Fd plast труба: Продукция — Московский завод FDplast

Agnieszka Rożej

¹

¹ Департамент водоснабжения и канализации, факультет экологической техники, Университет Люблинского университета, ул. NADBYSTRZYCA 40B, 20-618 Люблин, Польша

Agnieszka Cydzik-Kwiatkowska

²

² Департамент экологической биотехнологии, Университета Wartyia и Mazury в Ольсцтын, Ольштын, Польша

Beata Kowalska

¹ Отдел водоснабжения и Очистка сточных вод, Факультет инженерной защиты окружающей среды, Люблинский технический университет, ул.Nadbystrzycka 40B, 20-618 Люблин, Польша

Dariusz Kowalski

¹ Кафедра водоснабжения и водоотведения, Факультет инженерной защиты окружающей среды, Люблинский политехнический университет, ул. Nadbystrzycka 40B, 20-618 Люблин, Польша

¹ Кафедра водоснабжения и водоотведения, Факультет инженерной защиты окружающей среды, Люблинский политехнический университет, ул. Nadbystrzycka 40B, 20-618 Люблин, Польша

² Кафедра экологической биотехнологии, Варминьско-Мазурский университет в Ольштыне, Ольштын, Польша

Поступила в редакцию 4 июля 2014 г .; Принято 14 октября 2014 г.

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает любое использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора(ов) и источника.

Abstract

Эксперимент проводился на трех модельных системах распределения питьевой воды (РПВП), изготовленных из труб из непластифицированного поливинилхлорида (ПВХ), сшитого силаном полиэтилена (РЕХ) и полиэтилена высокой плотности (ПЭВП), в которые подавалась водопроводная вода.После 2 лет работы системы микробные сообщества в DWDS были охарактеризованы с помощью сканирующей электронной микроскопии, подсчета гетеротрофных чашек и денатурирующего градиентного гель-электрофореза. Наиболее обширные биопленки были обнаружены в трубах из полиэтилена высокой плотности, где бактерии были либо прикреплены к минеральным отложениям, либо погружены в экзополимеры. На поверхностях PEX бактерии не образовывали больших скоплений; однако они присутствовали в наибольшем количестве (1,24 × 10 ⁷ клеток см ^-2 ). Биопленка ПВХ не содержала минеральных отложений, а состояла из одиночных клеток с высоким содержанием Pseudomonas aeruginosa , которые могут быть опасны для здоровья человека.Во всех биопленках и водной фазе обнаружены представители Proteobacteria и Bacteroidetes . Бактерии Sphingomonadales и Methylophilaceae были обнаружены только в образцах PEX, тогда как бактерии Geothrix fermentans , способные восстанавливать Fe(III), были идентифицированы только в биопленке PEX. Последовательности ДНК, тесно связанные с членами Alphaproteobacteria , были наиболее характерными и интенсивными ампликонами, обнаруженными в биопленке HDPE.

Ключевые слова: Система питьевой воды, Бактериальное разнообразие, Биопленка, Денатурирующий градиентный гель-электрофорез (DGGE), Гетеротрофный подсчет чашек (HPC), Сканирующая электронная микроскопия (SEM)

Введение

В последние годы увеличение использования пластиковых труб в системах распределения питьевой воды (ПВС) и бытовых установках, поскольку их легко резать, монтировать и они устойчивы к коррозии. Кроме того, гладкие поверхности пластиковых труб облегчают удаление отложений, накопившихся на их внутренних частях.Однако Роджерс и соавт. (1994) сообщили, что пластиковые материалы легко колонизируются Legionella pneumophila.

Микроорганизмы оседают на внутренних поверхностях труб и образуют биопленку, которая становится источником вторичного микробного загрязнения воды. Развитие биопленки зависит от химической и биологической стабильности воды, ее температуры (Bai et al. 2010), концентрации биоцидов (Norwood and Gilmour 2000), гидравлических условий и периодов застоя (Melo and Vieira 1999; Lehtola et al.2006 г.; Рошекс и др. 2008), а также тип материала, из которого изготовлена ​​труба (Jang et al. 2011; Morvay et al. 2011). Качество воды, проходящей через пластиковые трубы, также может быть ухудшено органическими соединениями, такими как добавки (например, стабилизаторы, антиоксиданты, умягчители, красители), мономеры или продукты разложения полимеров (Brocca et al. 2002; Koch 2004; Skjevrak et al. 2005; Kowalska et al., 2011) мигрировали из пластика. Эти вещества могут использоваться бактериями для поддержки своего роста в олиготрофных условиях.

Бактерии, обнаруженные в системах водоснабжения, являются членами сложных многовидовых сообществ. В последние годы многие независимые от культуры молекулярные методы, такие как профили гена бактериальной 16S рРНК in situ (Burtscher et al. 2009), проточный цитометрический общий подсчет клеток или анализ аденозинтрифосфата (АТФ) (Berney et al. 2008; Hammes и др., 2008) использовались для изучения присутствия микроорганизмов в питьевой воде. Тем не менее, гетеротрофный чашечный учет (ГЧС) и селективный посев на патогены по-прежнему широко используются для контроля бактериального присутствия в питьевой воде, например, государственными санитарными инспекциями и водным хозяйством на основании действующего законодательства (Постановление министра здравоохранения Польши). Здравоохранение от 29 марта 2007 г. о качестве воды, предназначенной для потребления человеком, польский стандарт PN-EN ISO 6222:2004).Среди гетеротрофных бактерий в системах питьевого водоснабжения часто появляются патогенные бактерии или, по крайней мере, условно-патогенные микроорганизмы.

Энтеропатогенные Escherichia coli или другие представители Enterobacteriaceae могут появляться в системах водоснабжения из-за загрязнения в результате затопления, нарушения водоснабжения или недостаточной дезинфекции, Культивированные микобактерии были обнаружены в большинстве проб воды, взятых непосредственно из-под крана в Нидерландах, других странах Западной Европы и США (Van der Wielen et al.2014). Другие условно-патогенные бактерии, такие как Pseudomonas aeruginosa , Aeromonas sp., Burkholderia , sp., Stenotrophomonas maltophila или патогенные штаммы Legionella sp. довольно часто выявлялись в DWDS (Grabinska-Łoniewska 2005). Для исследования морфологии биопленки доступны различные методы. В данном исследовании использовался прямой СЭМ-анализ внутренней поверхности труб для количественного определения зрелой биопленки через 2 года эксплуатации опытной установки.

Целью настоящего исследования было изучение потенциала образования биопленки и разнообразия микробных консорциумов на трех материалах, обычно используемых для производства труб, а именно непластифицированном поливинилхлориде (ПВХ), сшитом силаном полиэтилене (РЕХ) и высоком полиэтилена высокой плотности (ПНД), в условиях эксплуатации имитирующих бытовые установки. Потенциал образования биопленки оценивали с помощью анализа сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) и HPC. Разнообразие микробных сообществ в биопленках и водной фазе исследуемой водной установки определяли методом денатурирующего градиентного гель-электрофореза (ДГГЭ) 16S рДНК.

Оригинальность данной работы заключается в изучении биопленки на различных материалах пластиковых труб после длительного 2-летнего эксперимента и эксплуатации системы аналогично реальным условиям с периодами стагнации. Структуру биопленок изучали на фрагментах труб, отрезанных от монтажа, а не на сменных купонах, чтобы уменьшить влияние дополнительного (т.

В ходе исследования была проведена углубленная молекулярная, биохимическая и микроскопическая характеристика микробных биопленок в ДВД в зависимости от типа используемого пластика.Результаты могут быть использованы в качестве руководства для выбора материалов для проектирования сетей и сантехники.

Материалы и методы

Установка и организация эксперимента

Пилотная модель водопроводной установки состояла из трех независимых замкнутых систем, изготовленных из труб из ПВХ, РЕХ и ПЭНД; каждый длиной 80 м и номинальным диаметром 32 мм (ПВХ) или 25 мм (ПЭВП, PEX). Установки были оборудованы циркуляционными насосами с частотными регуляторами и снабжались водопроводной водой от водопроводной установки (рис.). Система эксплуатировалась при комнатной температуре (22 °С) аналогично реальным условиям, когда теплоизоляция бытовой установки была недостаточной.

Схема типовой системы распределения питьевой воды; 1 Насос Wilo MVIE 204-1/16/E/3-2-26 с преобразователем частоты, 2 съемный участок трубы для микробиологического отбора проб, 3 ультразвуковой расходомер FD 610 (OMEGA, США, точность ±2 %), 4 гибкое подключение к системе водоснабжения здания, 5 точка отбора проб для оценки качества воды, 6 деаэраторы

следующие характеристики: рН 7.11, щелочность 6.45 MVAL L ^-1 , твердость 7,6 MVAL L ^-1 , NH ₄ ⁺ -N 0,05 мг л ^{-N 0,05 мг л -1 , NO ₃ — -N 0,2 мг л -1 , растворимый Fe 0,7 мг L -1 , Mn 0,01 мг L -1 , PO4-3 0,12 мг L -1 , свободный хлор 0,2 мг L -1 , общая концентрация АТФ -1 , TOC 0,2 мг л -1 и HPC 63 КОЕ мл -1 при 22 °C. В период эксплуатации вода попеременно рециркулировала в течение 12 ч через модельные системы со скоростью 0.2 м/с, затем оставили в стагнации на 12 ч. Расход воды в бытовых установках и особенно в общественных зданиях неравномерен и связан с ночным застоем воды. Проведенное авторами исследование показало, что в польских условиях подавляющее большинство трубопроводов эксплуатируется с превышением размеров. Очень часто линии распределения максимальной скорости потока не превышают 0,2 м/с, а ночью скорость падает ниже 0,01 м/с. В лабораторных установках скорость потока воды измерялась с помощью ультразвукового неинвазивного расходомера (PORTAFLOW 300), при этом пороговая чувствительность равнялась 0.01 м/с (Ковальски, 2009b). Число Рейнольдса, которое используется для характеристики режимов течения, варьировалось от 3500 (трубы из ПВХ и РЕХ) до 4500 (трубы из ПЭ) — это переходная зона между ламинарным и турбулентным течением.}

Каждую неделю полностью меняли воду. Водообмен был связан с промывкой трубопровода в течение 10 мин со скоростью 2 м/с. Однократный водообмен занимает 40 с, следовательно, в течение 10 мин следует 15 водообменов в лабораторной системе. Это отражает ситуацию, при которой распределительные трубы в концевых частях систем водоснабжения автоматически промываются, временно открывая свободные выпускные клапаны.

Исследования, проведенные авторами, показали, что возраст воды (время удерживания) в исследованных водопроводных сетях колеблется от 6 до 8 суток (Ковальский 2009а).

Отбор проб и подсчет бактерий

После 2 лет эксплуатации модельных систем были взяты пробы для анализа биопленки. Перед отбором биопленки оба конца каждого 30-сантиметрового отрезка пластиковой трубы с водой (№ 2 на рис. ) закрывались шаровыми кранами. Пробы воды из труб отбирали в стерильные стеклянные флаконы для анализа.Биопленки удаляли с труб встряхиванием стерильных стеклянных шариков размером 425–600 мкм (Sigma-Aldrich, Германия) в 30 мл стерильной воды в течение 5 мин. Полученную суспензию соскобленных отложений использовали для анализа методом ГПХ и ПЦР-ДГГЭ.

HPC определяли методом посева в соответствии с польским стандартом (2004) PN-EN ISO 6222:2004, который является широко используемой процедурой при исследованиях питьевой воды и считается более чувствительным, чем метод налива (Reasoner 2004; Lehtola et al. , 2007). Пробы воды и их десятичные разведения распределяли на чашки Петри с агаризованной питательной средой (R2A).Планшеты инкубировали при 22 °C в течение 72 ч, а другой набор планшетов инкубировали при 37 °C в течение 48 ч; затем подсчитывали колонии бактерий. Эти тепловые условия инкубации требуются в соответствии с польским стандартом (2004) PN-EN ISO 6222:2004. Все измерения проводились в трехкратной повторности. Колонии пассировали на свежей стерильной агаризованной среде R2A. Бактериальные изоляты характеризовали окрашиванием по Граму и биохимическими тестами: API ^® 20NE и API ^® Staph (bioMerieux, Франция).

СЭМ-микроскопия биопленок

После 2 лет эксплуатации распределительных систем пилотного масштаба пять небольших кусочков (1 см ² купона) были вырезаны из труб из ПЭВП, РЕХ и ПВХ для микроскопического анализа структуры биопленки на их внутреннюю поверхность.Пластмассовые купоны предохранялись от высыхания парапленочным каркасом, который заполнялся водой из тест-системы. Такие купоны помещали в чашки Петри на влажную фильтровальную бумагу и хранили при 4°С не более пары часов до проведения микроскопического анализа. Для анализа использовали сканирующий электронный микроскоп LEO1430VP с детектором EDX (Roentec, Германия). Препараты биопленок высушивали в вакуумном испарителе и напыляли хромом на установке для напыления POLARON SC7620 (Quorum Technologies, Англия).Пять случайно выбранных микроскопических полей (627 мкм ² ) на поверхности каждого пластикового образца были проанализированы на структуру биопленки и количество бактериальных клеток. На ПЭВП количество бактериальных клеток подсчитывали как сумму бактерий, видимых на поверхности и погруженных в биопленку. Проведен также элементный анализ отложений (данные не представлены). Это означало, что для каждого типа пластика было выполнено 25 независимых измерений. Были определены средние значения, стандартное отклонение и коэффициенты корреляции.Взаимосвязь между количеством бактериальных клеток на пластиковых купонах была проанализирована на дисперсию с помощью теста Фишера-Снедекора и на средние значения с помощью теста Стьюдента t или теста Кокрана-Кокса при уровне вероятности 0,05 (Згирски и Гондко, 2010).

ПЦР-ДГГЭ-анализ бактериальных сообществ в биопленке

Биомасса из проб воды объемом 200 мл, а также 30 мл взвеси биопленок, соскобленных с внутренних поверхностей пластиковых труб, концентрировали до объема 200 мкл с помощью набора LABAQUA Kit ( LABAQUA SA, Испания) методом мембранной фильтрации через 0.Поликарбонатные фильтры с размером пор 4 мкм и центрифугирование в концентраторе. ДНК выделяли из концентрированных бактериальных суспензий и соскобов биопленок с использованием набора GenElute™ Bacterial Genomic DNA Kit (Sigma-Aldrich, Германия) в соответствии с протоколом производителя, включая расщепление лизоцимом. Наличие ДНК подтверждали электрофорезом на агарозе в 1,0% геле, содержащем бромид этидия. Концентрацию ДНК также измеряли спектрофотометрически на биофотометре (Eppendorf, Германия).

Для ПЦР-ДГГЭ использовали праймеры EUBf933 (5′-GCACAAGCGGTGGAGCATGTGG-3′) с 5′-GC-clamp и EUBr1387 (5′-GCCGGGAACGTATTCACCG-3′), нацеленные на гипервариабельные области 16S рДНК бактерий V6, V7 и V8. (Ивамото и др., 2000). Смесь для ПЦР, содержащая согласно протоколу производителя 0,2 нг/мкл целевой ДНК, 25 мкл AmpliTaq Gold ^® PCR Master Mix (Applied Biosystems, США), 1,25 мкл каждого праймера (25 пмоль) и 12,5 мкл ДНК-свободного воды. ПЦР с горячим стартом проводили при 95°С в течение 10 мин, затем следовали 40 циклов денатурации при 94°С в течение 1 мин, отжига и удлинения при 72°С в течение 1 мин.Во время отжига начальная температура составляла 65 °С и снижалась на 1,0 °С в каждом цикле, пока не достигла 55 °С (ПЦР «приземления»). Последний этап удлинения проводился при 71 °C в течение 7 минут (модифицировано Wu et al., 2006). Продукты ПЦР (450 п.н.) выявляли электрофорезом в 1,0 % агарозном геле, содержащем бромид этидия.

DGGE-анализ продуктов ПЦР проводили с помощью универсальной системы мутаций D-CODE (Bio-Rad, США) и гели документировали, как описано Cydzik-Kwiatkowska et al.(2012). Гели ДГГЭ обрабатывали при 60°С и 100 В в течение 5 ч и окрашивали SYBR ^® Gold (Molecular Probes, США). Полосы ДГГЭ высокой интенсивности вырезали из геля, промывали 100 мкл стерильной воды, суспендировали в 40 мкл дистиллированной воды и оставляли при 4°С на 24 ч. Высвобожденную из геля ДНК повторно амплифицировали. Продукты ПЦР очищали с помощью Roti-PCR Clean (Roth, Германия) и секвенировали методом Сэнгера (GENOMED, ​​Польша). Полученные частичные последовательности рДНК 16S сравнивали с последовательностями из базы данных GenBank с помощью инструмента Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) и депонировали в GenBank под инвентарными номерами {«type»:»entrez-нуклеотид-диапазон»,»attrs»: {«text»:»KF752457-KF752475″,»start_term»:»KF752457″,»end_term»:»KF752475″,»start_term_id»:»573974112″,»end_term_id»:»573974130″}}KF752457-KF752475.

Сходство между шаблонами DGGE определяли с помощью коэффициента Дайса (Nei and Li 1979) в соответствии со следующим уравнением:

где xy – количество полос, присутствующих как в образцах X, так и в Y, x = общее количество полос. в образце X y = общее количество полос в образце Y.

Этот показатель варьируется от 0 (нет общих полос) до 1 (100 % сходство паттернов полос).

Структурное разнообразие микробных сообществ выражали индексом Шеннона-Винера (H) (Fromin et al.2002) в соответствии со следующим уравнением:

, где n _i представляет собой интенсивность полосы i , а N представляет собой сумму всех интенсивностей всех полос на одной дорожке геля.

Лагод и др. (2007) показали, что для полной характеристики сообщества необходимо рассчитывать не только значения H, но и другие индексы разнообразия. Индекс равномерности (V) рассчитывался по следующей формуле (Hurlbert, 1971; Magurran, 1988):

, где H _MAX — виртуальное максимальное значение для гипотетического сообщества, когда все виды одинаково многочисленны.

Значение H _MAX было рассчитано по следующей формуле (Hurlbert, 1971):

, где i — количество полос на одной дорожке геля.

Результаты

РЭМ характеристики поверхности трубы

Электронно-микроскопический анализ показал различия, как в количестве, так и в структуре отложений (таблица) между биопленками, сформированными на внутренних поверхностях трех типов труб .

Таблица 1

Характеристики отложений на внутренней поверхности труб

Наблюдение за поверхностями труб из ПЭВП в СЭМ показало, что они полностью покрыты биопленкой. На внутренней поверхности труб из ПНД присутствовали многочисленные углубления, в которых скапливались отложения цвета ржавчины.Месторождения полезных ископаемых неправильной формы покрывали 47,52 % анализируемой площади (рис. а). Размер отдельных отложений варьировал от 0,01 до 233,4 мкм ² (n = 78, среднее значение 3,82 мкм ² , медиана 0,19 мкм ² ). Их толщина достигала 11,56 мкм (рис. б) и была существенно выше толщины отложений, образовавшихся на поверхности других пластиков. В месторождениях полезных ископаемых преобладали оксиды железа. Налеты были ржаво-коричневого цвета, что наблюдалось как в световой микроскоп, так и без оптических приборов.На этой же площади выявлены скопления Ca, P, S, Si, Zn и Cu. Минеральные соединения предположительно образовались из системы городского водоснабжения, которая состояла из нескольких секций старых железных труб, а также из внутренней водопроводной системы, сделанной из оцинкованной стали.

Пространственная структура отложений на внутренней поверхности труб из ПНД ( a пространственное распределение, b вертикальный разрез, СЭМ, увеличение ×10 000)

Многочисленные отдельные бактериальные клетки различной морфологии, погруженные в экзополимерную матрицу из биопленки на поверхности трубы из полиэтилена высокой плотности (рис.а). В исследованном участке биопленки средняя численность бактерий достигала 1,6 × 10 ⁶ клеток см ^-2 (таблица). Диаметр бактериальных клеток, наблюдаемых в биопленках, варьировал от 0,32 до 0,36 мкм; их длина составляла около 0,8 мкм. Диаметр кокковых форм, которые преобладали на всех анализируемых участках биопленки на поверхности ПЭВП, колебался от 0,48 до 0,6 мкм. Цилиндрические формы микроорганизмов диаметром и длиной 0,64 и 1,83 мкм соответственно чаще наблюдались на поверхности месторождений полезных ископаемых (рис.б).

Бактериальные клетки в биопленке на поверхности ПЭВП ( a погружены в экзополимеры, b прикреплены к отложениям полезных ископаемых, СЭМ, увеличение ×25 000) месторождения полезных ископаемых (таблица). Площадь отложений колебалась от 0,002 до 3,2 мкм ² (n = 272, среднее значение 0,08 мкм ² , медиана 0,03 мкм ² ). Толщина отложений достигала 2,3 мкм (рис. а).Отдельные, преимущественно цилиндрические бактерии наблюдались непосредственно на поверхности РЕХ-труб. Их концентрация составила 1,24 × 10 ⁷ клеток см ^-2 . Бактерии не образовывали агрегатов или колоний, а их появление на поверхности не было связано с наличием минеральных отложений (рис. б). Экзополимерный слой не наблюдался.

a Пространственная структура отложений на внутренней поверхности трубы PEX (вертикальный разрез, СЭМ, увеличение ×10 000). б Пространственная структура отложений и бактерий, адсорбированных на внутренней поверхности трубы РЕХ (пространственное распределение, увеличение ×25 000)

Общее количество бактериальных клеток в биопленках, оцененное на основе микроскопического анализа, было значительно ниже ПВХ, чем на других трубах. На поверхности ПВХ обнаружены только отдельные бактериальные клетки, минеральных отложений и биопленок не наблюдается (рис. ).

Цилиндрические формы бактерий на внутренней поверхности трубы из ПВХ (СЭМ, увеличение ×10 000)

Культивируемые бактерии в биопленке

В образцах биопленки, соскобленной с внутренней поверхности ПЭВП, РЕХ, наблюдался широкий спектр результатов ГПХ. трубы из ПВХ (рис.). Наибольшее количество бактерий, растущих при 37 °C (1,15 × 10 ³ КОЕ см ^-2 ), было обнаружено в биопленке из трубы PEX. В образцах из ПЭВП количество бактерий было более чем в два раза ниже (451 КОЕ см ^-2 ), но эта разница не была достоверной. Только количество бактерий на поверхности ПВХ было значительно ниже (193 КОЕ см ^-2 ), чем на PEX.

Чашечный подсчет гетеротрофных бактерий (HPC) в биопленке при 22 и 37°C из труб из ПЭВП, РЕХ и ПВХ (приведены средние значения и стандартное отклонение) обнаружен между всеми тремя пластиками.Самый высокий КПД при 22 °С, т. е. 1,22 × 10 ⁵ см ^-2 , был обнаружен в биопленке из ПВХ. HPC при 22 °C для труб из ПЭВП и PEX составляли 3,25 × 10 ⁴ и 5,8 × 10 ³ КОЕ см ^-2 соответственно. Во всех трех типах труб количество колоний гетеротрофных бактерий, выращенных при 22°С, было выше из-за возможности роста как мезофильных, так и психрофильных бактерий, чем в ГПК при 37°С, в диапазоне толерантности к мезофильным бактериям.

Идентификация гетеротрофных бактерий в биопленке

При HPC-анализе биопленок труб из ПВХ и РЕХ около 10 % колоний идентифицировано как S.мальтофила . Эти бактерии преобладали на чашках, инкубированных при 37°C. Другие гетеротрофные бактерии, выращенные на питательном агаре при 22 °C, образовывали небольшие (менее 1 мм в диаметре) прозрачные колонии. Это были палочковидные грамотрицательные бактерии. Их пассажи на новых агаровых чашках, а также идентификация с помощью биохимических микротестов оказались безуспешными. В биопленке из труб из ПЭНД около 50 % ГПК, выращенных при 22 °С, представляли собой мелкие прозрачные неидентифицированные колонии. Остальные ГПК были признаны штаммами P. aeruginosa .Почти 100 % колоний, выращенных при 37 °C, были идентифицированы как P. aeruginosa . При обеих температурах (22 и 37 °C) отдельные колонии Micrococcus и Acinetobacter spp. были обнаружены во всех образцах.

Выявленные штаммы представляли собой условно-патогенные бактерии, которые могут быть опасны для здоровья, особенно для людей с ослабленной иммунной системой. Обилие этих микроорганизмов в опытно-промышленной установке свидетельствует об их высокой способности селиться и размножаться на поверхности пластиковых труб.

ПЦР-ДГГЭ анализ бактериальных сообществ в биопленке

Результаты ПЦР-ДГГЭ представлены на рис. Коэффициенты Дайса (C _xy ), описывающие сходство паттернов DGGE, представлены в таблице. Отпечатки пальцев DGGE, характеризующие биопленку и бактериальную суспензию в водной фазе из труб, изготовленных из определенного полимера, были очень похожи (> 78 % сходства), но не идентичны. Они различались наличием и интенсивностью некоторых полос. Микробные сообщества в трубах из РЕХ и ПВХ были более похожи друг на друга, чем в образцах из ПЭВП.Наибольшее расстояние наблюдалось между сообществами, развитыми в двух видах полиэтиленовых труб.

ПЦР-ДГГЭ-анализ 16S рДНК из образцов биопленок (PEXb, HDPEb, PVCb) и образцов водной фазы (PEX, HDPEb, PVC) из пластиковых труб

Таблица 2

образцы воды из различных типов труб (коэффициент кости)

Разнообразие бактериальных сообществ в биопленке и воде выражали индексом Шеннона-Винера (H). Бактериальные сообщества в биопленках на разных полимерах имели близкие значения Н-индекса: 2,22 (ПЭХ), 2,20 (ПЭВП) и 2,10 (ПВХ). Значения H для бактериальных сообществ в водной фазе из трех разных труб были ниже значений, рассчитанных для биопленок, т.е.: 1,99 (PEX), 1,96 (HDPE) и 2,04 (PVC). Показатели ровности (V) биопленок в трех трубах были одинаковыми: 0.97 (ПЭКС), 0,96 (ПЭВП) и 0,96 (ПВХ) и несколько ниже в пробах воды до 0,96, 0,94 и 0,93 соответственно.

Последовательность полос на диаграммах ДГГЭ, характеризующих биопленку и биомассу водной фазы из разных труб, показала, что тип полимера влияет на состав бактериальных сообществ в водопроводных системах (рис.  ). Члены Proteobacteria ( Alphaproteobacteria, Betaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Deltaproteobacteria ) и Bacteroidetes (полосы No.9 и 10) были идентифицированы как в пробах воды, так и в пробах биопленки из всех труб. Наиболее характерным и интенсивным ампликоном в пробе биопленки и пробы воды из ПЭНД была полоса NO. 3 (таблица). Его ДНК показала 99 % сходства последовательности с ДНК некультивируемой бактерии Desulfuromonadales частичного гена 16S рРНК ({«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»AM935739.1″,»term_id»: «2190″,»term_text»:»AM935739.1″}}AM935739.1), принадлежащие к Deltaproteobacteria . Rhodobacter blasticus (группа No.8b, 98 % сходства последовательностей) и Woodsholea maritima (полоса № 3b, 97 % сходства), принадлежащие к Alphaproteobacteria , наблюдались только в биопленке из труб из полиэтилена высокой плотности (таблица).

Таблица 3

Сходство последовательностей 16S RDNA DGGE полосы, определяемые блюдами нуклеотидного поиска

Полоса № 6b присутствовала в биопленке PEX, но не была обнаружена в Образец воды PEX.Анализ последовательности показал, что полоса, вероятно, была получена из Geothrix fermentans , способного восстанавливать Fe(III).Наиболее интенсивные полосы DGGE, характеризующие образцы воды из линий PEX, соответствовали последовательностям ДНК микроорганизмов, принадлежащих к Alphaproteobacteria ( Sphingomonadales ) (полоса №2), Betaproteobacteria ( Methylophilaceae ) (полоса № 4) и Deltaproteobacteria ( Acidobacteria ) (полоса № 5). Эти полосы ДНК не были обнаружены в линиях ПЭВП.

Обсуждение

Несмотря на общеизвестный факт, что только небольшая часть (во многих случаях <1 %) микробных сообществ в воде и биопленке может быть культивирована на обычных средах (Van der Kooij et al., 1995; Hammes et al., 2008). ) ГПХ и селективный посев по-прежнему являются важными методами выявления возбудителей и условно-патогенных гетеротрофных микроорганизмов.

В настоящем исследовании количество бактерий, оцененное с помощью HPC-исследований и наблюдений с помощью СЭМ, между биопленками из труб из полиэтилена высокой плотности, PEX и ПВХ различалось. Описанные расхождения в количестве бактерий могут быть следствием видовых различий в популяциях в трех биопленках, наличия некультивируемых бактерий, а также различий в структуре биопленки. Во время механического удаления биопленки с поверхности труб, большие части зрелой биопленки могут быть сняты с труб из ПЭВП и распределены на чашках с агаром в качестве инокулята.Наконец, количество колоний, вероятно, было занижено. Небольшое количество внеклеточных полимеров может способствовать высвобождению более мелких фрагментов или даже отдельных бактериальных клеток, что может уменьшить различия между общим числом бактерий с помощью SEM и HPC.

Роджерс и др. (1994) сообщили, что L. pneumophila легко колонизируют пластиковые материалы. Они расположили тестируемые материалы по интенсивности образования биопленки в порядке возрастания: стекло < нержавеющая сталь < полипропилен < ПВХ < мягкая углеродистая сталь < полиэтилен < латекс.Различные полимеры могут различаться по сродству к поверхностям бактерий (гладкость, электрический заряд, дзета-потенциал, обилие активных химических групп), влияя на первую стадию колонизации как адгезию (Triandafillu et al. 2003). Пластиковые трубы могут выделять различные химические соединения (мономеры, низкомолекулярные полимерные звенья и добавки, а также продукты разложения). Загрязняющие вещества, мигрирующие из труб из полиэтилена высокой плотности, были идентифицированы в многочисленных исследованиях как фенолы, хиноны, ароматические углеводороды, альдегиды, кетоны, сложные эфиры, терпеноиды, и некоторые из этих соединений могут использоваться бактериями в качестве источника углерода (Brocca et al.2002 г.; Кох 2004; Скьеврак и др. 2005 г.; Ковальская и др. 2011). Трубы из ПВХ выделяют различные хлорированные соединения, оловоорганические соединения, а также летучие органические соединения, в основном альдегиды (Kowalska et al. 2011), и эти соединения могут быть более токсичными для бактерий, чем вещества, выделяемые из других труб.

Ю и др. (2010) также сообщили о различиях между потенциалами формирования биопленок различных материалов. На основании общей концентрации АТФ и числа E. coli авторы оценили более высокий потенциал образования биопленки у полиэтилена, чем у купонов из ПВХ.Микроскопический анализ, проведенный в настоящем исследовании, также показал разницу в количестве отложений на поверхности разных труб и высокий потенциал образования биопленки полиэтилена высокой плотности.

Члены Proteobacteria ( Alphaproteobacteria, Betaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Deltaproteobacteria ) были идентифицированы как в пробах воды, так и в образцах биопленки из всех труб, как и можно было ожидать на основании других исследований систем питьевой воды (Vaz-Moreira et др.2013; Калиш и др. 2010). Результаты ПЦР-ДГГЭ показали меньшую разницу в значениях разнообразия, но более высокую в показателях равномерности между биопленкой и пробой воды в трубах из ПВХ, чем в других трубах с протяженной биопленкой. Эти тенденции могут свидетельствовать о том, что некоторые виды прочно встроены в структуру биопленки и встречаются в воде лишь в небольшом количестве. Это было противоположно результатам, полученным Henne et al. (2012). Они наблюдали меньшее богатство сообществ биопленки по сравнению с основной водой.Это могло быть результатом присутствия различных остаточных фрагментов ДНК в объемной воде, полученной из поверхностных вод, тем более, что они наблюдали совершенно разный состав сообщества во всех пробах общей воды, определенных с помощью анализа гена 16S рРНК. В наших исследованиях модельная водная установка питалась глубинной грунтовой водой, изначально практически лишенной бактерий.

Сообщалось, что различные представители отряда Desulfomodales , принадлежащие к Deltaproteobacteria , участвуют в восстановлении различных соединений, включая SO ₄ (VI), Mn(IV), Fe(III) в качестве акцепторов электронов в анаэробных условиях. дыхание (Ловли и др.2004). Обилие этих бактерий в биопленке и пробах воды из труб из ПЭНД, вероятно, связано с наличием большого количества минеральных отложений, содержащих оксиды железа, выпавших в осадок на поверхности трубы. Ампликон, присутствующий только в биопленке PEX, но не обнаруженный в образце воды PEX, показал высокое сходство с G. fermentans ( Deltaproteobacteria ), способным восстанавливать Fe(III). Невин и Ловли (2002) предположили, что G. fermentans высвобождают соединение, переносящее электроны, которое может переносить электроны из клетки на оксид Fe(III), который не контактирует с организмом.По мнению авторов, бактерии выделяют одно или несколько соединений, способных хелатировать и солюбилизовать Fe(III), в качестве стратегии уменьшения потребности в контакте между клетками и оксидом Fe(III) для восстановления Fe(III). Таким образом, Geothrix может лучше использовать преимущества среды с высоким окислительно-восстановительным потенциалом, чем другие бактерии, восстанавливающие e(III) (Mehta-Kolte and Bond 2012). Это могло способствовать появлению этих бактерий в биопленке PEX, богатой отложениями, содержащими оксиды железа.

Внеклеточные полимеры иммобилизуют клетки биопленки и защищают их от биоцидов, ксенобиотиков и факторов окружающей среды: высыхания, УФ-облучения, колебаний рН, осмотического шока и силы сдвига. В системах питьевой воды и бытовых установках экзополимерный слой защищает бактерии от дезинфицирующих средств и других факторов стресса (de Carvalho 2007), но он также может препятствовать доступу к питательным веществам. Норвуд и Гилмор (2000) наблюдали значительное снижение микробных концентраций в биопленке при 1000 частей на миллион хлора, в то время как эффективная концентрация хлора для дезинфекции воды составляла 10 частей на миллион.В нашем исследовании R. blasticus и W. maritima , принадлежащие к Alphaproteobacteria , наблюдались только в биопленке из полиэтиленовых труб. Матье и др. (2009) сообщили, что Alphaproteobacteria обладают более высокой чувствительностью к высоким концентрациям свободного остаточного хлора (0,4 мг Cl ₂ L ^-1 ), чем другие классы Proteobacteria . Предположительно экзополимеры в протяженной биопленке на поверхности ПЭВП могли защитить эти бактерии от присутствия окислителя в воде.

Наиболее интенсивные полосы ДГГЭ (2, 4, 5), характеризующие пробы воды из линий ПЭХ, соответствовали последовательностям ДНК микроорганизмов, принадлежащих к Sphingomonadales , Methylophilaceae и Acidobacteria . Вышеупомянутые бактерии широко распространены в окружающей среде благодаря их способности утилизировать широкий спектр органических соединений, включая стойкие загрязнители (Takeuchi et al. 1993; White et al. 1996). Микроорганизмы, утилизирующие различные C1-соединения, такие как формамид, принадлежат к семейству Methylophilaceae (Wyborn et al.1994). В свою очередь представители отряда Sphingomonadales (например, Sphingomonas ) могут утилизировать более сложные органические соединения, элюированные с пластика. Недавно Sun и соавт. (2013) идентифицировали видов Sphingomonas sp. устойчивый к 4 мг Cl ₂ L ^-1 в модельной системе распределения питьевой воды. Бактерии, принадлежащие к типу Acidobacteria , широко распространены в окружающей среде, хорошо приспособлены к условиям с низким содержанием питательных веществ и способны продуцировать целлюлозу и выделять высокомолекулярные белки, что предполагает их потенциал устойчивости к высыханию и образованию биопленок.Они также были обнаружены в зрелой биопленке (возрастом 1–3 года) на заглушках из нержавеющей стали в модельной системе распределения питьевой воды, разработанной Martiny et al. (2003). Рост вышеперечисленных групп бактерий может указывать на то, что из труб PEX выделяются некоторые низкомолекулярные органические вещества.

Выводы

Результаты показали, что способность пластиковых труб к образованию биопленки различается в зависимости от используемого материала. Восприимчивость тестируемых материалов к колонизации и образованию биопленки была следующей: HDPE > PEX > PVC.В результате 2 летней эксплуатации трех опытных установок в одинаковых условиях на внутренней поверхности труб образовались биопленки, различающиеся по структуре и микробному составу.

Хотя на разнообразие и богатство микробных сообществ влиял материал, из которого изготовлены трубы, количество микроорганизмов на внутренней поверхности пластиковых труб не зависело от обилия месторождений полезных ископаемых. Биопленки в трубах из ПЭВП были самыми толстыми, но общее количество бактерий было самым высоким в PEX (1.24 × 10 ⁷ см ⁻² ). Протяженные биопленки на трубах из полиэтилена высокой плотности могут быть источником потенциально патогенных и условно-патогенных бактерий, таких как P. aeruginosa или Acinetobacter sp. которые были обнаружены на этом материале культуральными методами.

Благодарности

Работа выполнена при поддержке Министерства науки и высшего образования Польши (4508/B/T02/2009/36).

Ссылки

• Bai X, Wu F, Zhou B, Zhi X. Биопленочные бактериальные сообщества и изобилие в полномасштабной системе распределения питьевой воды в Шанхае.J Здоровье воды. 2010;8(3):593–600. doi: 10.2166/wh.2010.048. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Berney M, Vital M, Hülshoff I, Weilenmann HU, Egli T, Hammes F. Быстрая, независимая от культивирования оценка жизнеспособности микробов в питьевой воде. Вода Res. 2008;42:4010–4018. doi: 10.1016/j.waters.2008.07.017. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Брокка Д., Арвин Э., Мосбек Х. Идентификация органических соединений, мигрирующих из полиэтиленовых трубопроводов в питьевую воду. Вода Res.2002; 36:3675–3680. doi: 10.1016/S0043-1354(02)00084-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Burtscher MM, Zibuschka F, Mach RL, Lindner G, Farnleitner AH. Профили ампликона гена 16S рРНК бактерий in situ в сравнении с гетеротрофными чашками из питьевой воды выявляют совершенно разные сообщества с различным пространственным и временным распределением в распределительной сети. Вода СА. 2009;35(4):495–504. [Google Scholar]
• Цыдзик-Квятковска А., Зелинска М., Войновска-Барыла И. Влияние рабочих параметров на бактериальное сообщество в полномасштабной муниципальной очистной станции.PJ Microbiol. 2012;61(1):41–49. [PubMed] [Google Scholar]
• Де Карвальо CCC. Биопленки: последние события в старой битве. Недавний пациент Биотехнология. 2007; 1:49–57. doi: 10.2174/187220807779813965. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Фромин Н., Хамелин Дж., Тарнавски С., Роэсти Д., Журден-Мисерез К., Форестье Н., Тейссье-Кювелл С., Жилле Ф., Араньо М., Росси П. Статистический анализ денатурации гель-электрофорез (DGGE) дактилоскопические картины. Окружающая среда микробиол. 2002; 4: 634–643.doi: 10.1046/j.1462-2920.2002.00358.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Grabińska-Łoniewska A (2005) Микробное загрязнение систем распределения питьевой воды: проблемы и решения. ECE CEMERA, Варшава, ISBN:83-0-0-6
• Hammes F, Berney M, Wang Y, Vital M, Köster O, Egli T. Общее количество бактериальных клеток методом проточной цитометрии как описательный микробиологический параметр для очистки питьевой воды процессы. Вода Res. 2008; 42: 269–277. doi: 10.1016/j.waters.2007.07.009.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Хенне К., Калиш Л., Бреттар И., Хёфле М.Г. Анализ структуры и состава основных бактериальных сообществ в биопленках зрелой питьевой воды и объемной воде общегородской сети в Германии. Appl Environ Microbiol. 2012;78(10):3530–3538. doi: 10.1128/AEM.06373-11. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Hurlbert SH. Неконцепция видового разнообразия: критика и альтернативные параметры. Экология. 1971; 52: 577–586.дои: 10.2307/1934145. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Ивамото Т., Тани К., Накамура К., Сузуки Ю., Китагава М., Эгучи М., Насу М. Мониторинг воздействия биостимулирующей обработки in situ на бактериальное сообщество подземных вод с помощью DGGE. FEMS Microbiol Ecol. 2000; 32: 129–141. doi: 10.1111/j.1574-6941.2000.tb00707.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Jang HJ, Choi YJ, Ka JO. Влияние различных материалов водопроводных труб на бактериальные сообщества и качество воды в кольцевом реакторе.J Microbiol Biotechnol. 2011;21(2):115–123. doi: 10.4014/jmb.1010.10012. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Kahlisch L, Henne K, Groebe L, Draheim J, Höfle MG, Brettar I. Молекулярный анализ бактериального сообщества питьевой воды по отношению к статусу живой/мертвый. Технологии водных наук. 2010;61(1):9–14. doi: 10.2166/wst.2010.773. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Кох А. Газохроматографические методы обнаружения выделения органических соединений из полимерных материалов при контакте с питьевой водой.Гельзенкирхен: Институт гигиены Ruhrgebiets; 2004. [Google Scholar]
• Ковальска Б., Ковальски Д., Рожей А. Миграция органических соединений из пластиковых труб при контакте с питьевой водой. Предварительные исследования. J Water Supply Res T. 2011;60(3):137–146. doi: 10.2166/aqua.2011.004. [CrossRef] [Google Scholar]
• Ковальски Д. Возраст воды в реальных водопроводных сетях. Pol J Environ Stud. 2009;18(3А):183–187. [Google Scholar]
• Ковальски Д. (2009b) Качество воды в небольшой сети — проблемы и предложения по их решению.Водная практика 4 (3). doi:10.2166/WPT.2009.048
• Лагод Г., Малицкий Ю., Хомчиньска М., Монтусевич А. Интерпретация результатов биомониторинга качества сточных вод с использованием сазондов. Окружающая среда Eng Sci. 2007;24(7):873–879. doi: 10.1089/ees.2006.0090. [CrossRef] [Google Scholar]
• Лехтола М.Дж., Лаксандер М., Миеттинен И.Т., Хирвонен А., Вартиайнен Т., Мартикайнен П.Дж. Влияние изменения скорости потока воды на формирование биопленок и качество воды в пилотной распределительной системе, состоящей из медных или полиэтиленовых труб.Вода Res. 2006;40:2151–2160. doi: 10.1016/j.waters.2006.04.010. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Лехтола М.Дж., Лаксандер М., Миеттинен И.Т., Хирвонен А., Вартиайнен Т., Марткайнен П.Дж. Оценки микробного качества и концентрации меди в распределенной питьевой воде в значительной степени зависят от стратегии отбора проб. Int J Hyg Environ Health. 2007; 210:725–732. doi: 10.1016/j.ijheh.2006.11.011. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Lovley DR, Holmes DE, Nevin KP. Диссимиляционное восстановление Fe(III) и Mn(IV).Adv Microbiol Physiol. 2004; 49: 219–286. doi: 10.1016/S0065-2911(04)49005-5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Магурран А. Экологическое разнообразие и его измерение. Лондон: Крум Хелм; 1988. [Google Scholar]
• Martiny AC, Jørgensen TM, Albrechtsen HJ, Arvin E, Molin S. Долгосрочная последовательность структуры и разнообразия биопленки, сформированной в модельной системе распределения питьевой воды. Appl Environ Microbiol. 2003;69(11):6899–6907. doi: 10.1128/AEM.69.11.6899-6907.2003. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Mathieu L, Bouteleux C, Fass S, Angel E, Block JC.Обратимый сдвиг популяций α-, β- и γ-протеобактерий биопленок питьевой воды при прерывистом хлорировании. Вода Res. 2009;43:3375–3386. doi: 10.1016/j.waters.2009.05.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Mehta-Kolte MG, Bond DR. Geothrix fermentans выделяет два различных окислительно-восстановительных соединения для использования акцепторов электронов в широком диапазоне окислительно-восстановительных потенциалов. Appl Environ Microbiol. 2012;78(19):6987–6995. doi: 10.1128/AEM.01460-12. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Melo LF, Vieira MJ.Физическая стабильность и биологическая активность биопленок в условиях турбулентного течения и низкой концентрации субстрата. Биопроцесс инж. 1999; 20: 363–368. doi: 10.1007/s0044604. [CrossRef] [Google Scholar]
• Морвей А.А., Декун М., Скурту М., Сала С., Морар А., Сарандан М. Образование биопленки на материалах, обычно используемых в бытовых системах питьевой воды. Wat Sci Technol: Водоснабжение. 2011;11(2):252–257. [Google Scholar]
• Nei M, Li WH. Математическая модель для изучения генетической изменчивости с точки зрения эндонуклеаз рестрикции.Proc Natl Acad Sciences, США. 1979; 76: 5269–5273. doi: 10.1073/pnas.76.10.5269. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Nevin KP, Lovley DR. Механизмы доступа к нерастворимому оксиду Fe(III) во время диссимиляционного восстановления Fe(III) с помощью Geothrix fermentans . Appl Environ Microbiol. 2002;68(5):2294–2299. doi: 10.1128/AEM.68.5.2294-2299.2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Norwood DE, Gilmour A. Рост и устойчивость к гипохлориту натрия Listeria monocytogenes в стационарной многовидовой биопленке.J Appl Microbiol. 2000;88(3):512–520. doi: 10.1046/j.1365-2672.2000.00990.x. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]
• Постановление министра здравоохранения Польши от 29 марта 2007 г. (с последующими изменениями) о качестве воды, предназначенной для потребления человеком (Dz.U.07.61.417)
• Polska Norma (2004) (PN-EN ISO 6222: 2004) Якосць воды. Oznaczanie ilościowe mikroorganizmów zdolnych do wzrostu. Określanie ogolnej liczby kolonii metodą posiewu na agarze odzywczym. (Польский стандарт (2004 г.) (PN-EN ISO 6222: 2004).Качество воды. Количественный анализ культивируемых микроорганизмов. Определение количества колоний путем посева на питательную агаровую культуральную среду) (на польском языке)
• Reasoner DJ. Методика подсчета гетеротрофных чашек в США. Int J Food Microbiol. 2004; 92: 307–315. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2003.08.008. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Рошекс А., Годон Дж. Дж., Бернет Н., Эскуди Р. Роль напряжения сдвига в составе, разнообразии и динамике бактериальных сообществ биопленки.Вода Res. 2008;42:4915–4922. doi: 10.1016/j.waters.2008.09.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Rogers J, Dowsett AB, Dennis PJ, Lee JV, Keevil CW. Влияние материалов водопровода на образование биопленки и рост Legionella pneumophila в системах питьевой воды. Appl Environ Microbiol. 1994; 60: 1842–1851. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Скьеврак И., Лунд В., Ормерод К., Херикстад Х. Летучие органические соединения в природной биопленке в полиэтиленовых трубах, подаваемых с озерной водой и очищенной водой из распределительной сети.Вода Res. 2005; 39: 4133–4141. doi: 10.1016/j.waters.2005.07.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Sun W, Liu W, Cui L, Zhang M, Wang B. Характеристика и идентификация устойчивой к хлору бактерии, Sphingomonas TS001, из модельной системы распределения питьевой воды. Научная общая среда. 2013; 458–460: 169–175. doi: 10.1016/j.scitotenv.2013.04.030. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Takeuchi M, Kawai F, Shimada Y, Yokota A. Таксономическое исследование бактерий, утилизирующих полиэтиленгликоль: исправленное описание рода Sphingomonas и новое описание Sphingomonas macrogoltabidus sp .nov., Sphingomonas sanguis sp. ноябрь и Sphingomonas terrae sp. ноябрь Сист Appl Microbiol. 1993;16(2):227–238. doi: 10.1016/S0723-2020(11)80473-X. [CrossRef] [Google Scholar]
• Triandafillu K, Balazs DJ, Aronsson BO, Descouts P, Tu Quoc P, Van Delden C, Mathieu HJ, Harms H. Адгезия штаммов Pseudomonas aeruginosa к необработанному и обработанному кислородно-плазменной поли(виниловой пленке) хлорид) (ПВХ) из эндотрахеальных интубационных устройств. Биоматериалы. 2003; 24:1507–1518. дои: 10.1016/S0142-9612(02)00515-Х. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Van der Kooij D, Harm RV, Baars-Lorist C, Van der Klift DW, Drost YC. Образование биопленки на стеклянных и тефлоновых поверхностях, контактирующих с очищенной водой. Вода Res. 1995;29(7):1655–1662. doi: 10.1016/0043-1354(94)00333-3. [CrossRef] [Google Scholar]
• Van der Wielen PWJJ, Italiander R, Wullings BA, Heijnen L, Van der Kooij D. Условно-патогенные микроорганизмы в питьевой воде в Нидерландах. In: Growth Microbial, Van der Kooij D, Van der Wielen PWJJ., редакторы. Микробный рост в системах питьевого водоснабжения. проблемы, причины, контроль и потребности в исследованиях. Лондон: Издательство IWa; 2014. [Google Scholar]
• Ваз-Морейра I, Эгас С., Нуньес О.С., Манайя С.М. Бактериальное разнообразие от источника до крана: сравнительное исследование на основе гена 16S рРНК-DGGE и культурально-зависимых методов. FEMS Microbiol Ecol. 2013; 83: 361–374. doi: 10.1111/1574-6941.12002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• White DC, Suttont SD, Ringelberg DB. Род Sphingomonas: физиология и экология.Курр Опин Биотех. 1996; 7: 301–306. doi: 10.1016/S0958-1669(96)80034-6. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Wu Q, Zhao XH, Zhao SY. Применение ПЦР-ДГГЭ для исследования бактериального разнообразия питьевой воды. Биомед Окружающая среда Sci. 2006; 19: 371–374. [PubMed] [Google Scholar]
• Wyborn NR, Scherrt DJ, Jones CW. Очистка, свойства и гетерологичная экспрессия формамидазы из Methylophilus methylotrophus . микробиол. 1994; 140:191–195. doi: 10.1099/13500872-140-1-191.[CrossRef] [Google Scholar]
• Yu J, Kim D, Lee T. Разнообразие микроорганизмов в биопленках на водопроводных трубах из различных материалов. Технологии водных наук. 2010;61(1):163–171. doi: 10.2166/wst.2010.813. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Згирский А., Гондко Р. (2010) Obliczenia biochemiczne [Биохимические расчеты] (на польском языке). Вид. Naukowe PWN, Варшава

Efini Y-Pipe Install

Diese Webseite setzt Cookies, über die wir anonyme Daten erheben, wenn Sie die Seite nutzen.Dies geschieht beispielsweise zur Messung und Analyze Ihrer Besuche und Ihrer Nutzung unserer Social-Media-Verbindungen. Wenn Sie diese Webseite nutzen, stimmen Sie der Verwendung von Cookies und ihrer Installation auf Ihrem Endgerät zu. Wenn Sie unter 16 Jahre alt sind und Ihre Zustimmung zu freiwilligen Diensten geben möchten, müssen Sie Ihre Erziehungsberechtigten um Erlaubnis bitten. Мы используем файлы cookie и другие технологии на веб-сайте. Einige von ihnen sind essenziell, während andere uns helfen, diese Website und Ihre Erfahrung zu verbessern.Personenbezogene Daten können verarbeitet werden (z. B. IP-Adressen), z. B. für personalisierte Anzeigen und Inhalte oder Anzeigen- und Inhaltsmessung. Weitere Informationen über die Verwendung Ihrer Daten finden Sie in unserer Datenschutzerklärung. Sie können Ihre Auswahl jederzeit unter Einstellungen widerufen oder anpassen.

Все активы

Шпайхерн

Individuelle Datenschutzeinstellungen

Информация о файлах cookie Datenschutzerklärung Импрессум

Datenschutzeinstellungen

Wenn Sie unter 16 Jahre alt sind und Ihre Zustimmung zu freiwilligen Diensten geben möchten, müssen Sie Ihre Erziehungsberechtigten um Erlaubnis bitten.Мы используем файлы cookie и другие технологии на веб-сайте. Einige von ihnen sind essenziell, während andere uns helfen, diese Website und Ihre Erfahrung zu verbessern. Personenbezogene Daten können verarbeitet werden (z. B. IP-Adressen), z. B. für personalisierte Anzeigen und Inhalte oder Anzeigen- und Inhaltsmessung. Weitere Informationen über die Verwendung Ihrer Daten finden Sie in unserer Datenschutzerklärung. Sie können Ihre Auswahl jederzeit unter Einstellungen widerufen oder anpassen.Он нашел Sie eine Übersicht über alle verwendeten Cookies. Sie können Ihre Einwilligung zu ganzen Kategorien geben oder sich weitere Informationen anzeigen lassen und so nur bestimmte Cookies auswählen.