Полиакриламид ак 631: Полиакриламид АК 631, марка А-155В

• 🇰🇿 КАЗАХСТАН (20)
• 🇫🇷 ФРАНЦИЯ (8)
• 🇺🇦 УКРАИНА (6)
• 🇩🇪 ГЕРМАНИЯ (6)
• 🇹🇯 ТАДЖИКИСТАН (2)
• 🇺🇿 УЗБЕКИСТАН (1)
• 🇪🇬 ЕГИПЕТ (1)
• 🇬🇪 ГРУЗИЯ (1)
• 🇿🇦 ЮЖНАЯ АФРИКА (1)
• 🇦🇪 ОБЪЕДИНЕННЫЕ АРАБСКИЕ ЭМИРАТЫ (1)
• 🇲🇳 МОНГОЛИЯ (1)
• 🇹🇲 ТУРКМЕНИЯ (1)
• 🇰🇬 КИРГИЗИЯ (1)
• 🇪🇪 ЭСТОНИЯ (1)
• 🇲🇩 МОЛДОВА, РЕСПУБЛИКА (1)

Выбрать полиакриламида: узнать наличие, цены и купить онлайн

Крупнейшие экспортеры из России, Казахстана, Узбекистана, Белоруссии, официальные контакты компаний. Через наш сайт, вы можете отправить запрос сразу всем представителям, если вы хотите купить полиакриламида.
🔥 Внимание: на сайте находятся все крупнейшие российские производители полиакриламида, в основном производства находятся в России. Из-за низкой себестоимости, цены ниже, чем на мировом рынке

Поставки полиакриламида оптом напрямую от завода изготовителя (Россия)

Крупнейшие заводы по производству полиакриламида

Заводы по изготовлению или производству полиакриламида находятся в центральной части России. Мы подготовили для вас список заводов из России, чтобы работать напрямую и легко можно было купить полиакриламид оптом

акриловые полимеры в первичных формах не в органическом растворителе

Изготовитель Поли[n-(-гидроксиимино-

Поставщики полиамиды в первичных формах

Крупнейшие производители Оборудование и устройства для фильтрования или очистки воды: прочее

Экспортеры приборы и аппаратура для физического или химического анализа электронные

Компании производители Оборудование для изготовления бумаги или картона прочее

Производство адгезивы на основе полимеров товарных позиций — или каучука

Изготовитель —

Поставщики вещества поверхностно-активные органические

Крупнейшие производители составы

Ферментация активного ила с отходами для биодеградации полиакриламида, улучшенная анаэробным гидролизом, и ключевые микроорганизмы, участвующие в биологическом удалении полиакриламида резервуар муниципальной станции очистки сточных вод в Шанхае, Китай. Основные характеристики концентрированного ила: рН 6,8±0,2, общее количество взвешенных веществ (ОВВ) 13890±690 мг/л, количество летучих взвешенных веществ (ОВВ) 9560±260 мг/л. , общее количество углеводов равно 1051 ± 51 мг ХПК/л, а общее количество белков равно 5715 ± 83 мг ХПК/л.Коммерчески производимый ПАМ (CAS № 9003-05-8; линейная формула (C

Оптимизированный биологический гидролиз ПАМ с помощью методологии поверхности отклика

В процессе анаэробной ферментации RSM использовали для оценки влияния некоторых независимых переменных, включая рН ( X ₁ ), количество ПАМ ( X ₂ ) и время ферментации ( X ₃ ).Для руководства экспериментами использовалась пятиуровневая центральная составная схема с тремя переменными (CCD); эта модель состояла из шести осевых точек, которые были закодированы как   ±   1,68, восьми факторных точек, которые были закодированы как   ±   1, и шести повторений центральных точек, которые были закодированы как   ±   0. Кодированные независимые переменные, используемые в дизайне RSM, показано в таблице 2. Данные были подвергнуты статистическому анализу с помощью анализа ANOVA с использованием программного обеспечения Design Expert (версия 8.05, Stat-Ease, Inc., США). P значения меньше 0.05 считались статистически значимыми ²⁸ . Для каждого испытания определенное количество ПАМ и 900 мл шлама смешивали в анаэробном реакторе с рабочим объемом 2,0 л. pH каждого реактора доводили до заданного значения добавлением 5 M Ca(OH) ₂ или 4 M HCl. Каждый реактор механически перемешивали при 120 об/мин и поддерживали при 35 ± 1 °С. После определенного периода ферментации смесь обрабатывали ультразвуком при 360 Вт/м ² в течение 1 мин с помощью ультразвукового генератора.Затем 50 мл смеси для предварительной ультразвуковой обработки извлекали из поршневого шейкера при 500 об/мин в течение 30 мин при 25 °C и центрифугировали при 6000 g в течение 15 мин при 4 °C. Затем супернатант готовили для дальнейшего тестирования. Экспериментальные данные были проанализированы с использованием множественных регрессий, чтобы соответствовать прогностической полиномиальной квадратичной модели для обоих ответов. При регрессии модели влияние взаимодействия параметров на биологический гидролиз ПАМ (т. е. гидролиз амида) описывалось с помощью поверхностных графиков, а оптимальные параметры выводились из подобранных уравнений полиномиальной регрессии.

Эксперимент синергетического действия основных органических соединений ила на биологический гидролиз ПАМ

На основании характеристик ила были проведены периодические эксперименты с использованием крахмала и бычьего сывороточного альбумина (БСА) в качестве модельного полисахарида и модельного белка , соответственно, для изучения их роли в биологическом гидролизе ПАМ. Пять анаэробных реакторов диаметром 100 мм и высотой 250 мм с синтетическими растворами содержали следующие органические соединения (мг ХПК/л): 200 ПАМ (Реактор-1), 200 ПАМ + 1051 Крахмал (Реактор-2), 200 ПАМ + 5715 БСА (Реактор-3), 200 ПАМ + 1051 Крахмал + 5715 БСА (Реактор-4) и 200 ПАМ + 1051 Крахмал + 5715 БСА и исходный рН 9.0 (Реактор-5). Эти количества органического вещества растворяли в 800 мл синтетических сточных вод в бутылках, содержащих 405 мг/л NaHCO ₃ , 155 мг/лк ₂ HPO ₄ ·3H ₂ /л CaCl9мг0 , 100 мг/л MgCl ₂ ·6H ₂ O, 25 мг/л FeCl ₂ , 10 мг/л NaCl, 5 мг/л CoCl _{2 0 02} · 906H 90 L mncl ₂ · 4H ₂ · 4H ₂ O, 2,5 мг / л ALCL ₃ , 15 мг / л (NH ₄ ) ₆ MO ₇ O ₂₄ , 5 мг / ЛH ₃ BO ₃ , 5 мг / л НИКЛ ₂ · 6H ₂ o, 5 мг / л CUCL ₂ · 5H ₂ O и 5 мг / л ZNCL ₂ ³⁰ .Затем 200 мл инокулята, собранные из указанных выше анаэробных реакторов (оптимизированный биологический гидролиз ПАМ с помощью методологии поверхности отклика), поровну делили в каждый анаэробный реактор и продували азотом в течение 10 минут для создания анаэробных условий. Затем все пять анаэробных реакторов помещали в шейкер с воздушной баней при 120 об/мин и температуре 35±1°С на 17 дней; это оптимальные параметры, описанные в разделе «Оптимизированный биологический гидролиз ПАМ с использованием методологии поверхности отклика». Затем анализировали количества PAM, белка и углеводов.

Сравнение различных рН ферментации, влияющих на распределение хлопьев по размерам до 11.0). Объем 7,2 л WAS был разделен поровну на девять 2,0-литровых анаэробных реакторов диаметром 100 мм и высотой 250 мм, а затем в каждый реактор было добавлено 200 мг ХПК/л ПАМ.Начальные значения pH восьми реакторов были доведены до 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0 и 11,0 добавлением 5 M Ca(OH)

Эксперименты с полунепрерывным потоком для определения основных ферментативных активностей

Девять полунепрерывных реакторов из плексигласа с рабочим объемом 2,0 л, внутренним диаметром 100 мм и высотой 250 мм использовались для исследования ферментативной активности. связанных с биологическим гидролизом PAM, производством VFA и разложением белков и углеводов. Затем 6,4 л WAS поровну делили на 8 реакторов полунепрерывного действия, а начальные значения pH в реакторах 1–8 доводили до 4.0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0 и 11,0 соответственно при добавлении 5 М Ca(OH) ₂ или 4 М HCl; реактор 9, который также содержал 800 мл сырого ила, использовался в качестве контроля без регулирования рН. В каждый из этих девяти реакторов добавляли 200 мг ХПК/л ПАМ, а температура ферментации и операции герметизации были такими же, как описано выше. Каждый день из каждого реактора вручную отбирали 47 мл ферментационной смеси и добавляли такое же количество осадка, предварительно обработанного или не обработанного, как описано выше; Таким образом, гидролитическое время удерживания (HRT) этих реакторов полунепрерывного действия составляло 17 дней.Примерно через три месяца работы биологический гидролиз ПАМ оставался стабильным; затем анализировали активность ферментов.

Экспериментальное определение ключевых микроорганизмов, участвующих в биологическом гидролизе ПАМ

Периодический эксперимент был проведен для определения ключевых микроорганизмов, участвующих в биологическом гидролизе ПАМ, с использованием анаэробного реактора с рабочим объемом 2,0 л, диаметром 100 мм и высотой 250 мм. Инокуляты объемом 40 мл, собранные из указанных выше анаэробных реакторов (см. раздел «Оптимизированный биологический гидролиз ПАМ с использованием методологии поверхности отклика»), добавляли в анаэробный реактор после того, как реактор продули азотом в течение 10 минут для создания анаэробных условий.Затем инокуляты культивировали в этом анаэробном реакторе с синтетическими сточными водами, содержащими ПАМ в количестве 200 мг ХПК/л в качестве основного источника углерода, в течение 30 дней. Синтетические сточные воды дополнялись буферными реагентами и неорганическими питательными веществами, как описано выше (см. раздел «Эксперимент синергетического действия основных органических соединений ила на биологический гидролиз ПАМ»). Реактор закрывали резиновой пробкой, механически перемешивали при 120 об/мин и поддерживали при 35 ±1 °С.Затем образцы собирали из анаэробного реактора после разного времени ферментации (например, 1, 4, 7, 14, 19 и 30 дней) для определения основных микроорганизмов, участвующих в биологическом гидролизе ПАМ.

Длительная эксплуатация реактора с учетом существующих микробных сообществ

Два полунепрерывных реактора с рабочим объемом 2,0 л использовались для исследования микробного сообщества. Два реактора, один из которых получил 800 мл шлама с 200 мг ХПК/л PAM при начальном pH 9.0; другой получил 800 мл ила с 200 мг ХПК/л PAM без корректировки pH. Каждый день из каждого реактора вручную удаляли 47  мл смеси шлама и в каждый реактор добавляли одинаковое количество ила. Производство летучих жирных кислот и метана в результате биологического гидролиза ПАМ измеряли в течение периода ферментации. Было обнаружено, что примерно через 3 месяца работы биологический гидролиз ПАМ остается стабильным; затем были проанализированы микробные сообщества, присутствующие в реакторах.

Аналитические методы

Анализировали амидазу, алкогольдегидрогеназу (АДГ) и кислотообразующие ферменты. Чтобы определить активность этих ферментов, 25 мл ферментационной смеси удаляли из различных реакторов анаэробной ферментации, а затем промывали и ресуспендировали в 10 мл 100 мМ буферного раствора фосфата натрия. Суспензию обрабатывали ультразвуком при 20 кГц и 4°С в течение 30 мин для разрушения клеток Bacterial , а затем центрифугировали при 10000 об/мин и 4°С в течение 30 мин для удаления остатков отходов.Экстракты хранили на льду до того, как их использовали в анализе ферментативной активности. Аналитические процедуры, используемые для амидазы и АДГ, проводились на основе методов, описанных Kay-Shoemake et al. ³¹ и Кечагиас и др. ³² соответственно, с использованием ПАМ в качестве подложки. Анализы на фосфотрансацетилазы (ФТА) и фосфотрансбутирилазы (РТВ) были основаны на методе, описанном Andersch et al. ³³ с использованием ацетил-КоА и бутирил-КоА в качестве субстратов соответственно.Активность ацетаткиназы (АК) и бутираткиназы (ВК) анализировали с использованием метода Allen et al. ³⁴ с ацетатом калия и бутиратом натрия в качестве субстратов соответственно. Активность оксалоацетаттранскарбоксилазы (OAATC) определяли на основе методов Wood et al. ³⁵ с использованием метилмалонил-КоА в качестве субстрата. Активность КоА-трансферазы (КоА-Т) определяли по методу Шульмана и Вуда ³⁶ с использованием сукцинил-КоА в качестве субстрата.За единицу активности фермента принимают количество фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата в минуту. Удельную активность фермента определяли как единицу активности фермента на миллиграмм летучих взвешенных веществ (ВВВ).

Для проведения пиросеквенирования использовались Bacterial праймеры 341 F и 1073 R ³⁷ . Реакции ПЦР проводили в общем объеме 20 мкл, содержащем ДНК-матрицу (0,5 мкл), полимеразу Taq (2 ЕД), dNTPs (0,5 мкл).25 мМ), реакционный буфер Taq (1   × Ex, TaKaRa), MgCl ₂ (1,5 мМ) и праймер (5 мкМ). Программа амплификации состояла из начальной стадии денатурации при 94°С в течение 5 мин, 30 циклов денатурации при 94°С в течение 30 с, отжига при 55°С в течение 30 с и удлинения при 72°С в течение 60 с, после чего 5-минутное окончательное удлинение при 72 °C. Необработанные последовательности из процесса пиросеквенирования были отсортированы на основе конкретных штрих-кодов образцов шлама с использованием инструмента Pipeline Initial Process проекта Ribosomal Database Project (RDP).Адаптеры, штрих-коды и праймеры во всех необработанных последовательностях были обрезаны ³⁸ , а последовательности, содержащие неоднозначные нуклеотиды или последовательности короче 350 пар оснований, были удалены ³⁹ . Остальные последовательности были проверены на наличие потенциальных химер с помощью Chimera Slayer, сгруппированы в OTU с использованием порогов идентичности 97% и сопоставлены с базой данных SILVA 108.

Все остальные анализы (т.е. TSS, VSS, SCOD, TCOD, углеводы, белок, ЛЖК и метан) проводились таким же образом, как описано ранее ¹³ .Общее количество амида-N (т.е. анаэробный гидролиз ПАМ) измеряли с использованием метода колориметрии с йодидом крахмала и кадмия ^40,41 . Измерение анаэробного гидролиза ПАМ проводили следующим образом: амидные группы ПАМ сначала N-бромировали бромом с образованием N-бромамида, а избыток брома удаляли из реакции с использованием формиата натрия. Затем N-бромамид окислял йодид до йода, который, наконец, был обнаружен спектрофотометрически в виде комплекса крахмал-трийодид.Анализ распределения хлопьев по размерам проводили на приборе Malvern Mastersizer 3000 (Вустершир, Великобритания) с диапазоном обнаружения 0,01–3500 мкм. Каждый образец измеряли три раза со стандартным отклонением от 0,1 до 4,5%. Анализ библиотеки клонов генов 16 S рРНК на основе ПЦР и метода флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) подробно описан в дополнительной информации.

Статистический анализ

Все тесты были выполнены в трех повторностях, и значимость результатов была проверена с помощью анализа ANOVA. P  < 0,05 считалось статистически значимым.

%PDF-1.7 % 342 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 342 138 0000000016 00000 н 0000003984 00000 н 0000004212 00000 н 0000004254 00000 н 0000004290 00000 н 0000005148 00000 н 0000005263 00000 н 0000005378 00000 н 0000005493 00000 н 0000005608 00000 н 0000005723 00000 н 0000005836 00000 н 0000005950 00000 н 0000006065 00000 н 0000006180 00000 н 0000006295 00000 н 0000006410 00000 н 0000006524 00000 н 0000006639 00000 н 0000006754 00000 н 0000006868 00000 н 0000006982 00000 н 0000007095 00000 н 0000007209 00000 н 0000007324 00000 н 0000007438 00000 н 0000007552 00000 н 0000007667 00000 н 0000007781 00000 н 0000007896 00000 н 0000008010 00000 н 0000008115 00000 н 0000008223 00000 н 0000008331 00000 н 0000008439 00000 н 0000008544 00000 н 0000008652 00000 н 0000008760 00000 н 0000008840 00000 н 0000008920 00000 н 0000009000 00000 н 0000009079 00000 н 0000009158 00000 н 0000009236 00000 н 0000009315 00000 н 0000009395 00000 н 0000009473 00000 н 0000009553 00000 н 0000009632 00000 н 0000009711 00000 н 0000009789 00000 н 0000009866 00000 н 0000009946 00000 н 0000010026 00000 н 0000010106 00000 н 0000010187 00000 н 0000010267 00000 н 0000010348 00000 н 0000010428 00000 н 0000010508 00000 н 0000011251 00000 н 0000011409 00000 н 0000011845 00000 н 0000012238 00000 н 0000012768 00000 н 0000012846 00000 н 0000013831 00000 н 0000014053 00000 н 0000014215 00000 н 0000014393 00000 н 0000014631 00000 н 0000015955 00000 н 0000016250 00000 н 0000016428 00000 н 0000016574 00000 н 0000016960 00000 н 0000017264 00000 н 0000017333 00000 н 0000017985 00000 н 0000018188 00000 н 0000019588 00000 н 0000020908 00000 н 0000021069 00000 н 0000021257 00000 н 0000022622 00000 н 0000024032 00000 н 0000024384 00000 н 0000025287 00000 н 0000026448 00000 н 0000029973 00000 н 0000035222 00000 н 0000035833 00000 н 0000036213 00000 н 0000042693 00000 н 0000048095 00000 н 0000097356 00000 н 0000118127 00000 н 0000119854 00000 н 0000120106 00000 н 0000120388 00000 н 0000120584 00000 н 0000121946 00000 н 0000122160 00000 н 0000122591 00000 н 0000122779 00000 н 0000123076 00000 н 0000123267 00000 н 0000123323 00000 н 0000123867 00000 н 0000123997 00000 н 0000139313 00000 н 0000139352 00000 н 0000139417 00000 н 0000139536 00000 н 0000139616 00000 н 0000139693 00000 н 0000139779 00000 н 0000139865 00000 н 0000139951 00000 н 0000140009 00000 н 0000140287 00000 н 0000140396 00000 н 0000140497 00000 н 0000140649 00000 н 0000140775 00000 н 0000140895 00000 н 0000141013 00000 н 0000141125 00000 н 0000141300 00000 н 0000141413 00000 н 0000141550 00000 н 0000141728 00000 н 0000141868 00000 н 0000142006 00000 н 0000142164 00000 н 0000142320 00000 н 0000003811 00000 н 0000003120 00000 н трейлер ]>> startxref 0 %%EOF 479 0 объект >поток xڌRKkQ$S#Z1uPcQ5iJC̣ΘL2C-4dUScMD+mn| tJq»nંD͘.hRb

e{kSmg]aa-G w

Df:DEMibæ(y2EZpYVe\+F,4NI{,gx+JX$`9o+厑N\R~,#p`\1 8M9qc79`, ’69gg?~\ &}״` h2`»Oct}B:|;5;&:]N-

Клетки Pseudomonas aeruginosa, адаптированные к хлориду бензалкония, проявляют устойчивость к другим мембраноактивным агентам, но не к клинически значимым антибиотикам | Журнал антимикробной химиотерапии

Аннотация

Наша цель состояла в том, чтобы определить, могут ли штаммы Pseudomonas aeruginosa адаптироваться к росту при увеличении концентрации дезинфицирующего средства хлорида бензалкония (BKC) и возникает ли корезистентность к клинически значимым противомикробным агентам.Были предприняты попытки определить, какие фенотипические изменения сопровождают резистентность и объясняют ли они механизм резистентности. Штаммы серийно пассировали в возрастающих концентрациях ВКС в культурах со статическим питательным бульоном. Для определения чистоты культур использовали серотипирование и генотипирование. Два штамма исследовали на перекрестную устойчивость к другим дезинфицирующим средствам и антибиотикам путем определения МИК в бульонных разведениях. Изменения белков наружной мембраны и липополисахарида (LPS) были исследованы с помощью SDS-PAGE.Определяли гидрофобность и заряд клеточной поверхности, поглощение дезинфицирующего средства и пропорцию содержания специфических жирных кислот наружной и цитоплазматической мембран. Два штамма P. aeruginosa показали стабильное повышение устойчивости к ВКС. У обоих штаммов наблюдалась корезистентность к другим соединениям четвертичного аммония; у одного наблюдалась устойчивость к хлорамфениколу и полимиксину В, а у другого наблюдалось снижение устойчивости к тобрамицину. Однако повышенной устойчивости к другим биоцидам (хлоргексидин, триклозан, тимол) или антибиотикам (цефтазидим, имипенем, ципрофлоксацин, тобрамицин) не выявлено.Характеристики, сопровождающие резистентность, включали изменения в белках внешней мембраны, поглощение BKC, заряд клеточной поверхности и гидрофобность, а также содержание жирных кислот в цитоплазматической мембране, хотя не было обнаружено никаких доказательств изменений в LPS. Каждый из двух штаммов имел разные изменения фенотипа, что указывает на то, что такая адаптация уникальна для каждого штамма P. aeruginosa и не является результатом единого механизма, общего для всего вида.

Введение

Pseudomonas aeruginosa является важным внутрибольничным патогеном из-за его повсеместного присутствия везде, где есть вода, разрушительного воздействия инфекции на пациентов, обычно в результате чрезмерного иммунного ответа, и высокой устойчивости организма как к защите хозяина, так и к антибактериальным агентам. В основном.Устойчивость к защитным реакциям хозяина играет ключевую роль в заражении легких муковисцидозом, когда организм выживает в результате массивного иммунного ответа, вызванного хозяином, тогда как легочная ткань чувствует себя намного хуже, что в конечном итоге приводит к полной дыхательной недостаточности и смерти. ¹

P. aeruginosa уже давно считается устойчивым к антибиотикам микроорганизмом, поскольку его наружная мембрана с низкой проницаемостью препятствует доступу многих возбудителей к местам их действия. ² В последнее время наличие конститутивных и усиливаемых механизмов оттока, удаляющих из клетки широкий спектр антимикробных агентов, считается столь же важным фактором резистентности, особенно в сочетании с ферментативными механизмами резистентности. ^{3– 5} Устойчивость к дезинфицирующим средствам также является давно зарегистрированным аспектом этого организма, поскольку он был выделен в исходных растворах наиболее часто используемых биоцидных агентов. ⁶ Адаптация видов Pseudomonas к дезинфицирующим средствам путем серийного пассирования при возрастающих концентрациях биоцида также хорошо задокументирована, ^{7, 8} , хотя у грамотрицательных бактерий четкой связи с резистентностью к антибиотикам пока не наблюдалось. . ⁹

Это исследование было направлено на получение стабильной устойчивости к дезинфицирующему средству хлориду бензалкония (BKC) путем серийного пассирования и определение того, была ли получена корезистентность к клинически значимым антибиотикам. Кроме того, были изучены связанные изменения в клеточной мембране и характеристиках поверхности, чтобы определить возможные механизмы резистентности.

Материалы и методы

Используемые химикаты

Все химические вещества, использованные в экспериментах, были самого высокого качества и были приобретены у Sigma-Aldrich.Антимикробные препараты готовили и хранили в соответствии со стандартными протоколами. ¹⁰

Бактерии

Была использована группа из 16 штаммов P. aeruginosa . Четырнадцать были получены путем рутинного скрининга больничной среды (коды штаммов CL7, CL8, CL9, CL10, CL11, CL12, CL13, CL14, CL16, 17TS, OO14, OO72, 9766 и 9481), тогда как два были лабораторными штаммами, PAO1 (ATCC 15692). ) и ATCC 15442.

Создание сопротивления

Клетки инкубировали в статическом режиме в питательном бульоне, содержащем ВКС при половине наименьшей МИК, определенной для каждого штамма, при концентрации пассажа, равной 0.00078% (мас./об.) ВКС. Бактерии серийно пассировали путем переноса c . 1 × 10 ⁵ клеток из 16-часовой культуры в свежую среду, содержащую ту же концентрацию BKC, и инкубировали при 37°C в течение еще 16 часов. Это повторяли в общей сложности в течение 5 дней и повторно определяли МИК штаммов для ВКС. Все штаммы, показавшие увеличение MIC, затем инокулировали в среду, содержащую в два раза больше исходной концентрации BKC, и образец клеточной культуры, замороженный при -70°C в питательном бульоне, содержащем 10% (вес/объем) глицерина, и обозначали пассажем 1. (П1).Эта процедура продолжалась до тех пор, пока клетки не достигли MIC 0,05% (масса/объем), что является самой высокой концентрацией BKC, которая остается в растворе в питательном бульоне. Два штамма (OO14 и PAO1) дополнительно пассировали в BKC до 0,025% (масса/объем) BKC, эта концентрация была названа пассажем 6 (P6). При пассировании штаммов OO14 и PAO1 были получены замороженные образцы адаптированных клеток из неадаптированных клеток дикого типа (WT) на P1 [0,00078% (вес/объем) BKC], P2 [0,0015% (вес/объем) BKC], P3 [ 0,003% (масса/объем) BKC], P4 [0,006% (масса/объем) BKC], P5 [0,0125% (масса/объем) BKC] и P6 (0,0.025%) уровней прохождения.

Определение чистоты культуры

На каждом этапе пассажа клетки штаммов OO14 и PAO1 высевали на питательный агар и определяли их серотип Habs. Кроме того, проводили гель-электрофорез в пульсирующем поле хромосомной ДНК клеток из каждого пассажа после расщепления рестрикционным ферментом Dra I (Boehringer Mannheim). Условия подготовки и расщепления образцов и последующего электрофореза соответствовали условиям Livesley et al ., ¹¹ и использовали аппарат CHEF DRIII (Bio-Rad, Hemel Hempstead, UK).

МИК

МИК BKC и каждого из других противомикробных агентов определяли методом разбавления бульона с использованием инокулята 1 × 10 ⁵ клеток. В случаях, когда применяемое дезинфицирующее средство давало мутный осадок при более высоких концентрациях, минимальную бактерицидную концентрацию определяли путем высева 100 мкл клеток из пробирок с таким осадком на питательный агар и инкубации в течение 24 ч при 37°С.Это было выполнено для штаммов OO14 и PAO1.

Кроме того, клетки штаммов OO14 и PAO1, проявляющие наибольшую устойчивость к BKC, пассировали через питательный бульон, не содержащий дезинфицирующего средства, в течение того же периода времени, что и при формировании такой устойчивости, и определяли МИК для каждого штамма после каждого пассажа.

Визуализация белков и липополисахаридов (ЛПС) наружной мембраны

Белки наружной мембраны из каждого пассажа штаммов PAO1 и OO14 выделяли предпочтительной солюбилизацией с N -лауроилсаркозином и визуализировали окрашиванием Кумасси после анализа в SDS-PAGE.Затем полосы анализировали с помощью программного обеспечения для анализа геля Phoretix 1D Advanced (версия 4.01; Non-linear Dynamics, Ньюкасл-апон-Тайн, Великобритания). Образцы наружной мембраны, обработанные протеиназой К, обрабатывали 12% (вес/объем) акриламидными гелями, содержащими мочевину при конечной концентрации 4 М, и визуализировали с использованием метода Tsai & Frasch. ¹² Идентификация белков наружной мембраны проводилась путем сравнения молекулярных масс с массами, определенными Hancock et al . ¹³

Количественное определение ЛПС

Количественное определение ЛПС проводилось с помощью колориметрического анализа, определяющего присутствие 2-кето-3-дезоксиоктоната (КДО) в образцах наружных мембран, полученных из саркозина. ¹⁴

Выделение и анализ жирных кислот

Недетергентное разделение наружной и цитоплазматической мембран было достигнуто путем пропускания через камеру французского давления и последующего центрифугирования при охлаждении в ступенчатом градиенте сахарозы. Затем образцы превращали в производные метиловых эфиров и исследовали с помощью газовой хроматографии для определения присутствующих жирных кислот. ¹⁵

Липиды цельных клеток

Липиды цельных клеток, экстрагированные по методу Bligh & Dyer ¹⁶ , были разделены с помощью тонкослойной хроматографии и визуализированы с помощью реагента молибденового синего. ¹⁷ Относительные пропорции каждого липида определяли с использованием программного обеспечения Phoretix.

Поглощение/связывание BKC

Адаптированные клетки из штаммов OO14 и PAO1 обрабатывали 0,003% (масса/объем) BKC в течение 10 минут при 25°C, а затем удаляли центрифугированием в течение 10 минут при 10 000 g , оставляя несвязанные BKC в супернатанте. Используя колориметрический анализ, разработанный Scott, ¹⁸ , можно было определить, сколько BKC осталось в супернатанте, и, таким образом, рассчитать, сколько было связано с клетками или поглощено ими.

Гидрофобность

Гидрофобность клеточной поверхности адаптированных клеток OO14 и PAO1 определяли с помощью анализа микробной адгезии к углеводороду (MATH) с использованием n -гексадекана в качестве углеводородной фазы. ¹⁹

Заряд поверхности клетки

Определение заряда клеточной поверхности проводили микроэлектрофорезом частиц с использованием анализатора электрофореза частиц Zetamaster (Malvern Instruments). Клетки стационарной фазы суспендировали в 10 мМ KCl в концентрации 2 × 10 ⁷ клеток/мл.

Анализ проницаемости с использованием N-фенилнафталина (NPN)

Гидрофобный зонд NPN обычно имеет ограниченный доступ к внешней мембране P. aeruginosa , доступ, который усиливается действием мембраноактивного агента BKC и пермеабилизатора внешней мембраны ЭДТА. NPN сильно флуоресцирует в гидрофобной среде, например, внутри внешней мембраны. Приблизительно 5 × 10 ⁷ адаптированных клеток штаммов OO14 и PAO1 предварительно обрабатывали в течение 30 минут либо ЭДТА (400 мг/л), либо ВКС (0,000 мг/л).003%, мас./об.). Затем к клеткам добавляли NPN в конечной концентрации 10 мкМ. Поглощение NPN такими обработанными клетками определяли путем измерения флуоресценции, испускаемой при 420 нм, после возбуждения при 350 нм с использованием спектрофотометра Perkin Elmer.

Препарат плазмиды

Получение плазмиды и количественный анализ из клеток WT и пассажа 5 клеток OO14 осуществляли с использованием набора для очистки ДНК Wizard Maxipreps и стандартных молекулярных методов. ²⁰

Результаты

Генерация резистентности и чистоты культуры

Повышение устойчивости к ВКС наблюдалось почти у всех исследованных штаммов, часто до концентрации, превышающей 0.05% (вес/объем) (таблица 1). Устойчивость к BKC в OO14 и PAO1 сохранялась при выращивании в концентрациях до 0,025% (масса/объем) и сохранялась в течение 5 недель пассирования в среде без дезинфицирующих средств (данные не представлены). Свойства этих двух штаммов были исследованы дополнительно. Их серотипы оставались неизменными на протяжении всего процесса адаптации и при пассировании на бездезинфицирующих средах. Точно так же профиль импульсного поля для обоих штаммов оставался неизменным на протяжении всего эксперимента.

Сорезистентность к другим противомикробным препаратам

Клетки как штамма РАО1, так и штамма ОО14 тестировали на каждой стадии адаптации к ВКС на корезистентность к другим антибактериальным средствам (табл. 2).В PAO1 повышение резистентности наблюдалось к мембраноактивным дезинфицирующим средствам цетилпиридиния хлориду и цетримиду, антибиотику хлорамфениколу и мембраноактивному антибиотику полимиксину В. Не наблюдалось существенных изменений для фенольных дезинфицирующих средств триклозана и тимола, мембраноактивных дезинфицирующих средств додецила. бромид триметиламмония и хлоргексидин или антибиотики имипенем, ципрофлоксацин и тобрамицин. Наблюдалось снижение резистентности к цефтазидиму.

Штамм OO14 показал повышение устойчивости к мембраноактивным дезинфицирующим средствам цетримиду и хлориду цетилпиридиния при серийном пассировании.Не наблюдалось изменения устойчивости к дезинфицирующим средствам тимолу, додецилтриметиламмонийбромиду, триклозану, хлоргексидину или антибиотикам полимиксину В, цефтазидиму, ципрофлоксацину, хлорамфениколу или имипенему. Резистентность к тобрамицину снижалась ступенчато по мере того, как клетки становились более устойчивыми к ВКС.

Белковые изменения наружной мембраны

Исследовали белки внешней мембраны адаптированных клеток PAO1 и OO14 (рис. 1 и 2 соответственно).Доля белковой полосы c . 25 кДа увеличилось с неопределяемого в WT (неадаптированных) клетках до 14% белка наружной мембраны в наиболее устойчивых клетках PAO1. OO14 показал увеличение доли белка наружной мембраны 44 кДа с 4% в клетках дикого типа до 14% в наиболее устойчивых клетках. Однако OO14 не показал изменений доли белка массой 25 кДа.

Содержимое ЛПС

По-видимому, было обнаружено небольшое изменение в характере полос ЛПС из адаптированных клеток штамма OO14 при SDS-PAGE.Было невозможно визуализировать LPS, выделенный из внешней мембраны PAO1, путем окрашивания серебром из-за отсутствия чувствительных к перйодату сахаров, как сообщалось ранее. ²¹ Определение количества LPS, присутствующего в клетках PAO1 и OO14, осуществлялось путем измерения количества присутствующего KDO. В обоих случаях наблюдалась малозаметная тенденция, за исключением снижения концентрации KDO в наиболее устойчивых клетках, выращенных в среде без дезинфектантов (рис. 3).

Содержание жирных кислот в наружных и цитоплазматических мембранах

Анализ жирных кислот во внешней мембране PAO1 не показал явного увеличения или уменьшения содержания любой из присутствующих жирных кислот.Жирные кислоты цитоплазматической мембраны PAO1 показали ступенчатое увеличение в пропорциях 14:0 и 16:0 и уменьшение доли неизвестной жирной кислоты, элюирующей между 2-OH 10:0 и 12:0 (табл. 3). ). Дальнейшее исследование неизвестной жирной кислоты с помощью масс-спектрометрии с электронным ударом показало, что она представлена ​​двумя пиками с массовым соотношением зарядов 205 и 220. .

Липиды цельных клеток

Не наблюдалось изменений пропорций липидов целых клеток клеток PAO1, адаптированных к BKC (10 % дифосфатидилглицерина, 50 % фосфатидилэтаноламина, 20 % фосфатидилглицерина, 10 % фосфатидилхолина и 10 % лизофосфатидилэтаноламина). Однако по мере того, как клетки OO14 становились более устойчивыми к ВКС во время пассирования, доля фосфатидилхолина снижалась с 20% до 6%.

Поглощение/связывание BKC клетками P. aeruginosa

PAO1 не показали тенденции к связыванию BKC, поскольку они стали более устойчивыми к дезинфицирующим средствам, тогда как клетки штамма OO14 показали снижение BKC, удаленного клетками из среды, по мере увеличения их устойчивости к BKC (рис. 4), хотя P3 показал то же самое. значение как ячейки WT.

Гидрофобность и заряд клеточной поверхности

PAO1, адаптированные к BKC, не показали тенденции к изменению гидрофобности клеточной поверхности, измеренной с помощью анализа MATH. Однако по мере повышения устойчивости к BKC в клетках штамма OO14 они демонстрировали постепенное увеличение гидрофобности, отражаемое более высоким процентом клеток, переходящих в гидрофобную фазу анализа MATH (фиг. 5).

Клетки из штамма OO14 не показали заметной тенденции в изменении электрофоретического заряда клеточной поверхности, хотя клетки из штамма PAO1 показали небольшое увеличение негативности по мере того, как они становились более устойчивыми к BKC (рис. 6).

Стойкость наружной мембраны к проницаемости за счет БКС и ЭДТА

По мере того, как клетки штамма PAO1 становились более устойчивыми к BKC, они демонстрировали снижение количества NPN, включенного в наружную мембрану, при обработке либо ЭДТА, либо BKC. Это снижение отражалось в наблюдаемом уменьшении флуоресценции (рис. 7). Клетки штамма OO14 показали незначительное изменение восприимчивости клеток к пермеабилизирующему действию ЭДТА или ВКС, даже если было показано, что клетки более устойчивы к биоцидному действию дезинфицирующего средства.

Препарат плазмиды

Плазмидная ДНК штамма OO14 c . Размер 9300 п.н. был уменьшен в количестве в три раза между WT и большинством BKC-адаптированных клеток.

Обсуждение и выводы

Диапазон сопротивления

Способность P. aeruginosa выживать при возрастающих концентрациях катионных биоцидов, таких как хлоргексидин или BKC, хорошо известна. Возвращаясь к 1971 году с работой Adair et al . ²² , показывающий, что BKC-резистентные клетки обладают перекрестной устойчивостью к другим соединениям четвертичного аммония (ЧАС), имеется достаточно доказательств того, что адаптивная устойчивость, стабильная или нет, может привести к снижению восприимчивости к другим дезинфицирующим средствам.

Однако диапазон корезистентности кажется специфичным как для адаптированного штамма, так и для биоцида, использованного при адаптации. Штамм РАО1 показал устойчивость ко всем испытанным ЧАС, что указывает на изменение общего места действия.Однако он не показал устойчивости к хлоргексидину, что необычно, учитывая работу Russell et al . ²³ показали, что адаптированные к хлоргексидину клетки Pseudomonas stutzeri проявляют перекрестную устойчивость к ЧАС. Клетки OO14 показали гораздо более ограниченный диапазон перекрестной устойчивости только к цетримиду и хлориду цетилпиридина. Учитывая, что обработка каждого штамма клеток была, насколько это возможно, идентичной, может показаться, что каждый штамм обладает потенциалом развития уникального спектра резистентности при воздействии одинаковых факторов внешней среды.Единственная перекрестная устойчивость с антибиотиками наблюдалась у PAO1 против полимиксина B и хлорамфеникола. Мембраноактивная природа этого антибиотика подтверждает предположение о том, что изменения, вызванные резистентностью к BKC, приведут к резистентности к мембраноактивным антибиотикам, как показано Russell et al . ²³ в обработанных хлоргексидином клетках P. stutzeri . Однако эти сопротивления не разделялись OO14 и более поздней работой Adair et al . ²⁴ показали, что BKC-резистентные клетки были более восприимчивы к полимиксину B, чем неадаптированные клетки.Действительно, тот факт, что многие штаммы не могут продуцировать стабильную устойчивость к BKC, показанную здесь, указывает на то, что часто «уникальный» механизм устойчивости к биоциду слишком повреждает другие аспекты бактериального метаболизма, чтобы клетки могли выживать очень долго. Это отражено в наблюдениях из этой работы, что по мере того, как штаммы OO14 и PAO1 адаптировались к BKC, их стало гораздо труднее восстановить из замороженной культуры, что указывает на снижение устойчивости к холоду.

Механизмы сопротивления

Подобно различиям в спектрах устойчивости, изменения фенотипа, связанные с устойчивостью, по-видимому, специфичны для исследуемого штамма.PAO1 показал увеличение доли белка наружной мембраны 25 кДа. Белок такого размера, OprG, связан с изменениями LPS в P. aeruginosa и активируется в условиях низкого Mg ²⁺ . ¹³ Однако экспрессия OprG не связана с устойчивостью к каким-либо антибактериальным агентам. Однако это указывает на то, что условия с низким содержанием Mg ²⁺ также связаны с устойчивостью к мембраноактивному антибиотику полимиксину B, часто сопровождающемуся повышенной экспрессией белка наружной мембраны OprH с молекулярной массой 20 кДа. ²⁵ Однако такого увеличения экспрессии не наблюдалось ни в одном из исследованных штаммов, что указывает на то, что, хотя корезистентность к полимиксину В наблюдалась в адаптированных клетках PAO1, она не была связана с изменением экспрессии белков наружной мембраны, а была более вероятной. в результате других изменений в структуре мембраны, которые будут обсуждаться в ближайшее время. В клетках штамма ОО14 наблюдалось увеличение экспрессии белка наружной мембраны размером 44 кДа. Предполагаемый порин OprE имеет такой размер, но маловероятно, что он будет связан с резистентностью, поскольку такая резистентность логически будет означать снижение экспрессии белка, как сообщалось для OprD, и резистентность к имипенему, ¹³ карбапенему, который использует OprD порин для входа в клетку.

Исследование наружной и цитоплазматической мембран показало изменения в соотношении присутствующих жирных кислот и фосфолипидов. Увеличение 16:0, наблюдаемое в цитоплазматической мембране клеток PAO1, является необычным, поскольку в большинстве предыдущих работ сообщается об уменьшении мембраны 16:0, ^{7, 28} , но не проводится различие между внешней и цитоплазматической мембранами. Одно из возможных объяснений можно увидеть в ранней работе Anderes et al. ., ²⁷ , которые определили, что резистентность к BKC сопровождается увеличением пропорции 16:0 и 18:1 в обоих из того, что было названо фосфолипидом. и фракции свободных жирных кислот.Однако, если клетки собирали из среды, богатой ВКС, эти изменения обращались вспять. Джонс и др. . ⁷ собирали свои клетки из таких сред, что может объяснить явно противоречивый характер их результатов по сравнению с результатами этой работы. Уменьшение доли неизвестной жирной кислоты со временем удерживания чуть больше 16:0 не имеет объяснения, хотя устойчивость штаммов Pseudomonas putida к растворителям, таким как толуол, была связана с изомеризацией транс . цис -олеиновая кислота, C16:1, C-9. ^{28, 29} Если бы рассматриваемая неизвестная жирная кислота была ненасыщенной по своей природе, то уменьшение ее доли привело бы к жесткости рассматриваемой мембраны. Такая ригидность была предложена как механизм устойчивости к мембрано-активным агентам и может объяснить увеличение восприимчивости к холоду, наблюдаемое по мере того, как клетки становились устойчивыми к ВКС.

Определенно, соотношение 16:0 во внешней и цитоплазматической мембранах играет роль во многих аспектах P.aeruginosa адаптация к окружающей среде. В P. aeruginosa , обнаруженном в легком с муковисцидозом, было отмечено, что существует степень замещения 16:0 на липиде А части ЛПС, выделенного из таких клеток. ³⁰ Эта замена, по-видимому, также придает повышенную устойчивость к полимиксину В и антибактериальным пептидам, и ее можно воспроизвести путем выращивания клеток в среде с низким содержанием Mg ²⁺ . Возможно, замена 16:0 и подобных жирных кислот в фосфолипидных мембранах играет более широкую роль в ответ на ряд воздействий окружающей среды, и биоциды являются лишь одним из них.

При изучении менее специфичных изменений пропорций липидов цельных клеток было отмечено снижение содержания фосфатидилхолина по мере того, как клетки штамма OO14 становились более устойчивыми к ВКС. Не проводилось исследований изменений фосфолипидов P. aeruginosa в ответ на адаптацию BKC, но исследования липидов, связанных с устойчивостью к полимиксину B, не упоминают о снижении уровня фосфатидилхолина. Вместо этого исследователи наблюдали снижение фосфатидилэтаноламина и фосфатидилглицерина и увеличение дифосфатидилглицерина. ^{31– 33} Возможно, это указывает на то, что, поскольку это изменение наблюдается только в клетках штамма OO14, клетках без повышенной устойчивости к полимиксину B, возможно, фосфатидилхолин важен только при устойчивости к BKC и другим ЧАС.

Известно, что гидрофобность и заряд клеточной поверхности подвержены изменениям окружающей среды, и это следует учитывать, прежде чем придавать слишком большое значение наблюдаемым изменениям или тенденциям. Однако в работе Джонса и др. ., ⁷ клеток, адаптированных к ЧАС, показали увеличение гидрофобности клеточной поверхности при исследовании с помощью анализа MATH, что подтверждает результаты, наблюдаемые для клеток штамма OO14, адаптированных к ВКС в этой работе.

Объяснение может включать увеличение гидрофобности в результате уменьшения количества отрицательно заряженных (гидрофильных) участков связывания для положительной головной группы дезинфицирующего средства. Это также может объяснить результаты, наблюдаемые для связывания и/или поглощения BKC клетками OO14.По мере того, как клетки OO14 становятся более адаптированными к BKC, они «теряют» или маскируют свои сайты связывания с дезинфицирующим средством. Эти сайты связывания заряжены отрицательно и, таким образом, уменьшают гидрофобность клетки, так что по мере их потери или маскировки гидрофобность клетки увеличивается.

Заряд клеточной поверхности в клетках PAO1 очень незначительно увеличивался (в отрицательных значениях), поскольку они становились более устойчивыми к BKC. Такое небольшое снижение, вероятно, является результатом изменения некоторой структуры внешней мембраны, связанной с резистентностью, а не фактической причиной такого снижения чувствительности.

Действие ЭДТА на проницаемость наружных мембран клеточных стенок P. aeruginosa хорошо известно, ³⁴ и резистентность обычно является результатом повышенной экспрессии белка наружной мембраны OprH и связана с устойчивостью как к полимиксину В, так и к аминогликозидам. . ²⁵ Клетки PAO1 оказались более устойчивыми к действию как BKC, так и EDTA, поскольку они адаптировались к дезинфицирующему средству, тогда как клетки OO14 не показали такой устойчивости. Ни один из штаммов не показал каких-либо изменений в экспрессии OprH.В то время как действие BKC на клеточные мембраны полностью не изучено, считается, что ЭДТА действует путем хелатирования ионов Mg ²⁺ между соседними молекулами ЛПС во внешней мембране, сопротивление возникает из-за замены таких ионов нехелатируемыми Белок OprH. Однако единственными изменениями, связанными с ЛПС в клетках PAO1, которые не происходили в клетках OO14, было увеличение экспрессии белка внешней мембраны 25 кДа того же размера, что и OprG, белка, связанного с изменениями в ЛПС, но не связанного с какой-либо предшествующей резистентностью. фенотип.

В клетках OO14 наблюдалось заметное снижение устойчивости к тобрамицину (в шесть раз) по мере адаптации клеток к ВКС. Это казалось необычным, так как считается, что аминогликозиды обладают свойствами проницаемости мембран, которые способствуют их собственному поглощению клеткой. ³⁵ Однако присутствие плазмидной ДНК, количество которой уменьшилось по мере того, как клетки снижали свою устойчивость к тобрамицину, указывает на наличие резистентной плазмиды, содержащей фермент, модифицирующий аминогликозиды. ³⁶

В заключение следует отметить, что резистентность к BKC легко приобретается при пассаже P. в субмикроскопических концентрациях.aeruginosa , сохраняются даже в отсутствие дезинфицирующего средства, и имеется перекрестная устойчивость с мембраноактивным антибиотиком полимиксином В. Однако эта перекрестная устойчивость возникает не у всех штаммов, адаптированных таким образом, и устойчивость к другим антибиотикам отсутствует. наблюдаемый. Любая перекрестная резистентность к другим антимикробным агентам, по-видимому, является результатом общего снижения проницаемости наружной и, возможно, цитоплазматической мембран; однако такие изменения мало защищают от антибиотиков, не обладающих мембраноактивным действием, и вряд ли станут серьезным препятствием для терапии пациентов, если микроорганизмы с такими изменениями приобретаются внутрибольнично.

МИК для штаммов P. aeruginosa , пассированных в возрастающих концентрациях ВКС

МИК для штаммов P. aeruginosa , пассированные в возрастающих концентрациях BKC

Значения МИК антибактериальных средств (показаны единицы) для клеток P.aeruginosa , штаммы OO14 и PAO1, адаптированные к BKC

Средние значения микрофона Антибактериальные агенты (приведенные единицы) для клеток P. aeruginosa штаммы OO14 и PAO1 . Пассаж и МИК для клеток PAO1 (результаты показывают среднее из трех повторов) . Антимикробный . ВТ . П1 . П2 . П3 . П4 . П5 . П6 . BKC (% мас./об.)  0,003  0.006 0,006 0,0125 0,025 0,05 0,05 тимол (% вес / об) 0,0125 0,0125 0,0125 0,0125 0,0125 0,0125 0,0125 CPC (% W / V) 0.003 0.003 0.006 0.0125 0,0125 0,0125 0,0125 0,0125 0,0125 DBC (% W / V) 0.025 0,025 0,025 0,05 0,05 0,05 0,05 Хлоргексидин (мг / л) 10 5 2,5 10 10 10 10 Triclosan (% W / V) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Cetrimide (% W / V) 0.0035 0,00925 0,0125 0,0125 0,0125 0,0125 0,0125 полимиксин В (мг / л) 0,45 1,25 1,35 1,785 1,25 3,6 5 Tobramycin (MG / L) 1.35 1.25 1.25 0,716 1.25 1.25 1.25 1,25 1.25 Цефтазидим (мг / л) 1,25 1,25 1,25 1,25 0,6 0,6 0,3 Ципрофлоксацин (мг / л) 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 1,6 1.25 хлорамфеникол (мг / л) 12,5 18.75 18.75 18.75 18.75 18.75 25 25 25 25 1.5 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25 1.25

Доля жирных кислот в цитоплазматической мембране клеток штамма PAO1 P. aeruginosa , адаптированных к ВКС

Доля жирные кислоты в цитоплазматической мембране клеток P. aeruginosa штамма PAO1, адаптированных к BKC

Рисунок 1.

Белки наружной мембраны штамма P. aeruginosa PAO1, пассированного в возрастающих концентрациях BKC. *, положение белка 25 кДа.Лестница содержит апротинин (6,5 кДа), лизоцим (16,5 кДа), β-лактоглобулин А (25 кДа), триозофосфатизомеразу (32,5 кДа), альдолазу (47,5 кДа), глутаминдегидрогеназу (62 кДа), ОБМ-парамиозин (83 кДа). и MBP-β-галактозидаза (175 кДа). WT, дикий тип, непассированные клетки PAO1; P1, клетки адаптированы к 0,00078% (мас./об.) BKC; P2, клетки, адаптированные к 0,0015% (мас./об.) BKC; P3, клетки, адаптированные к 0,003% (мас./об.) BKC; P4, клетки, адаптированные к 0,006% (мас./об.) BKC; P5, клетки, адаптированные к 0,0125% (мас./об.) BKC; P6, клетки адаптированы к 0,025% (масса/объем) BKC.

Рис. 1.

Белки наружной мембраны штамма P. aeruginosa PAO1, пассированного в возрастающих концентрациях BKC. *, положение белка 25 кДа. Лестница содержит апротинин (6,5 кДа), лизоцим (16,5 кДа), β-лактоглобулин А (25 кДа), триозофосфатизомеразу (32,5 кДа), альдолазу (47,5 кДа), глутаминдегидрогеназу (62 кДа), ОБМ-парамиозин (83 кДа). и MBP-β-галактозидаза (175 кДа). WT, дикий тип, непассированные клетки PAO1; P1, клетки адаптированы к 0,00078% (мас./об.) BKC; P2, клетки адаптированы к 0.0,15% (мас./об.) ВКС; P3, клетки, адаптированные к 0,003% (мас./об.) BKC; P4, клетки, адаптированные к 0,006% (мас./об.) BKC; P5, клетки, адаптированные к 0,0125% (мас./об.) BKC; P6, клетки адаптированы к 0,025% (масса/объем) BKC.

Рисунок 2.

Белки наружной мембраны штамма OO14 P. aeruginosa , пассированного в возрастающих концентрациях BKC. P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры. Дорожки между лестницей и WT содержат образцы, приготовленные при более низких температурах денатурации. Подробнее об аббревиатурах (лестница, WT, P1 и т.) см. легенду к рисунку 1.

Рисунок 2.

Белки наружной мембраны штамма OO14 P. aeruginosa , пассированного в возрастающих концентрациях ВКС. P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры. Дорожки между лестницей и WT содержат образцы, приготовленные при более низких температурах денатурации. Подробнее о аббревиатурах (лестница, WT, P1 и т. д.) см. легенду к рисунку 1.

Рисунок 3.

Количество (мкг) KDO, присутствующее в 2 мг (сухой вес) образцов материала внешней мембраны, выделенных из P.aeruginosa штаммов PAO1 (□) и OO14 (▪) клеток, адаптированных к BKC (столбцы ошибок показывают стандартную ошибку). P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры.

Рисунок 3.

Количество (мкг) KDO, присутствующее в 2 мг (сухой вес) образцов материала внешней мембраны, выделенных из P. aeruginosa штаммов PAO1 (□) и OO14 (▪) клеток, адаптированных к BKC ( полосы ошибок показывают sem). P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры.

Рис. 4.

Доля (%) BKC, удаленных из среды с помощью PAO1 (□) и OO14 (▪) Клетки штамма P. aeruginosa , адаптированные к BKC (столбцы погрешностей показывают sem). P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры.

Рисунок 4.

Доля (%) BKC, удаленных из среды с помощью PAO1 (□) и OO14 (▪) клеток штамма P. aeruginosa , адаптированных к BKC (столбцы погрешностей показывают с.с.м.). P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры.

Рис. 5.

Доля (%) клеток P. aeruginosa штамма PAO1 (□) и OO14 (▪), адаптированных к BKC, которые перешли из водной в гидрофобную фазу (столбцы ошибок показывают стандартную ошибку). P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры.

Рисунок 5.

Доля (%) клеток P. aeruginosa штамма PAO1 (□) и OO14 (▪), адаптированных к BKC, которые перешли из водной в гидрофобную фазу (столбцы ошибок показывают с.о.м.). P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры.

Рисунок 6.

Дзета-потенциал (мВ) клеток P. aeruginosa штамма PAO1 (□) и OO14 (▪), адаптированных к BKC (столбики ошибок показывают стандартную ошибку). P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры.

Рисунок 6.

Дзета-потенциал (мВ) клеток штамма P. aeruginosa PAO1 (□) и OO14 (▪), адаптированных к BKC (столбики ошибок показывают стандартную ошибку). P4 OO14 невозможно было извлечь из замороженной культуры.

Рис. 7.

Кратность увеличения поглощения NPN в клетках P. aeruginosa штамма PAO1, адаптированных к BKC, в ​​результате пермеабилизирующего действия 400 мкг/мл ЭДТА (□) и 0,003% (w/v) BKC (▪ ), определяемый по увеличению флуоресценции (столбцы погрешностей показывают sem).

Рис. 7.

Кратность увеличения поглощения NPN клетками P. aeruginosa штамма PAO1, адаптированными к BKC, в ​​результате пермеабилизирующего действия 400 мкг/мл ЭДТА (□) и 0,003% (w /v) BKC (▪) определяется по увеличению флуоресценции (столбики ошибок показывают s.Эм.).

Эта работа была поддержана грантом BBSRC и премией CASE совместно с Unilever plc.

Ссылки

Гован, Дж. Р. В. и Деретик, В. (

1996

Microbiological Reviews

60

539

Никайдо, Х. (

1994

Science

264

382

Ливермор, Д. М. (

1992

Антимикробные агенты и химиотерапия

36

2046

Ли, X.-Z., Ма, Д., Ливермур, Д. М. и Никайдо, Х. (

1994

Противомикробные препараты и химиотерапия

38

1742

Li, X., Nikaido, H. & Poole, K. (

1995

Антимикробные препараты и химиотерапия

39

1948

Olson, R. K., Voorhees, R. E., Eitzen, H. E., Rolka, H. & Sewell, C. M. (

1999) Группа постинъекционных абсцессов, связанных с инъекциями кортикостероидов и применением хлорида бензалкония.

Western Journal of Medicine

170

143

Джонс, М. В., Херд, Т. М. и Кристи, Х. Дж. (

1989

Microbios

58

49

Tattawasart, U., Maillard, J.Y., Furr, J.R. & Russell, A.D. (

1999

Journal of Hospital Infection

42

219

Russell, A.D. & Day, M.J. (

1996

Microbios

85

45

Рабочая группа Британского общества антимикробной химиотерапии. (

1991

Journal of Antimicrobial Chemotherapy

27

22

Livesley, M.A., Baxter, I.A., Lambert, P.A., Govan, J.R.W., Weller, P.H., Lacey, D.E. et al . (

1998

Journal of Medical Microbiology

47

999

Tsai, C.-M. & Frasch, CE (

1982

Аналитическая биохимия

119

114

Hancock, R.E.W., Siehnel, R. & Martin, N. (

1990

Молекулярная микробиология

4

1069

Карханис, Ю. Д., Зелтнер, Дж. Ю., Джексон, Дж. Дж. и Карло, Ф. Дж. (

1977

Аналитическая биохимия

85

595

Холлис, Д. Г., Мосс, К. В., Данешвар, М. И. и Уоллес Шьюмейкер, П. Л. (

1996

Journal of Clinical Microbiology

34

2322

Bligh, E. G. & Dyer, W. J. (

1959

Канадский журнал биохимической физиологии

37

911

Диттмер, Дж. К. и Лестер, Р. Л. (

1964

Journal of Lipid Research

5

126

Скотт, Г. В. (

1968

Аналитическая химия

40

768

Розенберг, М. и Дойл, Р. Дж. (1990). Гидрофобность поверхности микробных клеток: история, измерение и значение.В Microbial Cell Surface Hydrophobicity (Doyle, RJ & Rosenburg, M., Eds), стр. 1–37. Американское общество микробиологии, Вашингтон, округ Колумбия.

Самбрук, Дж., Фрич, Э.Ф. и Маниатис, Т. (1989). Молекулярное клонирование: лабораторное руководство , 2-е изд. Лабораторное издательство Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк.

Кропински А. М., Джуэлл Б., Кусио Дж., Милаццо Ф. и Берри Д. (

1985

Антибиотики и химиотерапия

36

58

Adair, F.W., Geftic, S.G. & Gelzer, J. (

1969

Прикладная микробиология

18

299

Рассел, А. Д., Таттавасар, У., Майлард, Дж. Ю. и Ферр, Дж. Р. (

1998

Антимикробные агенты и химиотерапия

42

2151

Adair, F.W., Geftic, S.G. & Gelzer, J. (

1971

Прикладная микробиология

21

1058

Белл, А., Бейнс, М. и Хэнкок, Р. Э. В. (

1991

Journal of Bacteriology

173

6657

Мешин, Л., Дюбуа-Бриссонне, Ф., Хейд, Б. и Лево, Дж. Ю. (

1999

Journal of Applied Microbiology

86

859

Андерес, Э. А., Сандин, У. Э. и Элликер, П.Р. (

1971

Canadian Journal of Microbiology

17

1357

Weber, F. J., Isken, S. & Debont, J. A. M. (

1994

Микробиология Великобритания

140

2013

Юнкер, Ф. и Рамос, Дж. Л. (

1999

Journal of Bacteriology

181

5693

Ernst, R.K., Yi, E.C., Guo, L., Lim, K.B., Burns, J.L., Hackett, M. et al . (

1999

Science

286

1561

Conrad, R.S. & Gilleland, H.E. (

1981

Journal of Bacteriology

148

489

Gilleland, H. E. & Conrad, R. S. (

1982

Противомикробные препараты и химиотерапия

22

1012

Champlin, F. R., Gilleland, H. E. & Conrad, R. S. (

1983

Противомикробные препараты и химиотерапия

24

5

Ваара, М. (

1992

Microbiological Reviews

56

395

Лох, Б., Грант, К. и Хэнкок, Р. Э. В. (

1984

Противомикробные препараты и химиотерапия

26

546

Райт, Г. Д. (

1999

Текущие мнения в области микробиологии

2

499

© 2002 Британское общество антимикробной химиотерапии

%PDF-1.3 % 174 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 174 70 0000000016 00000 н 0000001751 00000 н 0000001851 00000 н 0000002234 00000 н 0000002533 00000 н 0000002894 00000 н 0000002917 00000 н 0000003186 00000 н 0000004290 00000 н 0000005491 00000 н 0000005514 00000 н 0000006648 00000 н 0000006671 00000 н 0000007886 00000 н 0000007909 00000 н 0000009079 00000 н 0000009102 00000 н 0000010249 00000 н 0000010272 00000 н 0000011511 00000 н 0000011534 00000 н 0000012681 00000 н 0000012704 00000 н 0000013860 00000 н 0000013881 00000 н 0000014171 00000 н 0000014193 00000 н 0000015224 00000 н 0000015247 00000 н 0000017629 00000 н 0000017652 00000 н 0000019501 00000 н 0000019524 00000 н 0000022541 00000 н 0000022564 00000 н 0000024810 00000 н 0000024833 00000 н 0000029653 00000 н 0000029676 00000 н 0000032034 00000 н 0000032057 00000 н 0000035419 00000 н 0000035442 00000 н 0000040101 00000 н 0000040124 00000 н 0000043534 00000 н 0000043557 00000 н 0000047223 00000 н 0000047246 00000 н 0000051765 00000 н 0000051788 00000 н 0000056757 00000 н 0000056780 00000 н 0000061083 00000 н 0000061106 00000 н 0000066618 00000 н 0000066641 00000 н 0000070765 00000 н 0000070788 00000 н 0000075799 00000 н 0000075822 00000 н 0000080321 00000 н 0000080344 00000 н 0000081620 00000 н 0000081642 00000 н 0000082484 00000 н 0000082505 00000 н 0000082773 00000 н 0000001915 00000 н 0000002212 00000 н трейлер ] >> startxref 0 %%EOF 175 0 объект > эндообъект 176 0 объект > эндообъект 242 0 объект > поток Hb«g«f`e`: ̀

(PDF) Синтез и характеристика полиакриламидного гидрогеля для контролируемого высвобождения аспирина

Синтез и характеристика полиакриламидного гидрогеля

для контролируемого высвобождения аспирина

Basam W.Mahde *, Nadher D. Radia, Layth S. Jasim, Hayder O. Jamel

Фармацевтический колледж/Университет Аль-Кадисия/ Ирак

Краткое содержание: Гидрогель представляет собой гидрофильный полимер, обладающий способностью поглощать, но не растворять в, вода при физиологических условиях (pH, температура

и ионная сила). Эта пористость гидрогеля позволяет лекарственным средствам загружаться в гелевую матрицу, а затем высвобождаться со скоростью, зависящей от коэффициента диффузии

гелевой сетки.Поэтому данное исследование было проведено для изучения систем адсорбции-десорбции лекарственного средства (аспирина) на выбранных

поверхностях (полиакриламидный гидрогель) в переменных условиях рН и температуры. Методы: Эксперименты по адсорбции проводились с использованием УФ-видимого спектрометра

. Гидрогели полиакриламида (ПААм) получали свободнорадикальной полимеризацией. Химические структуры полимерных гидрогелей

анализировали с помощью ИК-Фурье-спектрометра.Результаты: При изучении явления адсорбции при трех различных температурах (15, 25 и 37oC) было обнаружено, что степень адсорбции аспирина на гидрогеле увеличивалась

при понижении температуры (экзотермическая реакция). Количества препарата, адсорбированного на поверхности гидрогеля при различных значениях pH, находились в следующем порядке: 7,2 < 4,0 < 1,2. Таким образом, гидрогель можно использовать для адсорбции аспирина из раствора, а модель изотермы Фрейндлиха может адекватно описывать адсорбцию

Ключевые слова: аспирин, адсорбция, гидрогель, десорбция, полимер.

1. ВВЕДЕНИЕ

Гидрогель представляет собой гидрофильный полимер, обладающий способностью

поглощать воду, но не растворяясь в ней при физиологических условиях (pH,

температура и ионная сила), из-за присутствия трех- размерная сетевая структура [1]. Поперечные связи сети

могут быть представлены ковалентными связями, электростатическими

гидрофобными или диполь-дипольными взаимодействиями, в то время как гидрофильность

объясняется наличием гидрофильных групп, таких как

гидроксильные, карбоксильные или амидные группы. вдоль полимерной цепи[2].Таким образом,

полимерный гидрогель имеет две основные особенности: не может растворять

из-за ковалентной поперечной связи и может быть получено

поглощение воды, намного превышающее те, которые достижимы с гидрофильными линейными полимерами

[3]. Пористость гидрогеля позволяет лекарственным средствам загружаться в

гелевой матрицы, а затем высвобождаться со скоростью, зависящей от коэффициента диффузии

гелевой сетки [4]. Изготавливается депо-препарат

, из которого лекарства элюируются медленно с поддержанием высокой локальной концентрации лекарства в окружающих тканях в течение

длительного периода [5].В целом, гидрогелевый препарат

состоит из трех неотъемлемых частей: мономера, инициатора и сшивающего агента. Для регулирования теплоты полимеризации

и конечных свойств гидрогеля

можно использовать разбавители, такие как вода или другие водные растворы

[6]. Полиакриламид (ПААм) представляет собой нейтральный гидрогель, который

подходит для систем доставки лекарств, поскольку он биосовместим,

химически инертен и нетоксичен. Образование гелей ПАК

зависит от нескольких факторов, включая концентрацию акриламида

, весовое соотношение акриламида и N, N’-метиленбисакриламида

(MBA) и наличие добавок или растворителей

другое чем вода, используемая для приготовления геля.Поэтому важно понимать физические свойства гелей и влияние добавок, таких как лекарство, на свойства гелей [7]. Аспирин

— это противовоспалительный и жаропонижающий препарат, используемый

для лечения слабой и умеренной боли. Он действует как ингибитор циклооксигеназы

, что приводит к ингибированию биосинтеза простагландинов. Аспирин

применяют также для профилактики артериальных и венозных тромбозов путем ингибирования

агрегации тромбоцитов [8].

Поэтому целью настоящего исследования было изучение систем адсорбции-десорбции

лекарственного средства (аспирина) на выбранных поверхностях

(полиакриламидного гидрогеля) при различных условиях рН и

температуры.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

Мономер, акриламид (AAm), инициатор (персульфат калия,

APS) и сшивающий агент (N,N’-метиленбисакриламид,

MBA) были приобретены у компании Merck Reagent Co., натрия

гидроксид и соляная кислота были приобретены у BDH

реагент Co., аспирин в качестве модельного препарата был приобретен у Sigma-

Aldrich Chemical Co.

2.2. Приготовление гидрогелей

Водный раствор акриламида (1 г/мл) нагревали до 45°C в атмосфере азота

в трехгорлой круглодонной колбе, снабженной

обратным холодильником и мешалкой. Затем к водному раствору добавляли 1,25 мл

1% МБА, 1 мл АПС

(5 г/100 мл воды) в качестве инициатора и, наконец, 1.25 мл 1%

водного раствора TEMED. Реакцию останавливали через 2 ч и

приготовленный гидрогель выливали в чашку Петри и сушили в сушильном шкафу

при 50°С в течение 24 ч, затем замачивали в дистиллированной воде в течение суток

для удаления возможных остаточных мономеров. и сушили в вакууме при

80 ◦C в течение 5 часов. для образования сшитых полиакриламидных гидрогелей.

2.3. Получение калибровочной кривой

Длину волны максимального поглощения (λ макс) регистрировали для

модельного препарата аспирина, растворенного в водной среде, и нашли 275 нм

(Фигура 1).Эта длина волны использовалась для построения стандартной кривой аспирина

в диапазоне от 10 до 250 ppm, который попадает в область

применимости закона Бера-Ламберта (рис. 2).

2.4. Определение изотермы адсорбции

0,05 г приготовленного гидрогеля смешивали с 10 мл растворов

с концентрацией ЛВ от 10 до 250 ppm. Смеси

встряхивали в течение 45 минут и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут.

Затем определяли концентрацию ЛС в суспензиях

спектрофотометрически.Количество адсорбированного лекарства

рассчитывали по следующей формуле:

Где x: адсорбированное количество (мг), m: масса адсорбента (г), Co:

начальная концентрация (мг/л), Ce: концентрация при равновесие

(мг/л) и V: объем раствора (л).

2.5. Факторы, влияющие на адсорбцию

Были изучены два фактора и определено их влияние на процесс адсорбции

; температура и рН. Эксперименты по адсорбции

проводили при 15, 25 и 37oC для оценки основных

термодинамических функций, а также проводили в зависимости

от pH (1.2, 4.0, 7.1) с использованием фиксированной концентрации препарата.

2.6. Эксперименты по десорбции

Различные концентрации каждого адсорбата добавляли к 0,05 г

поверхности и помещали в водяную баню при 37oC. После уравновешивания

суспензии центрифугировали и

Basam W. Mahde et al /J. фарм. науч. & рез. Том. 10(11), 2018, 2850-2854

Связь акриламида с неалкогольной жировой болезнью печени у взрослых американцев: общенациональное перекрестное исследование | Экологическое здоровье

Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное взаимосвязи между аддуктами акриламидного гемоглобина и НАЖБП в репрезентативной выборке взрослых американцев.Общая распространенность НАЖБП составила 30,8%, что согласуется с распространенностью НАЖБП среди взрослого населения США [1]. В этом исследовании мы обнаружили отрицательную корреляцию уровней HbAA в сыворотке крови с НАЖБП, а также с метаболическими нарушениями. Мы также обнаружили, что уровень HbAA оставался отрицательно связанным с риском НАЖБП, в то время как уровень HbGA/HbAA был положительно связан с риском НАЖБП во всей группе после поправки на социально-демографические факторы, факторы образа жизни и факторы риска.Кроме того, наши результаты показали, что HbGA не был значимо связан с риском NALFD в скорректированных моделях.

Нейротоксичность, генотоксичность и репродуктивная токсичность АК были хорошо продемонстрированы в предыдущих исследованиях [34,35,36]. Эффекты АК опосредованы образованием генотоксичных метаболитов, окислительным стрессом, нарушением распространения нервных сигналов и нарушением эндокринных гормонов [37]. В последние годы появились данные о его гепатотоксичности, так как печень является основным местом биотрансформации АК.Сан и др. сообщили, что, когда крысам внутрибрюшинно вводили 40 мг/кг АК в течение четырех недель, уровни АЛТ и АСТ в сыворотке были заметно выше в обработанной группе, чем в нормальной контрольной группе [38]. Кроме того, АК (20 мг/кг) увеличивала уровни маркеров окислительного стресса в печени, включая содержание карбонила белка, оксид азота и перекиси липидов, но заметно снижала активность антиоксидантов печени, включая супероксиддисмутазу (СОД) и глутатионпероксидазу (GSH). -Пх).Дисбаланс между антиоксидантами и окислительным стрессом вызывал увеличение маркеров воспаления, таких как NF-κB, TNF-α и IL-1β [39, 40]. Кроме того, эти стрессовые факторы могут вызывать быстрое снижение потенциала митохондриальной мембраны гепатоцитов, а также повышение активности каспазы-3, конечного медиатора апоптоза [41].

Однако упомянутые выше результаты были основаны на дозах АК, намного превышающих те, которым подвергается население в целом в повседневной жизни. Средний уровень HbAA в нашем исследовании составил 50.6 пмоль/г Hb, что эквивалентно общему поглощению 2 мкг/кг массы тела/сутки в соответствии с параметрами фармакокинетики, предложенными Calleman [42]. Что касается воздействия через пищу, исследователи Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) подсчитали, что среднее значение и 90 процентилей ежедневного воздействия АК с пищей на население США составляли 0,44 и 0,95 мкг/кг массы тела [43]. Напротив, Объединенный комитет экспертов по пищевым добавкам (JECFA) сообщил, что уровень отсутствия наблюдаемых побочных эффектов (NOAEL) АК для неканцерогенной конечной точки равен 0.2 мг/кг массы тела/день. В соответствии с вышеуказанным стандартом Liu et al. не обнаружили какого-либо токсического воздействия на печень крыс с метаболической точки зрения после хронического воздействия АК при NOAEL в течение 16 недель [44]. Кроме того, в октябре 2000 г. Национальная токсикологическая программа (НТП) организовала независимую и открытую экспертную оценку и предложила концепцию «эффектов малых доз», которая относится к биологическим изменениям, происходящим в диапазоне воздействия на человека или при дозах ниже чем те, которые обычно используются в стандартной парадигме тестирования для оценки токсичности для репродуктивной системы и развития [45].Поэтому вопрос о том, оказывает ли долгосрочное воздействие малых доз АК негативное воздействие на здоровье человека, требует дальнейшего изучения.

В последние годы для уточнения сферы применения НАЖБП был предложен консенсусный термин «метаболически-ассоциированная жировая болезнь печени» (MAFLD) [46]. Эта обновленная номенклатура лучше отражает основную метаболическую дисфункцию, которая в первую очередь вызывает это заболевание [47]. Соответственно, есть несколько поперечных исследований с использованием базы данных NHANES для изучения взаимосвязи между АК и метаболической дисфункцией.Было обнаружено, что HbAA обратно связан с ожирением и андроидной жировой массой со статистической значимостью [12, 48]. Кроме того, Лин и соавт. [20] сообщили, что повышенный уровень HbAA был связан со снижением уровня инсулина в крови и статусом резистентности к инсулину у взрослых. Точно так же мы также обнаружили отрицательную связь между HbAA и распространенностью метаболических нарушений. Поскольку вышеперечисленные элементы являются общими сопутствующими заболеваниями НАЖБП, разумно предположить, что HbAA отрицательно связан с НАЖБП в наших выводах.Действительно, АК рассматривали как потенциальное химическое вещество, разрушающее эндокринную систему (EDC), связанное с различными метаболическими нарушениями [11]. Однако, вместо традиционной пороговой модели или линейной беспороговой модели, EDC могут демонстрировать U-образную кривую доза-реакция, обычно называемую гормезисом [49], что означает изменение знака ее первой производной [50]. ]. Как упоминалось выше, нормальное ежедневное воздействие АК на людей намного ниже, чем NOAEL, и может располагаться на убывающем интервале кривых [51].Грюнвальд и др. [52] сообщили, что по сравнению с контрольной группой, которой давали только муку, жуки, которых кормили мукой, обогащенной 5% обугленных тостов (обеспечивающих АК), выживали значительно дольше. Эта повышенная стрессоустойчивость может быть результатом активации арилуглеводородного рецептора (AHR) и ядерного фактора 2, связанного с эритроидом 2 (NRF-2). Тем не менее, лежащие в основе механизмы нуждаются в дальнейшем выяснении.

CYP2E1 играет решающую роль в метаболизме АК, и ученые выявили сложное взаимодействие между CYP2E1 и НАЖБП [7].С одной стороны, уровень CYP2E1 в печени является индуцируемым и может повышаться за счет высокого уровня жирных кислот, низкого уровня адипонектина и состояния резистентности к инсулину [53, 54], которые патофизиологически характеризуют НАЖБП. Таким образом, пациенты с НАЖБП, вероятно, имеют повышенную экспрессию и активность CYP2E1 [55]. С другой стороны, эта связь может быть двусторонней, то есть более высокая активность CYP2E1 также может способствовать повреждению печени. Например, повышенная ферментативная активность CYP2E1 способствовала выработке реактивного окислительного стресса (АФК), что приводило к окислительному стрессу и стеатозу печени у мышей и клеток LO ₂ [56].Кроме того, АФК вызывают митохондриальную дисфункцию, основной фактор риска развития НАЖБП, посредством посттрансляционных модификаций белков и повреждения митохондриальной ДНК [57, 58]. О’Ши и др. наблюдали, что два фармакокинетических параметра, средний пероральный клиренс и кажущийся объем распределения хлорзоксазона (опосредованный главным образом CYP2E1), были примерно на 50% выше в группе с ожирением, что согласуется с индукцией CYP2E1. Соответственно, такие люди могут подвергаться повышенному риску CYP2E1-опосредованной токсичности и побочных эффектов [59].Соответственно, в этом исследовании мы обнаружили, что HbGA/HbAA, отражающий степень биотрансформации АК, был положительно связан с НАЖБП в полностью скорректированной модели. В предыдущих исследованиях сообщалось, что скорость метаболического превращения АК в ГА достигала насыщения при низких дозах из-за насыщенной активности фермента CYP2E1 [60, 61]. Это указывает на то, что HbGA/HbAA отрицательно коррелирует с HbAA, поэтому обратная связь между HbAA и НАЖБП в этом исследовании может быть отражением активности CYP2E1 без того, чтобы сам AA играл причинную роль.Ганаем и др. сообщили, что AA-индуцированная генотоксичность отсутствовала у мышей с нулевым CYP2E1 [62]. В результате считается, что CYP2E1 ответственен за гепатотоксичность, связанную с АК.

Помимо CYP2E1, другие возможные ферменты, ответственные за деградацию АК, включают микробные амидазы, катализирующие гидролиз АК до аммиака и акриловой кислоты [63]. Амидазы также играют важную роль в пролиферации клеток. Примечательно, что некоторые нативные микробы в кишечнике, такие как Escherichia coli и Enterococcus faecalis , могут обладать этим потенциалом [64].Появляется все больше доказательств того, что кишечник и печень имеют множественные взаимодействия друг с другом, а нарушение оси кишечник-печень связано с НАЖБП через сложные механизмы [65]. Несмотря на отсутствие исследований, посвященных влиянию АК на микробиоту кишечника, мы считаем, что это будет новое направление исследований.

При анализе подгрупп мы выявили более сильную обратную связь между HbAA и НАЖБП в группе с повышенным уровнем АЛТ (> 40 Ед/л). Анализ уровня АЛТ в сыворотке стал основным методом скрининга повреждения печени [66].Согласно гипотезе «множественного поражения», НАЖБП представляет собой комплексное заболевание с множественными поражениями, действующими вместе [67]. Следовательно, мы можем следить за уровнем АА у людей с дисфункцией печени, чтобы избежать дополнительного удара АА.

Хотя мы использовали крупномасштабную базу данных с контролем качества, чтобы сделать выводы, в нашем исследовании существуют некоторые ограничения. Во-первых, из-за перекрестного характера этого исследования было невозможно сделать прямой вывод о том, какой фактор появился первым. В этом исследовании мы обнаружили отрицательную связь между HbAA и НАЖБП.Однако кажется более разумным, что эта ассоциация является отражением активности CYP2E1, то есть HbGA/HbAA, а не указанием на то, что AA ответственна за развитие НАЖБП. К сожалению, мы не получили информацию об экспрессии или полиморфизмах CYP2E1 в текущей исследуемой популяции. Кроме того, было обнаружено, что картофель фри и обработанные продукты на основе злаков вносят наибольший вклад в потребление АК с пищей, в то время как свежие овощи и фрукты вносят прямо противоположный вклад [43].Поскольку пациентам с НАЖБП рекомендуется ограничение продуктов с высоким содержанием углеводов и потребление большего количества овощей и фруктов [68], другое возможное объяснение отрицательной связи заключается в том, что люди с НАЖБП могли следовать диетическим рекомендациям по ограничению потребления продуктов, содержащих АК. Во-вторых, НАЖБП определяли по социально-демографическим данным и значениям биомаркеров крови, при которых ошибочная классификация могла быть неизбежной. Кроме того, чтобы избежать гиперкоррекции, нам пришлось исключить из регрессионных моделей классификации избыточного веса и диабета, хотя было бы интересно оценить, опосредуют ли эти состояния связь между АА и НАЖБП.В-третьих, биомаркеры AA Hb могут отражать уровень воздействия только в течение 120 дней, что недостаточно для оценки кумулятивного эффекта воздействия AA в течение нескольких лет [8]. Поэтому для выяснения этих взаимосвязей следует использовать дальнейшие долгосрочные когортные исследования.

%PDF-1.4 % 359 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 359 88 0000000016 00000 н 0000002111 00000 н 0000002233 00000 н 0000002684 00000 н 0000002958 00000 н 0000003454 00000 н 0000003477 00000 н 0000003746 00000 н 0000004850 00000 н 0000006952 00000 н 0000006975 00000 н 0000008775 00000 н 0000008798 00000 н 0000010608 00000 н 0000010631 00000 н 0000012563 00000 н 0000012586 00000 н 0000014594 00000 н 0000014617 00000 н 0000016642 00000 н 0000016665 00000 н 0000016949 00000 н 0000017218 00000 н 0000018940 00000 н 0000018963 00000 н 0000018984 00000 н 0000019005 00000 н 0000020841 00000 н 0000020863 00000 н 0000021323 00000 н 0000021345 00000 н 0000022392 00000 н 0000022414 00000 н 0000023655 00000 н 0000023678 00000 н 0000026393 00000 н 0000026415 00000 н 0000027382 00000 н 0000027405 00000 н 0000031513 00000 н 0000031536 00000 н 0000033602 00000 н 0000033624 00000 н 0000034159 00000 н 0000034182 00000 н 0000040134 00000 н 0000040157 00000 н 0000045532 00000 н 0000045555 00000 н 0000050184 00000 н 0000050207 00000 н 0000055805 00000 н 0000055828 00000 н 0000061376 00000 н 0000061399 00000 н 0000066035 00000 н 0000066058 00000 н 0000068043 00000 н 0000068066 00000 н 0000074232 00000 н 0000074255 00000 н 0000079355 00000 н 0000079378 00000 н 0000084932 00000 н 0000084955 00000 н 00000 00000 н 00000 00000 н 0000096659 00000 н 0000096682 00000 н 0000101942 00000 н 0000101965 00000 н 0000107576 00000 н 0000107599 00000 н 0000113054 00000 н 0000113077 00000 н 0000117219 00000 н 0000117242 00000 н 0000123203 00000 н 0000123226 00000 н 0000127581 00000 н 0000127604 00000 н 0000133381 00000 н 0000133404 00000 н 0000138883 00000 н 0000138906 00000 н 0000143403 00000 н 0000002297 00000 н 0000002662 00000 н трейлер ] >> startxref 0 %%EOF 360 0 объект > эндообъект 361 0 объект > эндообъект 445 0 объект > поток Hb«e`xPAX,, Q*PRH