bavaria

    J

    Миксоматозный пролапс митрального клапана человека: роль костного морфогенетического белка 4 в активации клапанных интерстициальных клеток

    .

    J Cell Physiol

    2012

    ;

    227

    :

    2595

    -

    2604

    .22

    Хулин

    A

    ,

    Дероан

    CF

    ,

    Ламберт

    CA

    ,

    Думонт

    000

    B4 Defraigne

    JO

    ,

    Nusgens

    BV

    ,

    Radermecker

    MA

    ,

    Colige

    AC.

    Металлотионеин-зависимая регуляция TGF-beta2 участвует в ремоделировании миксоматозного митрального клапана

    .

    Cardiovasc Res

    2012

    ;

    93

    :

    480

    -

    489

    ,23

    Ng

    CM

    ,

    Cheng

    A

    ,

    Myers

    LA

    ,

    Martinez-Murillo

    F

    F

    ,

    Bedja

    D

    ,

    Gabrielson

    KL

    ,

    Hausladen

    JM

    ,

    Mecham

    RP

    ,

    Judge

    DP

    ,

    HC

    .

    TGF-бета-зависимый патогенез пролапса митрального клапана на мышиной модели синдрома Марфана

    .

    J Clin Invest

    2004

    ;

    114

    :

    1586

    -

    1592

    .24

    Prakash

    S

    ,

    Borreguero

    LJJ

    ,

    Sylva

    M

    ,

    Флорес 9000 9000 Reiz 9000

    , Флорес 9000

    0009000

    Gunst

    QD

    ,

    de la Pompa

    JL

    ,

    Ruijter

    JM

    ,

    van den Hoff

    M.

    Делеция Fstl1 (фоллистатин-подобного 1) из эндокардиального / эндотелиального происхождения вызывает заболевание митрального клапана

    .

    Артериосклер Тромб Васк Биол

    2017

    ;

    37

    :

    e116

    -

    e130

    .25

    Agozzino

    L

    ,

    Falco

    A

    ,

    де Виво

    F

    ,

    де Винсентис

    000

    ca

    ,

    Esposito

    S

    ,

    Cotrufo

    M.

    Хирургическая патология митрального клапана: макро- и гистологическое исследование 1288 иссеченных хирургическим путем клапанов

    .

    Int J Cardiol

    1992

    ;

    37

    :

    79

    -

    89

    .26

    Disse

    S

    ,

    Abergel

    E

    ,

    Berrebi

    A

    ,

    Houot

    AM4 9000 9000

    u

    Diebold

    B

    ,

    Guize

    L

    ,

    Carpentier

    A

    ,

    Corvol

    P

    ,

    Jeunemaitre

    X.

    Картирование первого локуса аутосомно-доминантного миксоматозного пролапса митрального клапана на хромосому 16p11.2-p12.1

    .

    Am J Hum Genet

    1999

    ;

    65

    :

    1242

    -

    1251

    .27

    Nesta

    F

    ,

    Leyne

    M

    ,

    Yosefy

    C

    ,

    Simpson

    C

    000 D Marshall

    JE

    ,

    Hung

    J

    ,

    Slaugenhaupt

    SA

    ,

    Levine

    RA.

    Новый локус аутосомно-доминантного пролапса митрального клапана на хромосоме 13: клинические выводы из генетических исследований

    .

    Тираж

    2005

    ;

    112

    :

    2022

    -

    2030

    ,28

    Фрид

    LA

    ,

    Acierno

    JS

    Jr,

    Dai

    D

    ,

    Leyne

    M4000

    Nesta

    F

    ,

    Levine

    RA

    ,

    Slaugenhaupt

    SA.

    Локус аутосомно-доминантного пролапса митрального клапана на хромосоме 11p15.4

    .

    Am J Hum Genet

    2003

    ;

    72

    :

    1551

    -

    1559

    .29

    Oceandy

    D

    ,

    Yusoff

    R

    ,

    Baudoin

    FM

    ,

    Neyses

    L

    Полиморфизм промотора гена матриксной металлопротеиназы 3 связан с регургитацией и ремоделированием левого желудочка у пациентов с пролапсом митрального клапана

    .

    евро J Heart Fail

    2007

    ;

    9

    :

    1010

    -

    1017

    .30

    Dietz

    HC

    ,

    Резка

    GR

    ,

    Pyeritz

    RE

    , 9000Y4 Maslen

    CL

    ,

    Maslen

    CL

    , Corson

    GM

    ,

    Puffenberger

    EG

    ,

    Hamosh

    A

    ,

    Nanthakumar

    EJ

    ,

    Curristin

    SM

    ,

    Metten

    ,

    9000

    Megano

    CA.

    Синдром Марфана, вызванный повторяющейся de novo миссенс-мутацией в гене фибриллина

    .

    Nature

    1991

    ;

    352

    :

    337

    -

    339

    .31

    Barber

    JE

    ,

    Kasper

    FK

    ,

    Ratliff

    NB

    ,

    Cosgrove

    000 BP

    ,

    Cosgrove

    BP Веселы

    И.

    Механические свойства миксоматозных митральных клапанов

    .

    J Thorac Cardiovasc Surg

    2001

    ;

    122

    :

    955

    -

    962

    .32

    Pham

    T

    ,

    Sun

    W.

    Свойства материала створок митрального клапана человека в возрасте

    .

    J Biomed Mater Res A

    2014

    ;

    102

    :

    2692

    -

    2703

    .33

    Dina

    C

    ,

    Bouatia-Naji

    N

    ,

    Tucker

    N

    ,

    Delling

    9000 9000

    FN4 ,

    Durst

    R

    ,

    Perrocheau

    M

    ,

    Fernandez-Friera

    L

    ,

    Solis

    J

    ,

    Investigators

    P

    au

    Le Tourne MH

    ,

    Probst

    V

    ,

    Bosse

    Y

    ,

    Pibarot

    P

    ,

    Zelenika

    D

    ,

    Lathrop

    M

    ,

    000

    000 Herc4000

    ,

    Benjamin

    EJ

    ,

    Капот

    F

    ,

    Lo

    SH

    ,

    Долматова

    E

    ,

    Simonet

    9 0004 F

    ,

    Lecointe

    S

    ,

    Kyndt

    F

    ,

    Redon

    R

    ,

    Le Marec

    H

    ,

    Froguel

    P

    000

    000

    EE

    RS

    ,

    Бруневаль

    P

    ,

    Markwald

    RR

    ,

    Norris

    RA

    ,

    Milan

    DJ

    ,

    Slaugenhaupt

    SA

    0009000

    SA Levine,

    000 JJ

    ,

    Hagege

    AA

    ,

    Франция

    MVP

    ,

    Jeunemaitre

    X

    ; Трансатлантическая сеть Leducq MITRAL.

    Анализ генетических ассоциаций выявляет биологические пути, лежащие в основе пролапса митрального клапана

    .

    Нат Генет

    2015

    ;

    47

    :

    1206

    -

    1211

    .34

    Connell

    PS

    ,

    Vekilov

    DP

    ,

    Diaz

    CM

    ,

    Kim

    SE

    de,

    Kim

    SE

    ,

    Устранение регургитации снижает фиброзное ремоделирование функциональных клапанов, обусловленных митральной регургитацией

    .

    Ann Biomed Eng

    2018

    ;

    46

    :

    670

    -

    683

    ,35

    Timek

    TA

    ,

    Lai

    DT

    ,

    Dagum

    P

    ,

    Liang

    D

    , GT

    Ingels

    NB

    Jr,

    Miller

    DC.

    Ремоделирование митральной створки при дилатационной кардиомиопатии

    .

    Тираж

    2006

    ;

    114

    :

    I-518

    -

    I-523

    .36

    Simmons

    CA

    ,

    Grant

    GR

    ,

    Manduchi

    E

    ,

    Davies

    PF.

    Пространственная гетерогенность эндотелиальных фенотипов коррелирует со специфической уязвимостью к кальцификации нормальных аортальных клапанов свиньи

    .

    Circ Res

    2005

    ;

    96

    :

    792

    -

    799

    .37

    Фаррар

    EJ

    ,

    Huntley

    GD

    ,

    Butcher

    J.

    Окислительный стресс, вызванный эндотелием, вызывает активацию миофибробластов и кальцификацию аортального клапана

    .

    PLoS One

    2015

    ;

    10

    :

    e0123257.

    38

    Dweck

    MR

    ,

    Boon

    NA

    ,

    Newby

    DE.

    Кальцифицирующий стеноз аорты: заболевание клапана и миокарда

    .

    J Am Coll Cardiol

    2012

    ;

    60

    :

    1854

    -

    1863

    .39

    Hinton

    RB

    ,

    Yutzey

    KE.

    Строение и функция сердечного клапана в процессе развития и болезни

    .

    Annu Rev Physiol

    2011

    ;

    73

    :

    29

    -

    46

    .40

    Wessels

    A

    ,

    Sedmera

    D.

    Анатомия развития сердца: сказка о мышах и человеке

    .

    Physiol Genomics

    2003

    ;

    15

    :

    165

    -

    176

    .

    © Автор (ы) 2019. Опубликовано Oxford University Press от имени Европейского общества кардиологов.

    Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution (http://creativecommons.org /licenses/by-nc/4.0/), который разрешает некоммерческое повторное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы. По вопросам коммерческого повторного использования обращайтесь по адресу [email protected]ком .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *