Бонеты бонвини производитель: Производитель Bonvini | официальный сайт компании «PRO Комфорт»

Содержание

О Компании

Компания «ЭКО-1» является крупнейшим производителем торгового холодильного оборудования на территории постсоветского пространства.

Предприятие выпускает оборудование под двумя собственными брендами.

Под брендом «Снеж» —  холодильные лари разных объемов: есть компактное оборудование объемом от 226 литров до ларей повышенной вместимости – в 615 литров. Лари «Снеж» производят трех видов

  • с металлической крышкой – данный тип ларей больше всего подходит для хранения продуктов в подсобных, закрытых от посетителей помещениях;
  • со стеклянной прямой крышкой – оборудование, подходящее для демонстрации продукции в выставочных залах;
  • со стеклянной гнутой крышкой – наилучший вариант для презентации продукции, эстетичный внешний вид данного ларя и сама конструкция способствуют привлечению внимания посетителей магазина и увеличению среднего чека покупок.

Под брендом Bonvini (разработан с совместно с итальянскими специалистами) — бонеты закрытого типа объемом от 850  до 1238 литров  и холодильные шкафы от 418, до 631 литров. 

Бонеты Bonvini изготавливаются с прямым и гнутым стеклом. 

Все оборудование удобно в эксплуатации, экологически чистое и создано с широким использованием импортных комплектующих изделий. Одним из главных приоритетов на производстве компании, является качество выпускаемой продукции.

РЕКВИЗИТЫ ООО «ЭКО-1»

Юридический адрес:124482, Г.Москва, Г.Зеленоград, ул.Юности, д.8, помещение VI, комната 3

Фактический адрес: 141595, Московская область, Солнечногорский район, деревня Есипово,

Производственно-складской комплекс «Есипово» стр.04-СК

ОГРН 1107746293764

ИНН 7735568642

КПП 773501001

ОКПО – 66342914

Банковские реквизиты:

Банк ВТБ 24 (ПАО)

Р/С 40702810500000103724(рублевый)

К/С 30101810100000000716

БИК 044525716

Московский банк Сбербанка России ОАО, г.Москва

Р/С 40702810138150007628 (рублевый)

К/С 30101810400000000225

БИК – 044525225

Московский банк Сбербанка России ОАО, г.Москва

Р/С 40702840738151007628 (в долларах США)

К/С 30101810400000000225

БИК – 044525225

Свифт-код: SABRRUMM

IBANкод: RU

Московский банк Сбербанка России ОАО, г.Москва

Р/С 40702978938001006768 ( в евро )

К/С 30101810400000000225

БИК 044525225

Свифт-код: SABRRUMM

Лари-бонеты «Bonvini»

Итальянский дизайн и международное качество.

 

Именно за это покупатели ценят бонеты серии Bonvini. Холодильное оборудование этого типа было спроектировано совместно со специалистами из Италии и прошло строгий контроль качества. Широкий размерный ряд бонет позволяет разместить их как в небольших магазинах, так и в крупных торговых сетях. А благодаря привлекательной конструкции холодильное оборудование гармонично впишется в любой интерьер.

 

Для хранения и демонстрации охлаждённой продукции используется бонета — низкотемпературная морозильная витрина горизонтальной ориентации с раздвижными стеклянными створками. Она подходит для торговых точек любой площади, поскольку позволяет вместить большой объем товаров и выгодно их представить покупателю. Холодильное оборудование этого типа предназначено для хранения и заморозки пельменей, мороженого, полуфабрикатов, рыбы и мяса, ранее замороженных фруктов и овощей. Выпускаются и открытые конструкции, которые используются в магазинах самообслуживания. 

 

Конструкции бонет

 

У нас вы можете приобрести горизонтальный морозильник закрытого типа и различного вида надстройки к нему. Все оборудование выполнено из экологичных и надёжных материалов — оцинкованная сталь, металлическая проволока, полимерное защитное покрытие. Горизонтальные холодильники Bonvini просты в обслуживании, могут эксплуатироваться при температуре окружающей среды +38 °С, имеют встроенный холодильный агрегат.

 

Мы предлагаем морозильные бонеты следующих видов:

 

У морозильной емкости отличные демонстрационные качества. Гнутая съёмная крышка из закалённого стекла высокой прочности обеспечивает хороший обзор хранимых внутри камеры товаров. Створки дополняются эргономичными ручками из высокопрочного пластика.

 

Раздвижные створки могут сниматься. Для удобства эксплуатации морозильной бонеты крышка снабжается специализированным уплотнителем Rehau, предотвращающим попадание теплого воздуха внутрь охлаждаемого пространства.

 

При изготовлении гнутых и прямых прозрачных стекол для морозильных бонет используется энергосберегающее стекло «Pilkington». Оно задерживает УФ лучи, позволяя использовать оборудование в летнюю жару в ярко освещенных помещениях. Съёмные стекла легко мыть, чистить. Эта особенность облегчает размещение товаров, выемку корзин из камеры.

 

Критерии выбора

 

Важный параметр морозильного оборудования — объем камеры (полезный). У нас представлены холодильники вместительностью 565, 600, 850, 1100, 764 и 935 литров. Модели с минимальным объёмом камеры удобно приобретать для торговых точек меньшей площади. Также при выборе учитываются следующие характеристики:

 

  • Потребляемая мощность. Наши бонеты имеют класс энергосбережения А+. Модели в нашем каталоге будут потреблять не более 12.5 кВт в сутки;

  • Температурный тип. Мы предлагаем универсальные холодильники. Настраиваемые температурные режимы — от -25°С÷18°С до 0°С÷+10°С;

  • Габариты горизонтальной бонеты;

  • Тип размораживания камеры;

  • Особенности регулировки температурного режима. В нашем оборудовании использован электронный контроллер, облегчающий настройку режимов;

  • Наличие люминесцентной подсветки, дополнительных аксессуаров.

Необходимо покупать холодильное оборудование, соответствующее условиям эксплуатации. Например, при необходимости поменять расположение оборудования внутри магазина бонета модель с колёсами будет более практичной. При стационарном подключении морозильника подойдет техника с регулируемыми опорами. Если покупка холодильного оборудования вызывает трудности, свяжитесь с нашим консультантом.

 

Ларь-бонета Снеж BF Bonvini 2100 L серый (без агрегата)

Описание

Ларь-бонета Снеж BF Bonvini 2100 L серый (без агрегата) с прямым стеклом оснащена прямой съёмной крышкой для удобной загрузки товара. Также крышка снабжена специализированным уплотнителем Rehau, предотвращающим попадание теплого воздуха внутрь охлаждаемого пространства. При изготовлении прямых прозрачных стекол для морозильной бонеты используется энергосберегающее стекло с тонким металлическим напылением. Оно задерживает УФ-лучи, позволяя использовать оборудование в летнюю жару в ярко освещенных помещениях. Съёмные стекла легко мыть, чистить. Эта особенность облегчает размещение товаров, выемку корзин из камеры.
Бонета оснащена низкотемпературным сбалансированным холодильным агрегатом. Уровень шума не более 60 dB, что равнозначно разговору в спокойной обстановке. Тепловыделение около 340 Вт/час. Для сравнения – такое же количество тепла в час выделяют два человека;

Особенности

• Теплосберегающий профиль, позволяющий значительно уменьшить теплопотери, что способствует уменьшению энергопотребления;
• Компрессор предназначенный для жарких климатических условий;
• Автоматическая оттайка горячим газом без использования электрического нагрева. Проводится как в автоматическом режиме, так и в режиме ручного управления;
• Контроллер, предназначенный для измерения и регулирования температуры, управления работой компрессоров и вентиляторов;
• Корпус из окрашенной оцинкованной стали, гарантированно обеспечивающей износостойкость и антикоррозийную защиту;
• Съемное каленое стекло с защитой от царапин и энергосберегающим напылением;

• Ряд сетчатых полок или корзин;
• Энергосберегающая светодиодная подсветка внутреннего объема. Обеспечивает прекрасный обзор товара и обладает высокой экономией энергии;
• Удобные врезные и эргономичные ручки из высококачественного пластика. Гарантирует абсолютную прочность даже при частом открывании и закрывании крышек ларя.

Характеристики

Брутто-объем, общий, л: 1023
Потребляемая мощность за 24 часа, кВт: 10,5, класс энергопотребления «А»
Температурный режим, С°: +10 до 0….-18 до -25
Мощность, Вт: 935
Комплектация: корзины (8 шт.), колесные опоры (6 шт.)
Материал корпуса: оцинкованный металл с полимерным покрытием
Слив: предусмотрен
Испаритель: Медный с алюминиевыми ламелями
Конденсатор: Выносной «Karyer»
Тип размораживания: Полуавтомат
Влажность окружающей среды, %: до 70%

***

В новых бонетах «L» отточенная холодильная система, укомплектованная компрессорами «Embraco» и конденсаторами «Sest Luve», способная работать в жарких климатических условиях. Оборудование изготовлено по классу «4+», температура окружающей среды «+38 ºС». В новой бонете по настоянию ритейлеров изменена конструкция стекол: два стекла легко снимаются для более быстрой загрузки товара в оборудование. Стекла обрамлены теплосберегающими профилями «Rehau», которые позволяют значительно уменьшить теплопотери, что способствует уменьшению энергопотребления. Благодаря итальянским дизайнерам изменился и внешний вид новых бонет. Он стал более гармоничным и современным. Остальные характеристики не изменились.

Подобрать компрессорно-конденсаторный агрегат (ККА)

Преимущества и недостатки выносного холода

Остались вопросы по характеристикам или покупке ?

Наши специалисты с удовольствием Вас проконсультируют и помогут сделать правильный выбор

Позвоните
+7 (495) 123 34 44

Напишите на E-mail
[email protected]

Закажите обратный звонок

Купить товар в 1 клик

Время работы нашего магазина с 9:00 до 19:00, суббота c 10:00 до 18:00, воскресенье выходной.
Заказы онлайн круглосуточно
Адрес склада и офиса: Москва, Волоколамское шоссе, 142, офис 527 (как доехать)

Ларь-бонета Bonvini BF2500L

В бонетах Bonvini BF 2500L работает усовершенствованная холодильная система, укомплектованная компрессорами Embraco и конденсаторами Sest Luve, способная работать в жарких условиях. Оборудование изготовлено по климатическому классу 4+, температура окружающей среды может достигать +38 ºС. Два стекла легко снимаются для быстрой загрузки товара. Стекла установлены в теплосберегающие профили Rehau, которые позволяют значительно уменьшить потери энергии. Это способствует экономии. Конструкция дверей ларь-бонеты ― раздвижная.
Итальянские дизайнеры сделали внешний вид бонет Bonvini BF 2500L гармоничным и современным.
Можно выбрать из трех цветовых решений пластиковой окантовки — серого, синего, красного. Ларь выполнен из ударопрочного АБС-пластика.
Морозильная бонета закрытого типа BF 2500 (L) может работать как в морозильном, так и в холодильном режиме.

В комплекте предоставляются сдвоенные колесные опоры (10 шт.) и корзины (10 шт.). 

Бонета оснащена низкотемпературным сбалансированным холодильным агрегатом. Уровень шума не более 60 dB.

Устройство имеет корпус из оцинкованной стали и предполагает возможность полуавтоматической разморозки, что значительно сокращает время на обслуживание модели. В агрегат встроен электронный контроллер и специальный слив, для удаления талой воды.

• Теплосберегающий профиль, позволяющий значительно уменьшить теплопотери, что способствует уменьшению энергопотребления;
• Компрессор предназначенный для жарких климатических условий;
• Автоматическая оттайка горячим газом без использования электрического нагрева. Проводится как в автоматическом режиме, так и в режиме ручного управления;
• Контроллер, предназначенный для измерения и регулирования температуры, управления работой компрессоров и вентиляторов;
• Корпус из окрашенной оцинкованной стали, гарантированно обеспечивающей износостойкость и антикоррозийную защиту;
• Съемное каленое стекло с защитой от царапин и энергосберегающим напылением;
• Ряд сетчатых полок или корзин;
• Удобные врезные и эргономичные ручки из высококачественного пластика. Гарантирует абсолютную прочность даже при частом открывании и закрывании крышек ларя.

 

Морозильная бонета Bonvini BF 2100L со съёмными створками

Влажность окружающей среды до 70%

Внутренняя камера материал Металл оцинк. с полим. покрытием

Испаритель Медный с алюминиевыми ламелями

Колеса Сдвоенные, поворотные Ø 50мм.

Комплектация корзины (8 шт.), колесные опоры (6 шт.)

Компрессор «EMBRACO»

Конденсатор Выносной «Karyer»

Корпус материал Металл оцинк. с полим. покрытием

Масса (без упаковки) кг. 160

Материал секций металлическая проволока с порошковым напылением

Напряжение 220V, 50Гц

Общий объем л. 1100

Полезный объем л. 850

Потребляемая мощность класс энерго-потребления А 12,5 кВт/24 ч.

Размеры без упаковки ВхШхД, м 2,09*0,96*0,85

Размеры в упаковке ВхШхД, м 2,34*1,04*1,02

Регулировка Электронный контроллер

Слив предусмотрен

Стекло Закаленное стекло Pilkington

Температура до +38 гр.С

Температурный режим +10 до 0….-18 до -25

Тип размораживания Полуавтомат

Хладогент R 404

Цвет пластиковой окантовки Серый, по заказу может быть синего или красного цвета

Морозильные бонеты — Бонета Bonvini BFG 1850 PH с гнутыми стеклами Push UP (+10…0/-18…-25 C, 1855x960x835 мм)

0

В корзину

ЦЕНА ПО ЗАПРОСУ!

Производитель:Снеж

Длина, мм:1855

Ширина, мм:830

Высота, мм:860

Габариты в упаковке:1965x1100x990 мм

Тип:с гнутым стеклом

Напряжение:220 В

Объем:800 л (общий)

Внутренний полезный объем:660 л

Материал корпуса:оцинк. металл

Температурный режим:-25…-18°С / 0…+10°С

Хладагент:R404A

Серия (линейка):Bonvini

Подсветка:LED

Компрессор:NT2150GK

Покрытие:полимерное

Размораживание:горячим газом

Темп. окружающей среды:до +32°С

Морозильный ларь-бонета BONVINI BFG 1850 РН с гнутыми  стеклами Push UP, предназначен для хранения и демонстрации ранее замороженных продуктов. Специальное гнутое стекло обеспечивает хороший обзор хранимых внутри камеры товаров. Особенности открывания дверей поперечные, а не продольные, в отличие от типовых моделей имеющихся на рынке. Конструкция стекол Puch UP,  обеспечивает, как удобство покупателям (одновременное открывание   стекол), так и владельцам оборудования, обеспечивая поддержание нужного температурного режима за счет открывания стекол на половину размера бонеты .В бонете BONVINI BFG 1850 РН установлена сбалансированная холодильная система, укомплектованная компрессорами  и конденсаторами ведущих европейских производителей, способная работать в различных климатических условиях.  Оборудование изготовлено по классу 4+, температура окружающей среды до +38 градусов.  Бонеты BONVINI BFG 1850 РН также могут работать, как в морозильном, так и в холодильном режиме.Оборудование комплектуется сетчатыми полками или корзинами, энергосберегающей светодиодной подсветкой, а также удобными врезными и эргономичными ручками, устойчивыми металлическими ножками, по желанию может комплектоваться колесами.

Базовая комплектация:
Теплосберегающий профиль, позволяющий значительно уменьшить теплопотери, что способствует уменьшению энергопотребления;
Компрессора предназначенные для жарких климатических условий;
Низкотемпературный сбалансированный холодильный агрегат. Уровень шума не более 60 dB, что равнозначно разговору в спокойной обстановке;
Автоматическая оттайка горячим газом без использования электрического нагрева. Проводится как в автоматическом режиме, так и в режиме ручного управления;
Контроллер, предназначенный для измерения и регулирования температуры, управления работой компрессоров и вентиляторов;
Корпус из окрашенной оцинкованной стали, гарантированно обеспечивающей износостойкость и антикоррозийную защиту;
Съемное каленое стекло с защитой от царапин и энергосберегающим напылением;
Ряд сетчатых полок или корзин;
Энергосберегающая светодиодная подсветка внутреннего объема. Обеспечивает прекрасный обзор товара и обладает высокой экономией энергии;
Удобные врезные и эргономичные ручки из высококачественного пластика. Гарантирует абсолютную прочность даже при частом открывании и закрывании крышек ларя.

Ларь-бонета широкий выбор и цены

Ларь-бонета от производителя

В последнее время все чаще для горизонтальной выкладки товаров в магазинах и супермаркетах применяются лари-бонеты, которые сочетают в себе качества как классического ларя, так и открытой бонеты. Этот тип оборудования разрабатывался в 1990 годах для того, чтобы устранить недостатки горизонтальных ванн и морозильников. В отличие от ларей лари-бонеты обладают большей обзорностью, тем самым привлекая покупателя. При этом стеклянная верхняя крышка или дверцы предохраняют развесной товар от порчи и обветривания, которые довольно часто происходят в открытых бонетах. Из-за наличия крышки лари-бонеты также называются «бонеты со стеклопакетами». Крышка может быть прямой или гнутой в зависимости от марки оборудования и существенно повышает экономичность, не допуская расхода холода в пространство торгового зала. Как правило, лари-бонеты устанавливаются в центре торгового зала и оборудованы специальными противоударными бамперами для защиты от случайных повреждений покупательскими тележками.  

Компания ТЕХНОМИР является официальным представителем крупнейших производителей торгового холодильного оборудования. Продаем и обслуживаем лари-бонеты марок Bonvini (Россия), AHT (Австрия), JBG 2 (Польша), Norpe Viessmann (Финляндия), Brandford (Россия).

Холодильный ларь-бонета

Холодильными называют лари-бонеты с температурным режимом  от 0 С до +10 С. Данное холодильное оборудование применяют практически во всех супермаркетах. Скоропортящиеся продукты без холодных ларей очень быстро придут в негодность.

Морозильный ларь-бонета

Морозильными называют лари-бонеты с температурами от -1 С до -25 С. Не секрет, что многие продукты попадают к магазинам в замороженном виде и для сохранения внешнего вида используют морозильные лари. Морозильные лари-бонеты, так же, как и холодильные позволяют продуктам не портиться долгое время.

Универсальный ларь-бонета

Универсальными называют лари-бонеты с возможностью выбора температурных диапазонов. Крупные производители стараются учесть все нюансы и пожелания клиентов касаемо дизайна, эргономики холодильного оборудования. Один из важных параметров это габариты ларя бонета. Размеры ларей не имеют единого стандарта и могут меняться. Заказчик может выбрать дизайн и размер максимально подходящий под место использования. 

Ларь-бонета с подсветкой

Большой популярностью пользуются лари-бонета с подсветкой. Разноцветные световые диоды встроенные в корпус ларя дополняют дизайн, а так же притягивают внимание покупателей.

Купить ларь-бонета

Компания ТЕХНОМИР более 20 лет продаёт торговое холодильное оборудование. Купить ларь-бонета в Санкт-Петербурге можно в нашей компании по адеру ул. Савушкина, 83 к3. Предварительная консультация со специалистом по телефону +7 (812) 346-56-66

Интервью с директором по маркетингу «ЭКО-1»

«ЭКО-1» — производитель, пожалуй, самого новейшего и самого популярного на сегодняшний день российского торгового холодильного оборудования (ТХО). Специалисты ГП «ЭКО-1» изучили передовой датский, итальянский, немецкий и польский опыт и внедрили новейшие технологии в его производство. Чтобы расширить стратегическое видение бизнеса, высшее руководство компании изучило производственную организацию Toyota и Nissan, Япония.

Директор по маркетингу Любовь Груздева рассказала журналу «Империя холода», как на «ЭКО-1» рождается качество.

— Любовь Владимировна, что помогло вашей компании создать современное, во многом инновационное производство в Солнечногорском районе Московской области?

— В том числе нам помог льготный кредит, полученный в рамках программы импортозамещения от Фонда развития промышленности. Сам ОЭС-1 также вложил в проект значительный объем собственных средств.

Средства были направлены на усовершенствование завода, оснащение его автоматическими, роботизированными производственными линиями, а также на расширение ассортимента выпускаемой продукции.И сегодня, и в перспективе мы планируем производить наиболее востребованную на рынке продукцию: витрины-прилавки, навесные стеллажи, морозильные лари и крышки, холодильные шкафы. Мы можем это сделать, так как используем новейшие западные технологии и привлекаем специалистов высокого профессионального уровня.

— Как ваша компания завершила 2017 год?

— Мы увеличили объем продаж холодильного и морозильного оборудования. По количеству изготовленных ларей компания в 2016 году заняла первое место в стране.Новое производство позволяет нам продолжать расти.

— Какие особенности вашего оборудования позволили компании занять столь значительную нишу на российском рынке?

— Среди основных преимуществ ассортимента, особенно нового, технологичность, экономичность, энергосбережение и конкурентоспособная цена. Передовые технологии позволяют обеспечить способность СРЭ поддерживать заданные температуры, равномерно распределять холод и работать без сбоев и в течение длительного времени.Поэтому наш девиз «Достойная техника по реальным ценам» подтверждается реальными результатами.

Для повышения конкурентоспособности нашего СРП в Италии заключен договор с лучшим конструкторским бюро на разработку новой техники. Мы также пригласили для участия в проекте талантливого промышленного дизайнера, имеющего большой опыт в SRE-дизайне. В октябре 2017 года наши итальянские партнеры посетили Россию и предложили свои концептуальные решения по основным ассортиментным группам торгового оборудования как встраиваемую, так и выносную систему холода.Решения характеризуются увеличенным объемом размещаемых изделий, современными вариантами открывания стекол. Кроме того, они предусматривают широкий диапазон типоразмеров оборудования. Конструкции позволяют использовать различные варианты размещения SRE в торговом зале в зависимости от требований клиента: настенные (прямые и угловые) и «островные» варианты (компактный или широкий «остров»). Представленные предложения содержат несколько эксклюзивных решений, разработанных специально для СОЭ «ЭКО-1».

После обсуждения инженерных решений была предложена концепция дизайна нового оборудования.Решения можно отнести к разряду классических, но в то же время в классике отчетливо просматривается ряд свежих идей. В конструкциях используется принцип сквозного оформления; обеспечивает сохранение исходных пропорций во всей линейке продуктов. Концепт-модель имеет 3 основных структурных элемента, которые, с одной стороны, объединяют все решения, а с другой стороны, делают каждую разработку непохожей друг на друга.

— Вы используете передовые технологии. А какие компоненты используете?

— Есть и импортные комплектующие, но это в основном наши отечественные лучшие.

— Продукция «Снеж» славится своим качеством. Как добиться этого технологически?

— За счет гибких технологий. Компании удалось значительно расширить модификации представляемых моделей и стать практически единственным универсальным производителем в данной отрасли. На сегодняшний день ЭКО-1 предлагает около 85 вариантов ларей под ТМ «Снеж»; они разные по размеру, цвету и температурным режимам. Выпускаются лари с герметичными крышками и стеклянными крышками, гнутые и прямые стекла.

Комплектующие заготовки для корпусов сундуков изготавливаются для каждого типа и размера изделий. Это позволяет максимально использовать материал с минимальными отходами. При изготовлении корпусов для снижения теплопотерь и придания им жесткости используется прием заполнения внутреннего пространства пенополиуретаном. Для придания четких геометрических форм и расчетной плотности пенополиуретана для всех изделий используются регулируемые формы.

Корпуса сундуков изготовлены из оцинкованной окрашенной стали с нанесением полимерной защитной пленки.Благодаря конструктивным особенностям изделий нет необходимости в дополнительных способах фиксации деталей и их герметизации. Корпус крышки также изготавливается из оцинкованной окрашенной стали с полимерной защитной пленкой или из нержавеющей стали. По периметру крышки установлен трехкамерный эластичный уплотнитель. Внутренняя панель чехла изготовлена ​​из формованного ударопрочного АБС-пластика «Снежок» и имеет декоративный рисунок. Использование формованной пластиковой панели позволяет увеличить толщину покрытия (улучшить теплоизоляцию), минимизировать потери холода за счет «тепловых мостов» и повысить потребительскую привлекательность продукта.


Все сдвижные створки изделий (прямые и изогнутые) изготовлены из закаленного (травмобезопасного) стекла со специальным покрытием, позволяющим снизить поступление тепла в охлаждаемое помещение на 6–10 %. Участок вакуум-формования, где изготавливаются каркасы изделий (корона), позволяет гибко реагировать на запросы каждого заказчика. Это позволило сократить время изготовления сундука, а также использовать материалы разных цветов и фактур поверхности. Теплообменники (испарители и конденсаторы) изготавливаются из стальной или алюминиевой профильной трубы для увеличения площади контакта с панелями корпусов изделий.


Качество материалов контролируется на каждом этапе производства. Технологическое оборудование лучших европейских производителей, используемое при изготовлении продукции «БОНВИНИ» и «Снеж», позволяет найти течь холодильного контура и заполнить его хладагентом с погрешностью до 5 гр. Имеющаяся полимерная защитная пленка на поверхности корпусов позволяет сохранить товарный вид изделий при производстве, транспортировке и монтаже.

Для защиты корпусов от механических воздействий от пищевых тележек на СРЭ устанавливаются защитные бамперы с декоративными вставками (цвет по желанию заказчика).

Вся товарная продукция проходит периодическую функциональную проверку в современной испытательной лаборатории с полным набором измерительного оборудования. Перед запуском в производство все новые разработки проходят здесь испытания.

— Каков спрос на давно выпускаемую технику и новинки?

— Они оба востребованы.Давние отношения и сам факт наличия предложений высокотехнологичных новинок здесь.

— В каких регионах продается оборудование?

— Везде — от Калининграда до Камчатки. Но мы не ограничиваемся только территорией России, мы работаем и за ее пределами, экспортируя продукцию в 13 стран мира. Наша продукция имеет своих потребителей в Казахстане, Беларуси, Украине, Армении, Грузии, Молдове, Кыргызстане, Таджикистане, Литве, Латвии, Азербайджане, Узбекистане и Румынии.
Компания идет дальше, постоянно совершенствуя свои процессы, чтобы предлагать качественное и конкурентоспособное оборудование как в России, так и за рубежом.

— Насколько ваша продукция популярна среди торговых компаний?

— ОЭС-1 сотрудничала и продолжает сотрудничать с федеральными и региональными сетями. Среди них «Монетка», «Магнит», «Светофор», «Спар», X5 RetailGroup, «О Кей», «Полушка», «Пятерочка», «Дикси», «БарсРитейл». Они оборудуют свои магазины морозильными ларями «Снеж», холодильными шкафами и крышками «БОНВИНИ».Игроки рынка довольны качеством оборудования и сервиса, поэтому планируют продолжить работу с «ЭКО-1».

В условиях сильной конкуренции на рынке ритейлеры ищут предложения холодильного оборудования с хорошим соотношением цены и качества, недорогими расходными материалами, качественным и быстрым гарантийным обслуживанием, высоким уровнем безопасности, простотой монтажа и эксплуатации, а также решения для небольших торговых залов и крупных магазинов.

Холодильное и морозильное оборудование нашей компании соответствует всем этим требованиям; товар сертифицирован и имеет фирменную гарантию.Мы стараемся держать цены на одном уровне, чтобы наши партнеры могли правильно рассчитать свои затраты. Высокая производительность завода сводит к минимуму время выполнения заказа. Кроме того, SRE покупают производители напитков, мороженого, замороженных продуктов, HoReCa и др.

— Какие у вас планы по производству морозильного и холодильного оборудования в 2018 году?

— Крупные российские сети выражают желание иметь оборудование, работающее на пропане, а не на фреоне, чтобы не наносить ущерб окружающей среде.Видя эти тенденции, руководство ЭКО-1 взяло курс на организацию выпуска и такой продукции. Мы уверены, что это вполне возможно на нашем современном производстве.

Московская область,

Солнечногорский район,

деревня Есипово

8 (499) 2713388 (многоканальный)

8 (919) 9989830

8 (919) 9989827

ГЕОТЕРМАЛЬНАЯ СТАНЦИЯ PICO ALTO 4 МВТ ТЕПЕРЬ ОБЕСПЕЧИВАЕТ ЭНЕРГОПОТРЕБЛЕНИЕМ ОСТРОВ ТЕРСЕЙРА НА АЗОРСКИХ ОСТРОВАХ

Остров Терсейра, 20 ноября 2017 г.  — Сегодня компания EXERGY приняла участие в церемонии открытия геотермальной электростанции Пику-Альто мощностью 4 МВт, которая состоялась на живописном острове Терсейра на Азорских островах.Электростанция, спроектированная и построенная EXERGY и португальской компанией CME для EDA RENOVÁVEIS, принадлежащая EDA, энергетической компании Азорских островов, в настоящее время находится в коммерческой эксплуатации, обеспечивая зеленую базовую электроэнергию для удовлетворения энергетических потребностей острова.

Бинарная электростанция мощностью 4 МВт использует геотермальный ресурс с высокой энтальпией, используя тепло, доступное как в потоке пара, так и в геотермальном рассоле. Для этого сложного проекта, расположенного в отдаленном месте, в центре острова Терсейра, в 1500 км от материковой части Португалии, консорциум EXERGY — CME предоставил решение «под ключ», включая проектирование и строительство систем сбора, установку ORC с воздушным охлаждением, оснащенную Турбина EXERGY с радиальным оттоком и все остальное оборудование завода.

Благодаря индивидуальной и эффективной конструкции цикла и проверенной технологии турбины с радиальным оттоком EXERGY, электростанция достигла максимально возможной эффективности преобразования, производя до 4,9 МВт электроэнергии, в среднем 4,5 МВт, таким образом превышая значения, гарантированные для клиент.

С помощью геотермальной электростанции Пико-Альто компания EDA Renováveis ​​в настоящее время обеспечивает устойчивым и надежным источником электроэнергии более 56 000 жителей Терсейры, удовлетворяя до 10% потребности острова в электроэнергии.

Участие в церемонии инаугурации под председательством президента регионального правительства Азорских островов г-на Васко Кордейро,  Марко Бонвини   Главный операционный директор  из  EXERGY  прокомментировал:   «Мы очень гордимся успешным завершением этого сложного проекта . Пико-Альто представляет для нас отличный пример того, как инновации в области экологически чистых технологий могут обеспечить устойчивые решения для удовлетворения потребностей людей в энергии и внести вклад в улучшение экономики энергетики в отдаленных и изолированных уголках планеты.Мы видим много возможностей для применения нашей технологии в удаленных районах, и Пико-Альто является хорошей отправной точкой и отличным ориентиром. Мы благодарим EDA Renováveis ​​за доверие, которое они нам оказали, и мы предоставляем им наши ноу-хау, чтобы продолжать разрабатывать эффективные и надежные технологии для повышения производительности их предприятий».

Карлос Альберто Рапозо Бикудо Понте , член Совета директоров EDA Renováveis ​​, заявил: « Открытие геотермальной электростанции Пику-Альто является первой вехой для начала коммерческой эксплуатации геотермальной энергии на острове Терсейра, увеличивая диверсификацию энергетики. структура генерации и увеличение вклада возобновляемых источников энергии.Строительный проект был сложной технической и управленческой задачей, поскольку несколько подрядчиков работали одновременно и, в некоторых случаях, в суровых климатических условиях. Это было эффективно преодолено благодаря тесному сотрудничеству всех высокоспециализированных команд, где EXERGY успешно взяла на себя ведущую роль. Мы очень довольны первыми производственными результатами. За первые 2 месяца работы электростанция Пико-Альто обеспечивает стабильную и надежную поставку в сеть 4 МВт электроэнергии.При сохранении этих высоких показателей в 2018 году годовой объем производства электростанции Пико-Альто, вероятно, превзойдет оценку, сделанную до строительства электростанции. Таким образом, вклад геотермальной энергии, вероятно, превысит 10% от потребностей Терсейры в электроэнергии, освобождая эту часть производства электроэнергии от тепловых групп, где потребляется ископаемое топливо, тем самым обеспечивая экономию для экономики Азорских островов, а также экологические преимущества, снижая выбросы парниковых газов в атмосферу.

Имея геотермальный портфель, достигающий более 340 МВт, и действующую мощность 331,5 МВт, EXERGY сегодня представляет собой второй по величине геотермальный бинарный флот в мире.

Отели длительного проживания в Хеби 2022 Скидки до 20% на отели длительного проживания

Прежде всего, я хочу сказать, что здесь очень хорошая обстановка. Когда я впервые увидел бассейн и вид на реку, я был поражен! Я не ожидал, что у Хеби такое красивое место! Глядя на пейзаж и восторженную сцену детей, играющих в воде, я почувствовал, что плата за номер в две тысячи юаней все еще стоит того, поэтому я снова повела детей сюда через неделю, но на этот раз опыт заставил меня Впечатление от этого места стало очень и очень плохим! ! Во-первых, помимо окружающей среды и удобств, проживание в семье с такой высокой платой также должно иметь соответствующее управление и услуги.Однако никакого сервиса здесь нет. Большинство официантов — тёти. Когда я впервые пришел в бассейн, тети сидели и болтали на шезлонгах у бассейна, когда вам нужна ее помощь, их отношение просто игнорируется, а когда вам нужно, чтобы они принесли вещи, их отношение неохотно. Это второй раз, когда я делаю барбекю здесь у бассейна. Первый опыт был довольно хорошим. Во второй раз, как будто я им должен денег, скажите, что наш шашлык закончится в десять часов и мы должны его убрать.Когда я спорил по причинам, почему никто не сказал мне, во сколько я должен был закончить барбекю в прошлый раз, когда я пришел сюда, а потом мне дали повод сказать, что в бассейне нужно менять воду в десять часов, поэтому я не Не комментируйте это! Если вы сказали мне в начале или дали срок, когда я пришел сюда в прошлый раз, то мне нечего сказать. Когда они просили их помочь мне поднять посуду, они очень неохотно точили и арфировали. Особое внимание уделяется шашлыку. Я заплатил за место проведения, 50 юаней с человека, включая место проведения, гриль для барбекю, уголь и посуду.Действительно, если бы не дети, которые любят играть в воде, я бы больше никогда не приехал. Проснувшись утром, официант преподнес мне еще один сюрприз! Внезапно я отправил несколько фотографий на свой WeChat. Там были фотографии грязных циновок, фотографии столов, которые были немного обожжены, и окурки размером с обожженное место. Тогда я послал очень жесткий приговор в финансы и проверить стоимость компенсации. Я был немного смущен. Я сказал да. Через некоторое время я прислал мне скриншот. Содержимое скриншота — цена стола.Я взглянул. Это было 2400 юаней. Молодец, это кража денег? Я сказал, это потому, что ты хочешь, чтобы я потерял весь стол из-за этой мелочи? Затем он прислал мне плату за чистку коврика в размере 50 юаней, которую я могу принять. Я привел ребенка, а ребенок неизбежно испачкается при игре, и тогда стол не нужно полностью компенсировать, а плата за ремонт 400 юаней. Не знаю, дал ли он мне скриншот. Какова цена стола? Не могли бы вы показать, насколько дорогой стол в вашем магазине? Или я хотел компенсировать всю таблицу с самого начала.Если он сломается, его следует компенсировать. Я сказала мужу, где мой муж сказал про стол? Номер? Я сказал нет. У бассейна мой муж был удивлен. Он сказал, что вещи в общественном месте — это то, что мы сделали. Также возможно, что так оно и было изначально, и никто не обратил бы внимания на то, каким оно было раньше. Тогда я сказал, что вещи в общественном месте, как вы можете быть уверены, что это сделал я? Я могу компенсировать деньги, но вы должны дать мне объяснение. . . На самом деле, в начале, если официант говорит мне хорошо, я думаю, что мое настроение в будущем будет другим.Мои требования действительно не высоки, я просто хочу иметь лучшее отношение. Я забронировал три комнаты более чем за 5000 юаней и привел нескольких детей поиграть. Я пришел потреблять, я пришел наслаждаться, Я не для того, чтобы видеть твое лицо или злиться! Хороший настрой может решить многие проблемы! У такого хорошего проживания в семье нет соответствующих услуг. Если это будет управляться таким образом, кто посмеет прийти? Советую друзьям, которые приедут, вы абсолютно довольны визуальным наслаждением, что касается сервиса, вы можете испытать его на себе! !

Глобальный отчет об исследовании рынка ресепшн с информацией о возможностях и стратегиях по ускорению роста – воздействие COVID-19 и восстановление

Основываясь на состоянии развития рынка Ресепшн, конкурентной среде и модели развития в различных регионах мира, этот отчет посвящен предоставлению нишевых рынков, потенциальных рисков и всестороннего анализа конкурентной стратегии в различных областях.Подробно анализируются конкурентные преимущества различных типов продуктов и услуг, возможности развития и потребительские характеристики, а также анализ структуры последующих областей применения. Чтобы ускорить рост в эпоху эпидемии, в этом отчете подробно анализируются потенциальные риски и возможности, на которых можно сосредоточиться.

В главе 2.4 отчета мы делимся нашими взглядами на влияние COVID-19 в долгосрочной и краткосрочной перспективе.

В главе 3.4, мы обеспечиваем влияние кризиса на отраслевую цепочку, особенно на каналы сбыта.

В главах 8-13 мы обновляем своевременный план экономического возрождения отрасли правительства страны.

Ключевые игроки на мировом рынке стойки регистрации, описанные в главе 5:

Звезда красоты
АКТИУ
Атмосфера салона
БОНВИНИ
Квадрифольо
Стилофис
БРАЛКО
Мариани
Сацея
САССИ
плексвуд
УСМ
Мдд
ЭСТЕЛЬ
ГДБ
ККР
Матфор
СОДЕМ

В главе 6 на основе типов рынок Ресепшн с 2015 по 2025 год в основном делится на:

Стекло
Металл
Дерево
Другие

В Главе 7 на основе заявок рынок ресепшн с 2015 по 2025 год охватывает:

Офис
Магазины
Другие

Географически подробный анализ потребления, доходов, доли рынка и темпов роста, исторический и прогноз (2015-2025) следующих регионов рассмотрен в главе 8-13:

Северная Америка (рассматривается в главе 9)

США

Канада

Мексика

Европа (рассматривается в главе 10)

Германия

Великобритания

Франция

Италия

Испания

Россия

Другие

Азиатско-Тихоокеанский регион (рассматривается в главе 11)

Китай

Япония

Южная Корея

Австралия

Индия

Южная Америка (рассматривается в главе 12)

Бразилия

Аргентина

Колумбия

Ближний Восток и Африка (рассматривается в главе 13)

ОАЭ

Египет

Южная Африка

лет, учтенных для этого отчета:

Исторические годы: 2015-2019

Базовый год: 2019

Расчетный год: 2020

Прогнозный период: 2020-2025

Содержание

1 Обзор рынка

1.1 Определение продукта и характеристики рынка

1.2 Размер мирового рынка Стойки регистрации

1.3 Сегментация рынка

1.4 Глобальный макроэкономический анализ

1.5 SWOT-анализ

2. Динамика рынка

2.1 Рыночные факторы

2.2 Рыночные ограничения и проблемы

2.3 Тенденции развивающихся рынков

2.4 Воздействие COVID-19

2.4.1 Кратковременное воздействие

2.4.2 Долгосрочное воздействие

3 Ассоциированная отраслевая оценка

3.1 Анализ цепочки поставок

3.2 Активные участники отрасли

3.2.1 Поставщики сырья

3.2.2 Основные дистрибьюторы/розничные продавцы

3.3 Альтернативный анализ

3.4 Влияние Covid-19 с точки зрения отраслевой цепочки

4 Конкурентная среда на рынке

4.1 Ведущие игроки отрасли

4.2 Новости отрасли

4.2.1 Новости о запуске ключевых продуктов

4.2.2 Слияния и поглощения и планы расширения

5 Анализ ведущих компаний

5.1 звезда красоты
5.1.1 Профиль компании Beauty star
5.1.2 Бизнес-обзор Beauty star
5.1.3 Продажи стоек регистрации Beauty star, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.1.4 Стойки регистрации Beauty star Введение продуктов
5.2 АКТИВ
5.2.1 Профиль компании ACTIU
5.2.2 Бизнес-обзор ACTIU
5.2.3 Продажи касс ACTIU, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.2.4 Стойки регистрации ACTIU Знакомство с продуктами
5.3 Салонная атмосфера
5.3.1 Салонная атмосфера Профиль компании
5.3.2 Бизнес-обзор салона
5.3.3 Салонная атмосфера Стойки регистрации Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.3.4 Стойки регистрации салона Введение продуктов
5.4 БОНВИНИ
5.4.1 Профиль компании БОНВИНИ
5.4.2 Бизнес-обзор BONVINI
5.4.3 Ресепшн BONVINI Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.4.4 Стойки регистрации BONVINI Знакомство с продуктами
5.5 квадрифольо
5.5.1 Профиль компании Quadrifoglio
5.5.2 Бизнес-обзор Quadrifoglio
5.5.3 Стойки регистрации Quadrifoglio Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.5.4 Стойки регистрации Quadrifoglio Знакомство с продуктами
5.6 Стилофис
5.6.1 Профиль компании Styloffice
5.6.2 Бизнес-обзор Styloffice
5.6.3 Продажи стоек регистрации Styloffice, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.6.4 Стойки регистрации Styloffice Введение продуктов
5.7 БРАЛКО
5.7.1 Профиль компании BRALCO
5.7.2 Бизнес-обзор BRALCO
5.7.3 Продажи стоек регистрации BRALCO, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.7.4 Стойки регистрации BRALCO Знакомство с продуктами
5.8 Мариани
5.8.1 Профиль компании Мариани
5.8.2 Бизнес-обзор Мариани
5.8.3 Продажи стойки регистрации Мариани, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020 гг.)
5.8.4 Стойки регистрации Mariani Введение продуктов
5.9 Сацея
5.9.1 Профиль компании Sacea
5.9.2 Бизнес-обзор Sacea
5.9.3 Стойки регистрации Sacea Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.9.4 Стойки регистрации Sacea Введение продуктов
5.10 САССИ
5.10.1 Профиль компании SASSI
5.10.2 Бизнес-обзор SASSI
5.10.3 Стойки регистрации SASSI Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.10.4 Стойки регистрации SASSI Знакомство с продуктами
5.11 плексвуд
5.11.1 Профиль компании Plexwood
5.11.2 Бизнес-обзор Plexwood
5.11.3 Ресепшн Plexwood Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.11.4 Стойки регистрации Plexwood Введение продуктов
5,12 УСМ
5.12.1 Профиль компании USM
5.12.2 Бизнес-обзор USM
5.12.3 Продажи стоек регистрации USM, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.12.4 Стойки регистрации USM Знакомство с продуктами
5.13 Мдд
5.13.1 Профиль компании Mdd
5.13.2 Бизнес-обзор Mdd
5.13.3 Mdd стойки регистрации Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.13.4 Стойки регистрации Mdd Введение продуктов
5.14 ЭСТЕЛЬ
5.14.1 Профиль компании ESTEL
5.14.2 Бизнес-обзор ESTEL
5.14.3 Ресепшн ESTEL Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.14.4 Стойки регистрации ESTEL Знакомство с продуктами
5.15 ГДБ
5.15.1 Профиль компании GDB
5.15.2 Бизнес-обзор GDB
5.15.3 Продажи стоек регистрации GDB, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.15.4 Стойки регистрации GDB Введение в продукты
5.16 ККР
5.16.1 Профиль компании KKR
5.16.2 Бизнес-обзор KKR
5.16.3 Ресепшн KKR Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.16.4 Стойки регистрации KKR Знакомство с продуктами
5.17 Матфор
5.17.1 Профиль компании Matfor
5.17.2 Бизнес-обзор Matfor
5.17.3 Продажи стойки регистрации Matfor, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020 гг.)
5.17.4 Стойки регистрации Matfor Введение продуктов
5.18 СОДЕМ
5.18.1 Профиль компании SODEM
5.18.2 Бизнес-обзор SODEM
5.18.3 Стойки регистрации SODEM Продажи, выручка, средняя цена продажи и валовая прибыль (2015-2020)
5.18.4 Стойки регистрации SODEM Знакомство с продуктами

6 Анализ рынка и прогноз по видам продукции

6.1 Глобальные продажи, выручка и доля рынка стойки регистрации по типам (2015–2020 гг.)

6.1.1 Глобальные продажи Стойки регистрации и доля рынка по типам (2015-2020 гг.)

6.1.2 Глобальный доход и доля рынка ресепшн по типам (2015-2020)

6.1.3 Глобальная цена на стойки регистрации по типам (2015-2020 гг.)

6.2 Прогноз мирового рынка Ресепшн по типам (2020-2025)

6.2.1 Прогноз продаж на мировом рынке Стойки регистрации и доля рынка по типам (2020-2025)

6.2.2 Прогноз доходов и доли рынка на мировом рынке Ресепшн по типам (2020-2025)

6.3 Глобальные продажи Стойки регистрации, цены и темпы роста по типам (2015-2020 гг.)

6.3.1 Глобальные продажи Стойки регистрации, цена и темпы роста стекла
6.3.2 Глобальные продажи Стойки регистрации, цена и темпы роста металла
6.3.3 Глобальные продажи Стойки регистрации, цены и темпы роста древесины
6.3.4 Глобальные продажи Стойки регистрации, цены и темпы роста других
6.4 Прогноз доходов и продаж на мировом рынке Стойки регистрации по типам (2020-2025)

6.4.1 Прогноз доходов и продаж рынка стекла (2020-2025)
6.4.2 Прогноз доходов и продаж рынка металлов (2020-2025 гг.)
6.4.3 Прогноз доходов и продаж на рынке древесины (2020-2025 гг.)
6.4.4 Прогноз выручки и продаж на рынке других товаров (2020-2025 гг.)

7 Анализ рынка и прогноз по приложениям

7.1 Глобальные продажи, выручка и доля рынка Ресепшн по приложениям (2015-2020)

7.1.1 Глобальные продажи Стойки регистрации и доля рынка по приложениям (2015-2020 гг.)

7.1.2 Глобальный доход Ресепшн и доля рынка по приложениям (2015-2020)

7.2 Прогноз мирового рынка Ресепшн по приложениям (2020-2025)

7.2.1 Прогноз продаж на мировом рынке Стойки регистрации и доля рынка по приложениям (2020-2025)

7.2.2 Прогноз доходов и доли рынка на мировом рынке Стойки регистрации по приложениям (2020-2025)

7.3 Глобальная выручка, продажи и темпы роста по приложениям (2015-2020 гг.)

7.3.1 Глобальная выручка от ресепшн, продажи и темпы роста офиса (2015-2020)
7.3.2 Глобальная выручка Стойки регистрации, продажи и темпы роста магазинов (2015-2020 гг.)
7.3.3 Глобальные стойки регистрации, выручка, продажи и темпы роста (2015-2020 гг.)
7.4 Прогноз выручки и продаж на мировом рынке Стойки регистрации по приложениям (2020-2025)

7.4.1 Прогноз доходов и продаж офисного рынка (2020-2025 гг.)
7.4.2 Прогноз выручки и продаж магазинов (2020-2025)
7.4.3 Прогноз выручки и продаж на рынке других товаров (2020-2025 гг.)

8 Анализ рынка и прогноз по регионам

8.1 Глобальные продажи ресепшн по регионам (2015-2020)

8.2 Глобальный доход рынка Ресепшн по регионам (2015-2020 гг.)

8.3 Прогноз мирового рынка Ресепшн по регионам (2020-2025)

9 Анализ рынка стойки регистрации в Северной Америке

9.1 Обзор рынка и анализ перспектив

9.2 Темпы продаж и роста рынка Стойки регистрации в Северной Америке (2015-2020 гг.)

9.3 Выручка и темпы роста рынка Стойки регистрации в Северной Америке (2015-2020 гг.)

9.4 Прогноз рынка ресепшн в Северной Америке

9.5 Влияние COVID-19 на рынок Северной Америки

9.6 Анализ рынка Ресепшн в Северной Америке по странам

9.6.1 Стойки регистрации в США Продажи и темпы роста

9.6.2 Стойки регистрации в Канаде Продажи и темпы роста

9.6.3 Мексика Ресепшн Продажи и темпы роста

10 Анализ рынка ресепшн в Европе

10.1 Обзор рынка и анализ перспектив

10.2 Объем продаж и темпы роста рынка ресепшн в Европе (2015-2020 гг.)

10.3 Выручка и темпы роста рынка Стойки регистрации в Европе (2015-2020 гг.)

10.4 Прогноз рынка ресепшн в Европе

10.5 Влияние COVID-19 на европейский рынок

10.6 Анализ рынка Ресепшн в Европе по странам

10.6.1 Стойки регистрации в Германии Продажи и темпы роста

10.6.2 Стойки регистрации в Соединенном Королевстве Продажи и темпы роста

10.6.3 Франция Стойки регистрации Продажи и темпы роста

10.6.4 Темпы продаж и роста Стойки регистрации в Италии

10.6.5 Стойки регистрации в Испании Продажи и темпы роста

10.6.6 Россия Стойки регистрации Продажи и темпы роста

11 Анализ рынка ресепшн в Азиатско-Тихоокеанском регионе

11.1 Обзор рынка и анализ перспектив

11.2 Темпы продаж и роста рынка Стойки регистрации в Азиатско-Тихоокеанском регионе (2015-2020 гг.)

11.3 Выручка и темпы роста рынка Стойки регистрации в Азиатско-Тихоокеанском регионе (2015-2020 гг.)

11.4 Прогноз рынка ресепшн в Азиатско-Тихоокеанском регионе

11.5 Влияние COVID-19 на рынок Азиатско-Тихоокеанского региона

11.6 Анализ рынка Стойки регистрации в Азиатско-Тихоокеанском регионе по странам

11.6.1 Стойки регистрации в Китае Продажи и темпы роста

11.6.2 Стойки регистрации в Японии Продажи и темпы роста

11.6.3 Стойки регистрации в Южной Корее Продажи и темпы роста

11.6.4 Австралия Ресепшн Продажи и темпы роста

11.6.5 Стойки регистрации в Индии Продажи и темпы роста

12 Анализ рынка ресепшн в Южной Америке

12.1 Обзор рынка и анализ перспектив

12.2 Темпы продаж и роста рынка Стойки регистрации в Южной Америке (2015-2020 гг.)

12.3 Выручка и темпы роста рынка Стойки регистрации в Южной Америке (2015-2020 гг.)

12.4 Прогноз рынка ресепшн в Южной Америке

12.5 Влияние COVID-19 на рынок Южной Америки

12.6 Анализ рынка Стойки регистрации в Южной Америке по странам

12.6.1 Стойки регистрации в Бразилии Продажи и темпы роста

12.6.2 Темпы продаж и роста Стойки регистрации в Аргентине

12.6.3 Продажи и темпы роста стойки регистрации в Колумбии

13 Анализ рынка ресепшн на Ближнем Востоке и в Африке

13.1 Обзор рынка и анализ перспектив

13.2 Темпы продаж и роста рынка Стойки регистрации на Ближнем Востоке и в Африке (2015-2020 гг.)

13.3 Выручка рынка Ближнего Востока и Африки и темпы роста (2015-2020 гг.)

13.4 Прогноз рынка ресепшн на Ближнем Востоке и в Африке

13.5 Влияние COVID-19 на рынок Ближнего Востока и Африки

13.6 Ближний Восток и Африка Стойки регистрации Анализ рынка по странам

13.6.1 Стойки регистрации в ОАЭ Продажи и темпы роста

13.6.2 Стойки регистрации в Египте Продажи и темпы роста

13.6.3 Стойки регистрации в Южной Африке Продажи и темпы роста

14 Выводы и рекомендации

14.1 Основные выводы и перспективы рынка

14.2 Консультации для инвесторов

15 Приложение

15.1 Методика

15.2 Источник данных исследований

GBRMPA — Master Reef Guides

Азри Сапарван – мастер-проводник по рифам | Морской биолог | Курорт Фицрой-Айленд | Тропический Северный Квинсленд (Когорта 3) (Отправление: Сингапур)

Мастер-проводник по рифам Азри начал свою карьеру в области биомедицинских наук, он хотел помогать больным и раненым. Более двух лет он был военным медиком вооруженных сил Сингапура. Он прошел через различные миссии по спасению и оказанию первой помощи по всему миру.Азри страдал посттравматическим стрессовым расстройством, пока опыт дайвинга не изменил его жизнь.

«Мы наткнулись на морскую черепаху, которая запуталась в сети, которую я смог освободить, это было хорошо, и я понял, что все еще хочу спасать жизни, но в естественном мире; морской мир».

Азри переехал в Аделаиду, Австралия, чтобы изучать морскую биологию, и именно здесь началось его путешествие. Азри начал волонтерскую программу, чтобы помочь лежбищу морских черепах в Индонезии.

Выросший в Индонезии, он стал свидетелем того, что в Индонезии по-прежнему высок уровень браконьерства морских черепах, а рейнджеры перегружены работой и недоплачивают.Поэтому, используя свои возможности, он создал волонтерскую программу, чтобы привлечь добровольцев для помощи в центре. Азри работал волонтером в Нгарлоо, Малайзия, и в нескольких других местах гнездования морских черепах, делясь своими знаниями и страстью к морским черепахам.


Сегодня Азри работает охранником на курорте Фицрой-Айленд. В его обязанности входит управление рифами острова и проведение образовательных туров для гостей. Он также поддерживает благополучие морских черепах, обращающихся за лечением в Центр реабилитации черепах Кэрнса, и проводит образовательные туры для повышения осведомленности об угрозах для морских черепах.

Азри по-прежнему привержен сохранению и общественной науке, в том числе в качестве координатора волонтеров Фонда восстановления рифов, который выращивает и выращивает фрагменты кораллов в питомнике и пересаживает обратно на риф на острове Фицрой.

«Для меня большая честь быть главным гидом по рифам, потому что это дает мне больше возможностей для достижения моих целей. У меня есть сила знаний, чтобы привлечь внимание к сохранению этих легендарных чудес. Морская черепаха полностью изменила мою жизнь, и я делаю все возможное, чтобы спасти их».

ТОП-4 крупнейших покупателя морозильных ларей на 🇲🇻 Мальдивах

Показать все Трейдинг Производство

Товарный морозильный ларь оптом

Торгово-скупочная компания

Вы хотите найти новых клиентов, покупающих морозильные лари оптом

  1. Эко Кул Пвт Лтд.

    Морозильные лари (глубокие), охладители воды и диспенсеры для бутилированной воды — морозильные лари chf 100c

  2. Мужской газированной воды Co.пвт.лтд.

    Морозильный ларь chf 500 hg

  3. Gamma Island Food Pvt Ltd.

    Морозильный ларь, модель № cf-700

  4. Канифуши Инвестмент Пвт Лтд.

    Предметы домашнего обихода — морозильный ларь voltas 500 л

Елена Еременко
менеджер по логистике в ЕС, Азию

логистика, сертификат
электронная почта: [email protected]

Крупнейшие производители и экспортеры морозильных ларей

Компания (размер) Продукт Страна
1.🇨🇳 Ningbo Hicon International Industry (9) МОРОЗИЛЬНЫЙ ЛАТР ЛЬДОПРОИЗВОДИТЕЛЬ Китай
2. 🇨🇱 Guangzhou Wanbao Group Холодильник (9) МОРОЗИЛЬНЫЙ ЛАРЬ AVANTI БРЕНД МОРОЗИЛЬНЫЙ НОМЕР МОДЕЛИ. CF M W ШТ. МОД ЭЛ. CF M S PCS СОГЛАСНО ФЛ. REL ШТ. ЗАПАСНЫЕ ЧАСТИ ДЛЯ CF M S КОРОБКИ ШТ. ЗАПАСНЫЕ ЧАСТИ ДЛЯ CF M W КАРТОННЫЕ КОРОБКИ МОРОЗИЛЬНЫЙ ЛАРЬ МАРКИ AVANTI M Чили
3. 🇨🇳 Guangzhou Wanbao Group Minquan (8) МОРОЗИЛЬНЫЙ ЛАТР Китай
4.🇨🇳 Hefei Hualing Co., Ltd. (7) МОРОЗИЛЬНЫЙ ЛАТР Китай
5. 🇲🇼 Mol Consolidation Service Ltd. (7) Морозильный ларь Cuft Морозильный ларь T, T Аньхой, Китай Кеннет Якобсен, Джессика Списс Электронная почта Кеннета. Якобсен Экспедиторс. Ком Электронная почта Джессика. SpiessExpeditors. Морозильный ларь Com Cuft Cuft Ch Малави

МОРОЗИЛЬНЫЙ ЛОРД оптовая цена на Мальдивах

— 10.000 кг 90-100 кг 90-100 кг Витрина 90-100 кг
Продукт Морозильник на груди Цена на кг, MT вес
Домохозяйственная морозильная камера типа «Грудь» $ 5 / кг 10-100 кг
Домохозяйки камера сжатия $4.4 на KG 100 — 1.000 кг — 1.000 кг
Морозильники $ 4,9 / кг 1.000 — 10.000 кг
Горизонтальная морозильная камера Тип $ 6.6 / кг 10-100 кг
Магазинное оборудование : Freezers $ 6.1 за кг 100 — 1.000 кг
$ 6.6 / кг $ 6.6 / кг $ 6.6 / кг
Домохозяйственные морозильные морозильники.7 / кг 10-100 кг
Бытовые электрические морозильники на груди Однокамерные заполненные с хладагентом R-600A (избутан $ 4,6 — 1.000 кг 100 — 1.000 кг
Домохозяйка для бытовых электростанций Сжатие $ 4.3 / кг $ 4.3 / кг 1.000 — 10.000 кг
Тип морозильника «Сундук» $ 6.7 / кг 10-100 кг
Тип морозильника «Сундук» $ 6.7 за кг 100 — 1000 кг
Морозильные камеры Тип «сундук» 6,1 $/кг 1000 — 10000 кг
$ 3.1 / KG 10-100 кг
Низкотемпературный охлажденные Лари дисплеи для хранения замороженной пищи в торговле и общественной пище $ 5,9 за кг 100 — 1.000 кг
Тип морозильника » Для хранения ранее замороженных продуктов питания $6.2 / кг 1.000 — 10.000 кг

Морозильный ларь Склад

Обзор этой статьи:

Лицо: Марина Рудакова 24 февраля 2022 г.
Образование: Wageningen University & Research, Нидерланды

© Copyright 2016 — 2022 «Экспорт из России». Все права защищены. Сайт не является публичной офертой. Вся информация на сайте носит ознакомительный характер. Все тексты, изображения и товарные знаки на этом веб-сайте являются интеллектуальной собственностью их соответствующих владельцев.Мы не являемся дистрибьютором бренда или компаний, представленных на сайте, Политика конфиденциальности

Аминотерминальный домен Src Homology 2 фосфолипазы Cγ1 необходим для TCR-индуцированного фосфорилирования тирозина фосфолипазы Cγ1

Abstract

Вовлечение

TCR активирует фосфолипазу Cγ1 (PLCγ1) через механизм, зависящий от фосфорилирования тирозина. PLCγ1 содержит пару доменов Src homology 2 (Sh3), функция которых заключается в стимулировании белковых взаимодействий путем связывания фосфорилированного тирозина и соседних аминокислот.Роль Sh3-доменов PLCγ1 в фосфорилировании PLCγ1 исследовали с помощью мутационного анализа меченого эпитопом белка, временно экспрессируемого в Т-клетках Jurkat. Мутация амино-концевого домена Sh3 (домен Sh3(N)) приводила к дефектному тирозиновому фосфорилированию PLCγ1 в ответ на возмущение TCR/CD3. Кроме того, мутантный домен PLCγ1 Sh3(N) не смог ассоциироваться с Grb2 и фосфопротеином 36–38 кДа (p36–38), который, как ранее было установлено, взаимодействует с PLCγ1, Grb2 и другими молекулами, участвующими в сигнале TCR. трансдукция.Напротив, мутация карбоксиконцевого домена Sh3 (домен Sh3(C)) не влияла на индуцированное TCR тирозиновое фосфорилирование PLCγ1. Кроме того, связывание p36–38 с PLCγ1 не отменялось мутациями домена Sh3(C). В отличие от лигирования TCR/CD3, обработка клеток перванадатом индуцировала фосфорилирование тирозина мутантов домена PLCγ1 Sh3(N) или Sh3(C) до уровня, сравнимого с уровнем белка дикого типа, что указывает на то, что обработка перванадатом индуцирует альтернативное механизм фосфорилирования PLCγ1.Эти данные указывают на то, что домен Sh3(N) необходим для TCR-индуцированного фосфорилирования PLCγ1, предположительно за счет участия в образовании комплекса, который способствует ассоциации PLCγ1 с тирозинкиназой.

Фосфолипаза Cγ1 (PLCγ1), 4 , член семейства фосфоинозитид-специфических фосфолипаз C, катализирует гидролиз фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата до вторичных мессенджеров, инозитол-1,4,5-трифосфата и 1,2-диацилглицерола. (1, 2). Инозитол-1,4,5-трифосфат инициирует внутриклеточную мобилизацию Са 2+ , а 1,2-диацилглицерол активирует протеинкиназу С (2).Вместе эти мессенджеры координируют экспрессию клеточных ответов в нескольких различных биологических системах, в том числе во время активации Т-лимфоцитов (2). Тирозиновое фосфорилирование PLCγ1 необходимо для его активации (3, 4, 5, 6). Кроме того, фосфорилированный по тирозину PLCγ1 проявляет повышенную ферментативную активность in vitro (7) и может использовать связанный с профилином фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат в качестве субстрата (8).

PLCγ1 содержит пару доменов гомологии Src 2 (Sh3) (9, 10). Домены Sh3 представляют собой структурно и функционально консервативные белковые модули, которые способствуют взаимодействию белков путем связывания фосфорилированного тирозина и соседних аминокислот (11, 12, 13).Формальных доказательств роли Sh3-доменов PLCγ1 в активации PLCγ1 получено не было. Однако косвенные экспериментальные данные свидетельствуют о механизме активации PLCγ1 тирозинкиназными рецепторами фактора роста, который включает рекрутирование PLCγ1, цитоплазматического белка, на мембрану посредством связывания его доменов Sh3 с аутофосфорилированными внутриклеточными хвостами рецептора. Эти доказательства включают связывание PLCγ1 или его доменов Sh3 со специфическими сайтами фосфорилирования рецептора тромбоцитарного фактора роста (14, 15), рецептора эпидермального фактора роста (16, 17, 18) или рецептора фактора роста фибробластов (14, 15). 19).Кроме того, PLCγ1 не может связываться ни с рецептором тромбоцитарного фактора роста, ни с рецептором эпидермального фактора роста с мутациями в остатках тирозина, критических для взаимодействия с доменом Sh3 (15, 20).

Участие Ag или опосредованное Ab нарушение комплекса TCR/CD3 индуцирует фосфорилирование тирозина PLCγ1 в Т-лимфоцитах (21, 22). Индукция активности тирозинкиназы предшествует активации PLCγ1 (23), а ингибиторы тирозинкиназы блокируют индуцированный TCR/CD3 гидролиз инозитолфосфолипида и мобилизацию Ca 2+ (24).Хотя ни один из компонентов комплекса TCR/CD3 сам по себе не обладает ферментативной активностью, возмущение комплекса TCR/CD3 индуцирует активацию тирозинкиназ семейства Src, Fyn и Lck, и специфичной для Т-клеток киназы ZAP-70 (22). PLCγ1 обнаружен в комплексах с цепями CD3 (25), киназами семейства Src (26, 27) и ZAP-70 (28). Ассоциация PLCγ1 с этими белками может быть либо прямой, либо опосредованной адапторными белками, которые лишены ферментативной активности, но опосредуют связывание сигнальных белков.Было показано, что PLCγ1 взаимодействует с фосфорилированным адаптером массой 62 кДа, который также был обнаружен в ассоциации с белком, активирующим Ras GTPase (29). PLCγ1 также может взаимодействовать с p76 Slp (30) и с еще не идентифицированным тирозин-фосфорилированным белком с молекулярной массой от 36 до 38 кДа (p36–38) (31). Комплекс PLCγ1, p36–38 и Grb2, другого адаптера, также наблюдался в активированных Т-клетках (28, 31, 32, 33, 34), что указывает на потенциальную роль Grb2 в регуляции PLCγ1, в дополнение к его хорошей задокументирована функция активации Ras (35).Несмотря на доказательства взаимодействия PLCγ1 с многочисленными сигнальными белками, понимание механизма, с помощью которого PLCγ1 фосфорилируется и активируется после вовлечения TCR, все еще отсутствует.

Взаимодействие доменов Sh3 PLCγ1 с тирозин-фосфорилированными белками, вероятно, играет важную роль в сборке начального комплекса, который приводит к фосфорилированию и активации PLCγ1. Чтобы охарактеризовать структурные требования для активации PLCγ1 в Т-лимфоцитах, мы провели мутационный анализ доменов Sh3 в меченном эпитопом белке PLCγ1, временно экспрессированном в клетках Jurkat.В качестве первого шага мы изучили роль доменов Sh3 в фосфорилировании тирозина PLCγ1, индуцированном возмущением TCR/CD3.

Материалы и методы

Антитела

Анти-CD3 mAb (Ab), OKT3, было подарком от Ortho Biotech (Raritan, NJ). F(ab’) 2 фрагмента OKT3 получали с использованием иммобилизованного пепсина (Pierce, Rockford, IL) с последующей колоночной хроматографией с белком А (Pierce). Антигемагглютининовое (НА) mAb, 12CA5, было получено от Boehringer Manneheim (Индианаполис, Индиана).Антифосфотирозиновое антитело 4G10 было получено от Upstate Biotechnology (Лейк-Плэсид, Нью-Йорк). Козье аффинно-очищенное антитело к мышиному IgG F(ab’) 2 было получено от Cappel (West Chester, PA).

Плазмиды

кДНК Bovine PLCγ1 была получена от доктора Джона Кнопфа (Институт генетики, Кембридж, Массачусетс). кДНК вырезали из вектора pTM-2 и клонировали в сайт Xba I pBluescript II-SK (pBluSK, Stratagene, La Jolla, CA) для получения pBluSK-PLCγ1, а также в сайт Xba I. вектора экспрессии pCIneo (Promega, Madison, WI) для получения pCIneo-PLCγ1.Последовательность, кодирующую три повтора эпитопа НА, Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala, добавляли на 3′-конце с помощью ПЦР для получения pCineo-PLCγ1-HA. Мутации аргинина в положении 586 на лизин (R586K) в домене Sh3(N) или аргинина в положении 696 и/или 694 на лизин в домене Sh3(C) (R694/6K и R694K соответственно) вводили с помощью ПЦР. с использованием pBluSK-PLCγ1 в качестве матрицы для получения pBluSK-PLCγ1[Sh3(N) R586K ], pBluSK-PLCγ1[Sh3(C) R694K ], pBluSK-PLCγ1[Sh3(C) R694/6K ], и pBluSK-PLCγ1[Sh3(N/C) R586/94/6K ].Фрагмент Sac II/ Eco RV, содержащий мутации, клонировали в pCIneo-PLCγ1-HA с получением соответствующих мутированных конструкций pCIneo-PLCγ1-HA. Точность ПЦР-амплифицированных фрагментов подтверждали секвенированием ДНК.

Слитые белки

Прокариотический вектор, кодирующий слитый белок глутатион S -трансферазы (GST), GST-Grb2, был подарен доктором П. Г. Пеличчи (EOI, Милан, Италия) (36). GST-Sh3(N) PLCγ1 был приобретен у Santa Cruz Biotechnology (Санта-Крус, Калифорния).GST-Sh3(N) R586K и GST-Sh3(C) R694/6K PLCγ1 получали методом ПЦР с использованием pBluSK-PLCγ1[Sh3(N) R586K ] и pBluSK-PLCγ1[Sh3(C) R694/6K ], соответственно, в качестве матриц и клонированных в pGEX-4T3 (Pharmacia Biotech, Piscataway, N). Слитые белки получали из лизированных бактерий и очищали на гранулах глутатион-сефарозы (Pharmacia Biotech) в соответствии с инструкциями производителя.

Протоколы транзиторной трансфекции и активации клеток

Т-клеток Jurkat поддерживали в среде RPMI 1640 с 7.5% ФБС. Трансфекцию проводили путем электропорации (емкость 960 мкФ и 250 В) 10 7 клеток (выращенных до логарифмической фазы) в 200 мкл среды, содержащей 20 мкг плазмидной ДНК (37). Трансфицированные клетки культивировали в концентрации 0,5×10 6 /мл в течение 48 часов. Перед экспериментальным использованием трансфицированные клетки обрабатывали 0,1 мг/мл ДНКазы (Sigma, Сент-Луис, Миссури) с последующим удалением нежизнеспособных клеток на градиентах фиколла.

В некоторых экспериментах клетки Jurkat трансфицировали указанными конструкциями PLCγ1-HA вместе с 2 мкг pGreen Lantern-1 (Life Technologies, Grand Island, NY), плазмидной ДНК, которая содержит мутированную форму гена, кодирующего зеленый флуоресцентный белок из Aequorea victoria (38).Трансфицированные клетки культивировали в течение 24 ч, обрабатывали ДНКазой, а затем обогащали для экспрессии интересующего гена путем флуоресцентно-активированной сортировки клеток, экспрессирующих зеленый флуоресцентный белок, на сортировщике клеток FACStar Plus , оснащенном аргоновым лазером при 4880°С. Å (Бектон Дикинсон, Маунтин-Вью, Калифорния). Отсортированные клетки культивировали в течение ночи перед экспериментальным использованием.

Для стимуляции 10 7 клеток покрывали 10 мкг OKT3 F(ab’) 2 в течение 15 мин на льду, промывали и активировали 25 мкг аффинно-очищенных козьих антител к мышиному IgG F(ab’) 2 на указанное время при 37°C.В качестве альтернативы клетки активировали перванадатом (0,1 мМ ортованадата натрия и 0,3 мМ перекиси водорода).

Осаждение и вестерн-блоттинг

Для анализа белка клетки лизировали в 60 мМ Tris-HCl, pH 7,8, содержащем 150 мМ NaCl, 5 мМ ЭДТА, 10% глицерина, 2 мМ Na 3 VO 4 , 25 мМ NaF, 10 мкг/мл. лейпептин (Sigma), 10 мкг/мл апротинин (Sigma), 1 мМ AEBSF (Sigma), 1 мМ N p -тозил-1-лизин хлорметилкетон (Sigma), 1 мМ N -p- тозил-1-фенилаланин, хлорметилкетон (Sigma) и 1% Triton X-100 (Calbiochem, La Jolla, CA).Очищенные лизаты осаждали либо специфическими антителами, предварительно связанными с трисакриловыми гранулами белка А (Pierce), либо слитыми белками GST (100–200 пмоль), связанными с гранулами глутатион-сефарозы (Pharmacia Biotech). Промытые осадки элюировали восстанавливающим буфером для образцов Лэммли, разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на нитроцеллюлозные мембраны (Hybond-C super, Amersham, Arlington Heights, IL). Белки определяли с помощью первичных антител со вторичными антителами или без них, а затем с помощью 125 I-белка А (ICN, Коста-Меса, Калифорния).По показаниям блоты повторно исследовали после отгонки при 60°C в течение 30 минут в 50 мМ фосфате натрия (рН 6,5), 10 М мочевине и 100 мМ 2-me. Иммуноблоты сканировали на PhosphorImager (Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA) и проводили денситометрию с помощью программного обеспечения ImageQuant (Molecular Dynamics) с использованием интегрирования объема с вычитанием фона (локальное среднее по периметру). Фотографические изображения блотов представляют собой компьютерные изображения, сгенерированные PhosphorImager, без каких-либо манипуляций, за исключением настройки диапазона экспозиции.

Результаты

Связывание слитых белков домена PLCγ1 GST-Sh3 с p36–38 и другими фосфопротеинами отменяется мутацией критических остатков аргинина

Мы начали наш анализ функции Sh3-доменов PLCγ1 с анализа белков, которые связывались с каждым изолированным Sh3-доменом, и оценки влияния мутаций критических остатков в связывающем кармане каждого домена. Это было достигнуто путем создания слитых белков GST, содержащих отдельные домены Sh3, и путем создания мутантов, в которых остаток аргинина в консервативном мотиве Phe-Leu-Val-Arg (13) любого домена (положение 586 домена Sh3(N) и 694 домена Sh3(C)) был мутирован в лизин.Было показано, что в домене v-Src Sh3 этот консервативный остаток образует ионную пару посредством водородной связи с фосфатом фосфорилированного тирозина (39). Особенностью Sh3(C)-домена PLCγ1 является наличие второго аргинина в положении 696. Этот остаток, не законсервированный в Sh3(N)-домене, может взаимодействовать как с фосфатным, так и с ароматическим кольцом фосфотирозина (40) . Из-за этой структурной особенности Arg 694 и Arg 696 потенциально могут компенсировать друг друга в связывании фосфорилированных белков.Поэтому для конструкции домена GST-Sh3(C) был сконструирован двойной мутант Arg 694 и Arg 696 .

Иммобилизованные слитые белки GST использовали для осаждения тирозин-фосфорилированных белков из контрольных (нестимулированных) или активированных клеток Jurkat. Никакие тирозин-фосфорилированные белки из контрольных клеток не связывались ни с одним из слитых белков (рис. 1⇓). Из активированных клеток единственным фосфопротеином, который можно было обнаружить связывающим слитый белок домена GST-Sh3(N), был p36–38, в то время как структура белков, связывающих домен GST-Sh3(C) GST-Sh3(C), наблюдаемая в клетках Jurkat, соответствовала с тем, что ранее сообщалось для гибридомы мышиных Т-клеток, трансфицированных активированным Lck (41).Гибридные белки GST-Sh3(N) R586K или GST-Sh3(C) R694/6K не смогли связать фосфорилированные белки из активированных клеток Jurkat, что подтверждает, что аминокислотные замены аннулировали способность связывания фосфотирозина PLCγ1 Sh3 домен.

ФИГУРА 1.

Мутанты домена GST-Sh3 PLCγ1 не способны связывать фосфорилированные по тирозину белки из активированных клеток Jurkat. Клетки Jurkat активировали в течение 2 мин при 37°C только средой или посредством Ab-опосредованной агрегации комплекса TCR/CD3 (CD3×CD3).Очищенные лизаты осаждали только GST, GST-Sh3(N), GST-Sh3(N) R586K , GST-Sh3(C) или GST-Sh3(C) R694/6K , иммобилизованными на гранулах глутатион-сефарозы. . Белки разделяли с помощью гель-электрофореза, блотировали и зондировали анти-фосфотирозином (анти-pTyr). ВБ, вестерн-блоттинг; GST-FP, слитый белок GST.

Функциональный домен Sh3(N), но не домен Sh3(C), необходим для индуцированного TCR/CD3 фосфорилирования тирозина PLCγ1

Для изучения роли доменов Sh3 в TCR-индуцированной активации PLCγ1, мутациях Arg 586 домена Sh3(N), а также Arg 694 или Arg 694 /Arg 696 Sh3 (C) домен лизина вводили в конструкцию PLCγ1, меченную HA, для создания мутантов, которые временно экспрессировались в клетках Jurkat.Затем мы установили уровни TCR-индуцированного фосфорилирования тирозина WT и мутантного PLCγ1. Кинетика фосфорилирования транзиентно экспрессированного PLCγ1-HA в ответ на лигирование TCR/CD3 близко соответствовала кинетике эндогенного PLCγ1 (данные не показаны), с максимумом, наблюдаемым через 2 мин, за которым следует спад, что указывает на то, что трансфицированные и эндогенные белки ведут себя сходным образом с в отношении немедленных событий фосфорилирования. Поэтому для последующих экспериментов был выбран 2-минутный момент времени.

По сравнению с белком дикого типа мутант Sh3(N) (PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA) продемонстрировал существенно сниженные уровни фосфорилирования тирозина (рис.2⇓). Уровень фосфорилирования мутанта домена Sh3(N) составлял 17 ± 12% SD от уровня белка WT ( p = 0,0012 по двустороннему сравнению t теста PLCγ1[Sh3(N) R586K ] -HA с WT PLCγ1-HA, с поправкой на множественные сравнения), как определено с помощью денситометрии ImageQuant сканов PhosphorImager вестерн-блотов анти-фосфотирозина из пяти независимых экспериментов, с поправкой на соответствующие уровни PLCγ1-HA в стрип-блотах, повторно зондированных анти-HA , и внутренне нормировано как процент TCR-индуцированного фосфорилирования WT PLCγ1-HA.Напротив, мутации Sh3(C)-домена практически не влияли на TCR/CD3-индуцированное фосфорилирование тирозина PLCγ1-HA (рис. 2⇓). Не наблюдалось различий в уровнях фосфорилирования между WT PLCγ1-HA и мутантами с одним доменом Arg 694 или двойным Arg 694 /Arg 696 Sh3(C) (PLCγ1[Sh3(C) R694K ]- HA и PLCγ1[Sh3(C) R694/6K ]-HA соответственно), эффективно исключая возможность того, что карбоксильный концевой Arg 696 домена Sh3(C) может компенсировать отсутствие эффекта, наблюдаемого при одиночный мутант Arg 694 .Конструкция PLCγ1 с мутациями доменов Sh3(N) и Sh3(C) (PLCγ1[Sh3(N/C) R586/694/6K ]-HA) показала сниженный уровень фосфорилирования в ответ на TCR/CD3. и вел себя неотличимо от мутанта Sh3(N), PLCγ1[Sh3(N) R586K ].

ФИГУРА 2.

Дефектное фосфорилирование тирозина мутанта PLCγ1[Sh3(N) R586K ] в ответ на лигирование комплекса TCR/CD3. Клетки Jurkat временно трансфицировали WT PLCγ1-HA, мутантным доменом Sh3(N) (PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA), мутантными доменами Sh3(C) (PLCγ1[Sh3(C) R694K ]-HA и PLCγ1[Sh3(C) R694/6K ]-HA), или мутант с двойными доменами Sh3(N) и Sh3(C) (PLCγ1[Sh3(N/C) R586/694/6K ]-HA).Трансфицированные клетки активировали в течение 2 мин при 37°С посредством Ат-опосредованной агрегации комплекса TCR/CD3 (CD3×CD3). Иммунопреципитаты анти-HA разделяли с помощью гель-электрофореза, блотировали и исследовали анти-фосфотирозином (анти-pTyr, , верхняя панель ). Блоты удаляли и повторно исследовали с помощью анти-HA для определения уровней PLCγ1-HA (, нижняя панель ), за исключением эксперимента 3, где на экспрессию PLCγ1-HA исследовали равные количества лизатов цельных клеток (WCL) из неактивированных клеток.Показаны результаты трех отдельных экспериментов, каждый из которых представляет минимум три выполненных эксперимента, за исключением эксперимента 3, который был повторен дважды. ИП, иммунопреципитация; ВБ, вестерн-блоттинг.

Дефектное фосфорилирование тирозина у мутанта PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA не было связано с отсроченным ответом, поскольку умеренный уровень фосфорилирования соответствовал уровню PLCγ1-HA дикого типа с течением времени, при этом максимум все еще наблюдался после 2 мин активации (рис. 3⇓).Временной ход TCR-индуцированного фосфорилирования PLCγ1[Sh3(C) R694/6K ]-HA также не отличался от такового для белка WT (данные не показаны), что указывает на то, что мутация Sh3(C) домена была не связано с изменением кинетики фосфорилирования PLCγ1.

РИСУНОК 3.

Динамика фосфорилирования тирозина WT и PLCγ1[Sh3(N) R586K ] в ответ на лигирование комплекса TCR/CD3. A , клетки Jurkat, временно трансфицированные WT PLCγ1-HA, мутантным доменом Sh3(N) (PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA), активировали в течение указанного времени при 37°C посредством Ab-опосредованной агрегации комплекс TCR/CD3 (CD3×CD3).Лизаты осаждали анти-HA, разделяли с помощью гель-электрофореза, блотировали и исследовали анти-фосфотирозином (анти-pTyr, , верхние панели ). Собранные блоты повторно исследовали с помощью анти-HA для определения уровней PLCγ1-HA (, нижние панели ). ИП, иммунопреципитация; ВБ, вестерн-блоттинг. Данные из независимых экспериментов, каждый из которых представляет два отдельных эксперимента. B , Количественный временной анализ анти-CD3-стимулированного фосфорилирования тирозина WT PLCγ1-HA мутантного домена Sh3(N) (PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA).Значения денситометрии из сканов PhosphorImager, показанные в A , были получены путем объемной интеграции с программным обеспечением ImageQuant. Данные нормализовали по уровням PLCγ1-HA в полосатых блотах, повторно обработанных анти-HA. Данные выражены в процентах от максимального фосфорилирования (WT PLCγ1-HA через 2 мин).

Тирозиновое фосфорилирование PLCγ1, индуцированное обработкой перванадатом, не требует функции доменов Sh3

Перванадат — это фармакологический агент, обычно используемый для обхода взаимодействия рецептор/лиганд, который индуцирует фосфорилирование и активацию PLCγ1 в Т-лимфоцитах (42).Поэтому было интересно определить, проявляет ли фосфорилирование PLCγ1, индуцированное обработкой перванадатом, структурные требования, аналогичные тем, которые показаны для лигирования TCR/CD3.

Уровень тирозинового фосфорилирования PLCγ1-HA дикого типа, индуцированного обработкой перванадатом, был примерно в два раза (203 ± 82% SD, n = 4) по сравнению с индуцированным лигированием TCR/CD3 (рис. 4⇓). В отличие от дефектных уровней фосфорилирования, наблюдаемых при возмущении TCR/CD3, обработка перванадатом индуцировала тот же уровень фосфорилирования мутанта домена Sh3(N) (184 ± 46% SD, n = 4), что и у белка WT.Подобно тому, что наблюдалось при стимуляции TCR, мутация консервативного Arg 694 или двойная мутация Arg 694 и Arg 696 домена Sh3(C) не приводила к существенным различиям в фосфорилировании тирозина PLCγ1, индуцированном лечение перванадатом. Интересно, что обработка перванадатом индуцировала фосфорилирование мутантных двойных доменов Sh3(N) и Sh3(C) (PLCγ1[Sh3(N/C) R586/694/6K ]-HA) до того же уровня, что и у белка дикого типа. (данные не показаны), что еще раз подтверждает, что функция обоих доменов Sh3 необязательна для фосфорилирования, индуцированного обработкой перванадатом.

РИСУНОК 4.

Обработка перванадатом индуцирует фосфорилирование тирозина мутантов домена PLCγ1 Sh3. Клетки Jurkat временно трансфицировали WT PLCγ1-HA, мутантным белком домена Sh3(N) (PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA) или мутантными белками домена Sh3(C) (PLCγ1[Sh3(C) R694K ]-HA или PLCγ1[Sh3(C) R694/6K ]-HA) и активировали в течение 2 мин Ab-опосредованной агрегацией комплекса TCR/CD3 (CD3×CD3) или обработкой перванадатом.Иммунопреципитаты анти-НА разделяли с помощью гель-электрофореза, блотировали и исследовали анти-фосфотирозином. Блоты удаляли и повторно исследовали с анти-HA для определения уровней PLCγ1-HA.

Функциональный домен Sh3(N) необходим для связывания p36–38 с PLCγ1

Чтобы лучше понять последовательность событий и взаимодействия, управляющие фосфорилированием PLCγ1 в ответ на участие TCR, мы сосредоточились на белках, которые связываются с PLCγ1 в ходе активации.Поскольку любой домен GST-Sh3 PLCγ1 распознает p36–38, мы исследовали ассоциацию этого фосфопротеина с временно трансфицированным белком WT или мутантами PLCγ1. p36–38 в значительной степени соосаждался с PLCγ1-HA дикого типа из активированных клеток, но не обнаруживался в преципитатах PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA (рис. 5⇓ A ). Интересно, что нормальные уровни p36–38 присутствовали у мутантов PLCγ1 Sh3(C), PLCγ1[Sh3(C) R694/6K ]-HA (рис. 5⇓ A ) или PLCγ1[Sh3(C) R694K ]-HA (данные не показаны), что указывает на то, что функция домена Sh3(C) не важна для связывания p36–38.

РИСУНОК 5.

Мутантный домен Sh3(N) PLCγ1 не может связывать p36–38 без нарушения фосфорилирования p36–38. A , клетки Jurkat временно трансфицировали пустым вектором pCIneo или вектором, содержащим либо WT PLCγ1-HA, мутантный белок домена Sh3(N) (PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA), либо Sh3 (C) мутантный домен (PLCγ1[Sh3(C) R694/6K ]-HA) и активированный в течение 2 мин при 37°C путем агрегации комплекса TCR/CD3 (CD3×CD3) или обработки перванадатом.Очищенные лизаты осаждали анти-HA, разделяли с помощью гель-электрофореза, блотировали и исследовали анти-фосфотирозином (анти-pTyr, , верхняя панель ). Блоты удаляли и повторно исследовали с анти-HA для оценки уровней PLCγ1-HA (, нижняя панель ). Данные были получены из одного эксперимента и являются репрезентативными для трех отдельных экспериментов. Данные взяты из того же геля, что и на рисунке 2⇑ (эксперимент 2) или на рисунке 4⇑ (эксперимент 2). ИП, иммунопреципитация; ВБ, вестерн-блоттинг. B , клетки Jurkat котрансфицировали либо WT PLCγ1-HA, либо мутантным доменом Sh3(N), PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA, вместе с плазмидой, кодирующей зеленый флуоресцентный белок из A. Виктория . Клетки, экспрессирующие зеленый флуоресцентный белок, отбирали путем сортировки клеток с активацией флуоресценции. Положительно отсортированные клетки активировали в течение 2 мин при 37°С посредством Ab-опосредованной агрегации комплекса TCR/CD3 (CD3×CD3). Очищенные лизаты осаждали с помощью GST-Grb2 (, верхняя панель, ) или анти-HA (, средняя панель, ), разделяли с помощью гель-электрофореза, блотировали и исследовали анти-фосфотирозином (pTyr).Фосфопротеины не осаждались только с GST (не показано на рисунке). Фракции тех же лизатов (целоклеточные лизаты (WCL)) непосредственно подвергали белковому электрофорезу, блоттингу и зондированию анти-HA для параллельной оценки уровней экспрессии (, нижняя панель ).

p36–38 отсутствовал в преципитатах PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA клеток, обработанных перванадатом, но нормальные уровни соосаждались с PLCγ1[Sh3(C) R694/6K ]-HA, подтверждая, что ассоциация p36-38 с PLCγ1 зависит исключительно от присутствия функционального домена Sh3(N).

Важный вопрос заключается в том, нарушает ли экспрессия мутантного домена PLCγ1 Sh3(N) в клетках Jurkat способность этих клеток активировать тирозинкиназы в ответ на лигирование CD3. Если бы это было так, то фосфорилирование p36-38 было бы в первую очередь нарушено, в то время как его дефектное связывание с мутантным доменом PLCγ1-HA Sh3(N) было бы косвенным результатом такого нарушения. Чтобы исключить эту возможность, была проанализирована степень фосфорилирования p36-38 в клетках, экспрессирующих PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA.Поскольку только часть временно трансфицированных клеток Jurkat экспрессирует интересующий ген (обычно от 15 до 20%, данные не показаны), вектор, экспрессирующий модифицированный зеленый флуоресцентный белок из A. victoria , котрансфицировали PLCγ1-HA, чтобы обеспечить отбор трансфицированной популяции путем флуоресцентно-активированной сортировки клеток (38). PLCγ1-HA экспрессировался исключительно в положительно отобранной клеточной популяции и полностью исключался из отрицательно отобранных клеток (данные не показаны).p36–38 осаждали из покоящихся или CD3-активированных положительно отсортированных клеток, используя их способность связывать GST-Grb2 (28) и зондируя анти-фосфотирозином. Степень фосфорилирования p36–38 не различалась между клетками, экспрессирующими WT или PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA (рис. 5⇑ B ), что исключает негативное влияние эктопической экспрессии PLCγ1. Мутантный домен Sh3(N) при CD3-индуцированной активации тирозинкиназы. Эти данные указывают на то, что первичным дефектом мутантного домена PLCγ1 Sh3(N) является его неспособность взаимодействовать с фосфорилированными p36–38.

Мутант PLCγ1 Sh3(N) не может связывать Grb2

Поскольку наши данные предполагают, что домен Sh3(N) PLCγ1 необходим для образования комплекса ранней активации, который включает p36–38, мы затем исследовали ассоциацию мутанта PLCγ1 домена Sh3(N) с адаптером Grb2. Хотя роль Grb2 в активации PLCγ1 неизвестна, соосаждение с PLCγ1 было продемонстрировано ранее (28, 31). Более того, взаимодействие PLCγ1 с Grb2 требует ассоциации обоих белков с p36-38 (28), что указывает на то, что p36-38 действует путем связывания двух белков вместе.Слитый белок GST-Grb2 использовали для осаждения PLCγ1 из лизатов клеток Jurkat, транзиторно трансфицированных WT PLCγ1-HA или мутантом Sh3(N), PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA. Активационно-зависимое увеличение GST-Grb2-связанного WT PLCγ1-HA наблюдалось в клетках, активированных посредством лигирования TCR/CD3 или обработки перванадатом (рис. 6⇓). Не происходило увеличения ассоциации GST-Grb2 с мутантным белком Sh3(N) при обработке клеток либо OKT3, либо перванадатом. Эти результаты демонстрируют, что домен Sh3(N) PLCγ1 необходим для ассоциации с Grb2.

РИСУНОК 6.

Мутантный домен Sh3(N) PLCγ1 не может связывать Grb2. Клетки Jurkat, трансфицированные WT PLCγ1-HA или мутантным доменом Sh3(N) (PLCγ1[Sh3(N) R586K ]-HA), активировали в течение 2 мин при 37°C посредством Ab-опосредованной агрегации TCR/ Комплекс CD3 (CD3×CD3) или обработка перванадатом. Очищенные лизаты осаждали с помощью GST-Grb2, разделяли с помощью гель-электрофореза, блотировали и исследовали с помощью анти-HA (, верхняя панель ). Целые клеточные лизаты (WCL) подвергали непосредственному электрофорезу белков, блоттингу и зондированию анти-HA для параллельной оценки уровней экспрессии (, нижняя панель ).Данные являются репрезентативными для трех отдельных экспериментов.

Обсуждение

Наши результаты показывают, что индуцированное TCR тирозиновое фосфорилирование PLCγ1 требует наличия функционального домена Sh3(N) PLCγ1. Напротив, обработка перванадатом индуцировала одинаковые уровни фосфорилирования мутантного домена Sh3(N) и белка WT, что свидетельствует о том, что этот фармакологический агент может обходить физиологические потребности для TCR-индуцированного фосфорилирования PLCγ1.

Структурное расположение доменов Sh3 в тандеме, как в случае PLCγ1, указывает на возможность скоординированного взаимодействия двух доменов с белками-мишенями.Напр., тандемные домены Sh3 киназы ZAP-70 взаимодействуют, одновременно взаимодействуя с одним и тем же фосфорилированным белком (43). Однако домены Sh3 PLCγ1 функционируют независимо друг от друга, поскольку домен Sh3(N) необходим и достаточен для фосфорилирования тирозина PLCγ1 в ответ на участие TCR/CD3, в то время как домен Sh3(C) не является критическим для этого раннего мероприятие.

Домен Sh3(N) может играть роль в формировании белкового комплекса, критического для активации PLCγ1. Идентичность белков, связанных с PLCγ1 в этом активационном комплексе, не установлена, хотя фосфопротеины, распознаваемые изолированными доменами Sh3 PLCγ1, представляют собой логических кандидатов.Поскольку функция домена Sh3(C) не требуется для фосфорилирования, маловероятно, что фосфопротеины, избирательно распознаваемые этим доменом, участвуют в TCR-индуцированном фосфорилировании PLCγ1. Роль p36-38, однако, подтверждается корреляцией, наблюдаемой между зависимым от домена Sh3(N) взаимодействием PLCγ1 с этим белком и тирозиновым фосфорилированием PLCγ1 в ответ на лигирование TCR/CD3.

Интересно, что в контексте всей молекулы PLCγ1 только домен Sh3(N) связывается с p36–38, в то время как изолированные домены GST-Sh3(N) и GST-Sh3(C) связывают этот фосфопротеин.Домены Sh3 PLCγ1 принадлежат к той же категории доменов, которые выбирают консенсусную последовательность, pTyr-гидрофобный- X -гидрофобный (где X в положении +2 представляет собой любую аминокислоту) (44, 45), подразумевая, что любой домен может потенциально связывать идентичные сайты. Домен Sh3(N), однако, предпочитает кислотный остаток в положении +2, в то время как домен Sh3(C) предпочитает гидрофобный остаток в том же положении (44). Это предпочтение может объяснить избирательность связывания p36-38 домена Sh3(N), наблюдаемую in vivo.Отличия от результатов, полученных in vitro со слитыми белками GST, можно объяснить тем, что искусственно завышенное стехиометрическое соотношение между рекомбинантными Sh3-доменами и целевыми фосфопротеинами, использованное в экспериментах с использованием слитых белков, может способствовать связыванию всех потенциальных мишеней, включая те, у кого сравнимое более низкое сродство. Скорее всего, это отражает относительную распространенность мишеней, а не истинную специфичность взаимодействия. Альтернативно, функция домена Sh3(C) во всем белке может регулироваться либо за счет вовлечения соседних доменов, либо за счет посттрансляционной модификации.

Наши данные подтверждают модель, согласно которой TCR-индуцированное фосфорилирование PLCγ1 происходит посредством взаимодействия Sh3(N) домена PLCγ1 с фосфорилированным p36–38, который действует как каркасный белок, ответственный за комплексообразование PLCγ1 с Grb2 и другими белками, возможно его тирозинкиназы. Предыдущие данные показали, что PLCγ1-ассоциированный p36–38 может быть истощен преципитацией анти-Grb2 (31), что согласуется с одновременным связыванием p36–38 с PLCγ1 и Grb2. Более того, p36–38 связывает домены GST-Sh3 либо Grb2, либо PLCγ1 (28).В отличие от этой модели Motto et al. (46) не смогли блокировать TCR-индуцированное фосфорилирование PLCγ1, когда p36–38 искусственно дефосфорилировали in vivo с помощью трансмембранного химерного белка, содержащего домен Grb2-Sh3 и каталитический домен фосфатазы CD45, хотя TCR-индуцированный гидролиз фосфоинозитида ингибировался. . Роль p36-38 в TCR-индуцированном фосфорилировании PLCγ1, однако, нельзя исключить на основании приведенных выше доказательств. Поскольку взаимодействие p36–38 с химерной фосфатазой зависит от того, что она сначала фосфорилируется, а затем рекрутируется химерным доменом Sh3, комплекс PLCγ1 с фосфорилированной p36–38 может образовываться в течение времени, достаточного для стимулирования фосфорилирования PLCγ1 даже в этих экспериментальных условиях. .Хотя все еще можно утверждать, что фосфопротеины, отличные от p36–38, могут участвовать в TCR-индуцированном фосфорилировании PLCγ1 посредством взаимодействия с его доменом Sh3(N), высокая степень селективности домена GST-Sh3(N) в отношении p36–38 противоречит этой гипотезе.

Роль, которую домен Sh3(N) может играть в активации PLCγ1, дополнительно подчеркивается недавним открытием, что проницаемый для клеток тирозин-фосфорилированный пептид с последовательностью, почти идентичной той, которая была выбрана доменом Sh3(N) PLCγ1, ингибирует основные фибробласты. индуцированный фактором роста гидролиз фосфоинозитида в культивируемых нейронах мозжечка (47).Однако тот же пептид не смог блокировать гидролиз фосфоинозитида, вызванный обработкой тромбоцитарным фактором роста (47), что свидетельствует о том, что домен Sh3(N) может быть необходим для связывания с некоторыми, но не со всеми рецепторами.

Хотя домен Sh3(C) необязателен для TCR-индуцированного фосфорилирования PLCγ1, нельзя исключить роль этого домена в событиях, отличных от тирозинового фосфорилирования PLCγ1. Такая роль может включать рекрутирование дополнительных белков, критических для ферментативной активации, или нацеливание фосфорилированного PLCγ1 на специфическую субклеточную локализацию.Альтернативно, домен Sh3(C) может функционировать для связывания PLCγ1 с рецепторами, отличными от TCR. Эти различные возможности в настоящее время изучаются.

Ни один из мутантов домена Sh3 PLCγ1, по-видимому, не обладает доминантно-негативной функцией, что определяется уровнями гидролиза фосфоинозитида в клетках, временно трансфицированных и отсортированных по экспрессии PLCγ1-HA (данные не показаны). Это открытие свидетельствует о том, что сверхэкспрессия мутантного домена Sh3 в клетках Jurkat не может эффективно конкурировать с эндогенным PLCγ1 за его способность взаимодействовать с субстратом или др. регуляторными белками.Это может быть связано с тем, что эндогенные уровни PLCγ1 достаточно высоки по сравнению с долей мутантного фермента, экспрессируемого эктопически, и/или с тем, что относительное количество эндогенных белков, связывающихся с доменом Sh3, превышает количество, удаляемое при временной трансфекции мутантного PLCγ1- ХА.

Наблюдение, что обработка перванадатом приводила к фосфорилированию тирозина мутанта Sh3(N) на уровнях, которые были идентичны уровням белка дикого типа, предполагает, что введенные мутации не мешали способности белка действовать в качестве субстрата для тирозина. киназы.Теоретически возможно, что обработка перванадатом индуцирует фосфорилирование PLCγ1 независимо от опосредованной доменом Sh3 ассоциации с другими белками и на сайтах, которые обычно не фосфорилируются в ответ на участие TCR/CD3. Поскольку обработка перванадатом активирует PLCγ1 и индуцирует продукцию инозитолфосфата и мобилизацию Ca 2+ в Т-лимфоцитах (42), вполне вероятно, что критические регуляторные сайты фосфорилированы. И наоборот, маловероятно, что обработка перванадатом устраняет дефект связывания мутантного домена PLCγ1 Sh3(N) за счет индукции фосфорилирования белков-мишеней на нефизиологических сайтах, поскольку мутанты домена GST-Sh3 полностью не способны связывать фосфопротеины из клеток Jurkat, обработанных перванадатом. (данные не показаны).Более того, мутантный домен PLCγ1 Sh3(N) не смог связать p36–38, даже когда оба белка были фосфорилированы в ответ на обработку перванадатом. Это наблюдение также подтверждает, что связывание p36-38 не является прямым следствием фосфорилирования PLCγ1.

Биохимический механизм действия перванадата включает ингибирование протеинтирозинфосфатаз вместе с активацией протеинтирозинкиназ, таких как Lck (48, 49). Фактически, лечение перванадатом, вероятно, активирует широкий спектр протеинтирозинкиназ, некоторые из которых потенциально могут играть роль связывания PLCγ1 с рецепторами, отличными от TCR.Эта гипотеза подразумевает, что фосфорилирование PLCγ1 в Т-клетках может быть индуцировано различными механизмами, которые отличаются своей потребностью в функции домена Sh3(N). То, что фосфорилирование тирозина PLCγ1 в Т-клетках может быть опосредовано различными механизмами, также подтверждается недавним наблюдением, что лигирование CD2 индуцирует фосфорилирование тирозина PLCγ1 на уровнях, сравнимых с уровнями, вызываемыми активацией TCR/CD3, хотя индуцируются только минимальные уровни фосфорилированного p36–38. возмущением CD2 (50).Дальнейшее очерчивание механизма индуцированного перванадатом фосфорилирования PLCγ1 и роли доменов Sh3 в CD2-индуцированном фосфорилировании PLCγ1 даст важную информацию о механизме регуляции PLCγ1 в Т-клетках. Наша демонстрация потребности в домене Sh3(N) в индуцированном TCR фосфорилировании PLCγ1 и его роли в связывании с потенциальным активационным комплексом является первым шагом к определению структурных требований для активации PLCγ1 в Т-лимфоцитах. Эти данные сформируют основу для будущего выяснения того, запускают ли разные рецепторы активацию PLCγ1 уникальными или разными способами действия.

Благодарности

Мы признаем Drs. Г. Джонсон, С. Козловски, А. Ларнер, Л. Миле, М. Шапиро и К. Штейн за полезные обсуждения и/или критический обзор рукописи. Признан экспертный технический вклад Х. Мостовски в проведение сортировки клеток с активацией флуоресценции. Мы выражаем признательность Фонду биотехнологических ресурсов (CBER) за синтез олигонуклеотидов.

Сноски

  • ↵1 Оба автора внесли одинаковый вклад в эту статью.

  • ↵2 Текущий адрес: Departamento de Bioquimica y Biologia Molecular y Cellular, Facultad de Ciencias, Universidad de Zaragoza, 50009 Zaragoza, Spain.

  • ↵3 Направлять корреспонденцию и запросы на перепечатку д-ру Эцио Бонвини, HFM-564, Центр оценки и исследований биологических препаратов, Кампус Национального института здравоохранения, здание 29B, комната 3NN10, 8800 Rockville Pike, Bethesda, MD 20892.

  • ↵4 Сокращения, используемые в данной статье: PLCγ1, фосфолипаза Cγ1; SH, гомология Src; HA, гемагглютинин гриппа; GST, глутатион S -трансфераза; WT, дикий тип.

  • Получено 3 июля 1997 г.
  • Принято 8 октября 1997 г.
  • Ри, С. Г., П. Г. Су, С. Х. Рю, С. Ю. Ли. 1989. Исследования инозитолфосфолипидспецифической фосфолипазы C. Science 244: 546

    .
  • Берридж, М.Дж., Р.Ф.Ирвин. 1989. Инозитолфосфаты и клеточная передача сигналов. Природа 341: 197

  • Нишибе, С., М. И. Валь, С. Г. Ри, Г. Карпентер. 1989. Тирозиновое фосфорилирование фосфолипазы C-II in vitro рецептором эпидермального фактора роста. Дж. Биол. хим. 264: 10335

  • Мейзенхельдер, Дж., П. Г. Сух, С. Г. Ри, Т. Хантер. 1989. Фосфолипаза С-гамма является субстратом для протеинтирозинкиназ рецепторов PDGF и EGF in vivo и in vitro.Сотовый 57: 1109

  • Ким, Х.К., Дж.В. Ким, А. Зильберштейн, Б. Марголис, Дж.Г. Ким, Дж. Шлезингер, С.Г. Ри. 1991. Стимулирование PDGF гидролиза инозитолфосфолипидов требует фосфорилирования PLC-gamma1 по остаткам тирозина 783 и 1254. Cell 65: 435

  • Мустелин Т., К. М. Коггесхолл, Н. Исаков, А. Альтман. 1990. Опосредованная Т-клеточным антигенным рецептором активация фосфолипазы С требует фосфорилирования тирозина.Наука 247: 1584

  • Уэл, М. И., Г. А. Джонс, С. Нишибе, С. Г. Ри, Г. Карпентер. 1992. Фактор роста, стимулирующий активность фосфолипазы С-гамма1: сравнительные свойства контрольных и активированных ферментов. Дж. Биол. хим. 267: 10447

  • Гольдшмидт-Клермон, П.Дж., Л.М. Мачески, Дж.Дж. Балдассаре, Т.Д. Поллард. 1990. Актин-связывающий белок профилин связывается с PIP2 и ингибирует его гидролиз фосфолипазой С.Наука 247: 1575

  • Су, П. Г., С. Х. Рю, К. Х. Мун, Х. В. Су, С. Г. Ри. 1988. Инозитолфосфолипидспецифическая фосфолипаза C: полные последовательности кДНК и белков и гомология последовательностей с онкогенными продуктами, связанными с тирозинкиназой. проц. Натл. акад. науч. США 85: 5419

  • Stahl, M.L., C.R. Ferenz, K.L. Kelleher, R.W. Kriz, J.L. Knopf. 1988. Сходство последовательности фосфолипазы С с некаталитической областью src.Природа 332: 269

  • Schlessinger, J. 1994. Сигнальные белки Sh3/Sh4. Курс. биол. 4: 25

  • Коэн, Г.Б., Р. Рен, Д. Балтимор. 1995. Молекулярно-связывающие домены в белках передачи сигналов. Сотовый 80: 237

  • Поусон, Т. 1995. Белковые модули и сигнальные сети. Природа 373: 573

  • Валюс, М., А. Казлаускас. 1993. Фосфолипаза C-γ1 и фосфатидилинозитол-3 киназа являются нижестоящими медиаторами митогенного сигнала рецептора PDGF. Сотовый 73: 321

  • Валюс М., К. Базенет, А. Казлаускас. 1993. Тирозины 1021 и 1009 представляют собой фосфорилированные сайты на карбокси-конце β-субъединицы рецептора тромбоцитарного фактора роста и необходимы для связывания фосфолипазы Cγ и белка массой 64 кДа соответственно. Мол. Клетка.биол. 13: 133

  • Ян, Л.Дж., С.Г. Ри, Дж.Р. Уильямсон. 1994. Эпидермальный фактор роста индуцировал активацию и транслокацию фосфолипазы C gamma1 в цитоскелет гепатоцитов крысы. Дж. Биол. хим. 269: 7156

  • Levitzki, A. 1994. Кинетика фосфорилирования Sh3-содержащего домена PLC gamma 1 рецептором эпидермального фактора роста. ФЭБС лат. 353: 155

  • Ротин Д., Б. Марголис, М. Мохаммади, Р. Дж. Дейли, Г. Даум, Н. Ли, Э. Х. Фишер, У. Х. Берджесс, А. Ульрих, Дж. Шлезингер. 1992. Домены Sh3 предотвращают дефосфорилирование тирозина рецептора EGF: идентификация Tyr992 как сайта связывания с высоким сродством для доменов Sh3 фосфолипазы С гамма. ЕМБО Дж. 11: 559

  • Мохаммади, М., А. М. Онеггер, Д. Ротин, Р. Фишер, Ф. Беллот, В. Ли, К. А. Дионн, М. Джей, М. Рубинштейн, Дж.Шлезингер. 1991. Фосфорилированный тирозином карбоксиконцевой пептид рецептора фактора роста фибробластов (Flg) представляет собой сайт связывания домена Sh3 фосфолипазы С гамма-1. Мол. Клетка. биол. 11: 5068

  • Вега, К. К., К. Коше, О. Филхол, К.-П. Чанг, С. Г. Ри, Г. Б. Гилл. 1992. Сайт фосфорилирования тирозина на С-конце рецептора эпидермального фактора роста необходим для активации фосфолипазы С. Mol.Клетка. биол. 12: 128

  • Парк, Д. Дж., Х. В. Ро, С. Г. Ри. 1991. Стимуляция CD3 вызывает фосфорилирование фосфолипазы С-гамма 1 по остаткам серина и тирозина в линии Т-клеток человека. проц. Натл. акад. науч. США 88: 5453

  • Вайс, А., Д. Р. Литтман. 1994. Передача сигнала антигенными рецепторами лимфоцитов. Сотовый 76: 263

  • июнь, с.H., MC Fletcher, JA Ledbetter, LE Samelson. 1990. Повышение фосфорилирования тирозина обнаруживается до активации фосфолипазы С после стимуляции Т-клеточного рецептора. Дж. Иммунол. 144: 1591

  • Джун, Ч. Х., М. К. Флетчер, Дж. А. Ледбеттер, Г. Л. Шивен, Дж. Н. Сигел, А. Ф. Филлипс, Л. Э. Самельсон. 1990. Ингибирование фосфорилирования тирозина предотвращает передачу сигнала, опосредованную Т-клеточным рецептором. проц. Натл.акад. науч. США 87: 7722

  • Дасгупта, Дж. Д., К. Гранджа, Б. Друкер, Л. Л. Лин, Э. Дж. Юнис, В. Релиас. 1992. Ассоциация фосфолипазы C-gamma1 со структурой CD3 в Т-клетках. Дж. Эксп. Мед. 175: 285

  • Наканиши О., Ф. Шибасаки, М. Хидака, Ю. Хомма, Т. Такенава. 1993. Фосфолипаза С-гамма 1 ассоциирована с вирусными и клеточными киназами src .Дж. Биол. хим. 268: 10754

  • Вебер, Дж. Р., Г. М. Белл, М. Ю. Хан, Т. Поусон, Дж. Б. Имбоден. 1992. Ассоциация тирозинкиназы LCK с фосфолипазой C-gamma1 после стимуляции Т-клеточного антигенного рецептора. Дж. Эксп. Мед. 176: 373

  • Нел, А. Э., С. Гупта, Л. Ли, Дж. А. Ледбеттер, С. Б. Каннер. 1995. Лигирование Т-клеточного антигенного рецептора (TCR) индуцирует ассоциацию hSos, Zap-70, фосфолипазы C-gamma1 и других фосфопротеинов с Grb2 и дзета-цепью TCR.Дж. Биол. хим. 270: 18428

  • Хьюберт П., П. Дебре, Л. Бумселл, Г. Висмут. 1993. Фосфорилирование тирозина и ассоциация фосфолипазы Cgamma-1 GAP-ассоциированного белка массой 62 кД после стимуляции CD2 Т-клеток Jurkat. Дж. Эксп. Мед. 178: 1587

  • Джекман, Дж. К., Д. Г. Мотто, К. Сан, М. Танемото, К. В. Терк, Г. А. Пельц, Г. А. Корецкий, П. Р. Финделл. 1995.Молекулярное клонирование SLP-76, тирозинового фосфопротеина массой 76 кДа, связанного с Grb2 в Т-клетках. Дж. Биол. хим. 270: 7029

  • Sieh, M., A. Batzer, J. Schlessinger, A. Weiss. 1994. GRB2 и фосфолипаза C-gamma1 связываются с белком фосфотирозином от 36 до 38 килодальтон после стимуляции Т-клеточного рецептора. Мол. Клетка. биол. 14: 4435

  • Будей, Л., С. Э. Иган, П. Родригес, Висиана, Д.А. Кантрелл, Дж. Даунворд. 1994. Комплекс адапторного белка Grb2, фактора обмена Sos и мембраносвязанного тирозинового фосфопротеина массой 36 кДа участвует в активации ras в Т-клетках. Дж. Биол. хим. 269: 9019

  • Хуанг, X., Ю. Ли, К. Танака, К. Г. Мур, Дж. И. Хаяши. 1995. Клонирование и характеристика Lnk, белка передачи сигнала, который связывает сигнал активации Т-клеточного рецептора с фосфолипазой C gamma1, Grb2 и фосфатидилинозитол-3-киназой.проц. Натл. акад. науч. США 92: 11618

  • Фуказава Т., К. А. Ридквист, Г. Панчамурти, С. Солтофф, Т. Труб, Б. Друкер, Л. Кэнтли, С. Э. Шоулсон, Х. Бэнд. 1995. Зависимая от активации Т-клеток ассоциация между субъединицей p85 фосфатидилинозитол-3-киназы и фосфотирозил-белком pp36/38, связывающим Grb2/фосфолипазу C-gamma1. Дж. Биол. хим. 270: 20177

  • Иган, С.Э., Б. В. Гиддингс, М. В. Брукс, Л. Будей, А. М. Сайзленд, Р. А. Вайнберг. 1993. Ассоциация обменного белка Sos Ras с Grb2 участвует в передаче и трансформации сигнала тирозинкиназы. Природа 363: 45

  • Састри Л., В. Лин, В. Т. Вонг, П. П. Ди Фиоре, К. А. Скоппа, К. Р. Кинг. 1995. Количественный анализ взаимодействия Grb2-Sos1: N-концевой домен Sh4 Grb2 опосредует аффинность. Онкоген 11: 1107

  • Десаи, Д.М., Дж. Сап, Дж. Шлезингер, А. Вайс. 1993. Лиганд-опосредованная негативная регуляция химерного трансмембранного рецептора тирозинфосфатазы. Сотовый 73: 541

  • Чалфи М., Ю. Ту, Г. Ойскирхен, В. В. Уорд, Д. К. Прашер. 1994. Зеленый флуоресцентный белок как маркер экспрессии генов. Наука 263: 802

  • Ваксман Г., Д. Коминос, С. К. Робертсон, Н. Пант, Д. Балтимор, Р.Б. Бирдж, Д. Коуберн, Х. Ханафуса, Б. Дж. Майер, М. Овердуин, М. Д. Реш, К. Б. Риос, Л. Сильверман, Дж. Куриян. 1992. Кристаллическая структура домена узнавания фосфотирозина Sh3 v- src в комплексе с тирозин-фосфорилированными пептидами. Природа 358: 646

  • Паскаль, С. М., А. У. Сингер, Г. Гиш, Т. Ямазака, С. Э. Шоулсон, Т. Поусон, Л. Э. Кей, Дж. Д. Форман-Кей. 1994. Ядерно-магнитно-резонансная структура Sh3-домена фосфолипазы C-gamma1 в комплексе с высокоаффинным связывающим пептидом.Сотовый 77: 461

  • Пери, К. Г., Ф. Г. Жерве, Р. Вейл, Д. Дэвидсон, Г. Д. Гиш, А. Вейетт. 1993. Взаимодействие домена Sh3 лимфоцит-специфической тирозинпротеинкиназы p56 lck с фосфотирозинсодержащими белками. Онкоген 8: 2765

  • О’Ши, Дж. Дж., Д. В. Маквикар, Т. Л. Бейли, К. Бернс, М. Дж. Смит. 1992. Активация Т-лимфоцитов периферической крови человека путем фармакологической индукции белково-тирозинового фосфорилирования.проц. Натл. акад. науч. США 89: 10306

  • Хатада, М. Х., С. Лу, Э. Р. Лэрд, Дж. Грин, Дж. П. Моргенштерн, М. Лу, К. С. Марр, Т. Б. Филлипс, М. К. Рам, К. Терио, М. Дж. Золлер, Дж. Л. Карас. 1995. Молекулярная основа взаимодействия протеинтирозинкиназы ZAP-70 с Т-клеточным рецептором. Природа 377: 32

  • Сунъян З., С. Э. Шоулсон, М. Чаудхури, Г.Гиш, Т. Поусон, В. Г. Хазер, Ф. Кинг, Т. Робертс, С. Ратнофски, Р. Дж. Лехлейдер, Б. Г. Нил, Р. Б. Бирдж, Дж. Э. Фахардо, М. М. Чоу, Х. Ханафуса, Б. Шаффхаузен, Л. К. Кэнтли. 1993. Домены Sh3 распознают специфические последовательности фосфопептидов. Сотовый 72: 767

  • Сунъян, З., С. Е. Шоулсон, Дж. Макгалд, П. Оливье, Т. Поусон, Р. Х. Бостело, М. Барбацид, Х. Сабе, Х. Ханафуса, Т. Йи, Р. Реу, Д. Балтимор, С. , Рамофски, Р.А. Фельдман, Л. К. Кэнтли. 1994. Специфические мотивы, распознаваемые доменами Sh3 csk, 3BP2, fes/fps, Grb-2, SHPTP1, SHC, Syk и vav. Мол. Клетка. биол. 14: 2777

  • Девиз, Д. Г., М. А. Муски, С. Э. Росс, Г. А. Корецкий. 1996. Тирозиновое фосфорилирование Grb2-ассоциированных белков коррелирует с активацией фосфолипазы Cγ1 в Т-клетках. Мол. Клетка. биол. 16: 2823

  • Холл, Х., Э. Дж.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.